Конверт на выписку своими руками для новорожденного

Приветствую вас, друзья, на страничках моего блога! Я рада, что вы снова заглянули в гости. Давайте поговорим сегодня, как сделать конверт на выписку своими руками, ведь каждой мамочке хочется создать для своего малыша что-то оригинальное и эксклюзивное.

Конверт на выписку своими руками: 5 подробных мастер-классов

Я подобрала для вас несколько схем пошива красивых аксессуаров для младенцев и обучающие мастер-классы, которые помогут легко освоить тонкости такой работы.

Летний конверт для новорожденного на выписку из роддома

Многие мамы, которые ожидают появление малыша на свет в конце весны или в самом начале лета предпочитают отказывать от приобретения конвертов. Действительно, в жаркую погоду он может и не понадобиться, но ведь стоит помнить и о переменчивости погоды, резком похолодании, когда ребенку может быть и не совсем комфортно.

Пошить конверт самостоятельно у вас получится довольно быстро и легко, а стоимость такого изделия будет намного ниже вариантов, которые предлагаются в магазинах.

Для пошива вам нужно подготовить:

• выкройку;
• миллиметровую бумагу;
• ножницы;
• ткань;
• кружево;
• ленты;
• иголки;
• булавки для портных;
• иголки;
• нитки подходящего цвета;
• швейную машинку.

Пошаговое изготовление конверта

1. Если вы решили делать такое изделие впервые, предлагаю воспользоваться уже готовой выкройкой. Распечатайте ее на принтере взяв указанные размеры за основу.
2. В реальном размере перенесите выкройку на подготовленную миллиметровую бумагу.
3. Учитывайте, что все детали будут двухслойными. Для внешнего слоя возьмите жаккард, его можно заменить атласом. Для внутреннего слоя лучше всего подойдут хлопчатобумажные ткани. При покупке материала учитывайте необходимые для работы размеры 135 см на 80 см.
4. Готовую выкройку из бумаги приложите к ткани, приколите булавками и обрисуйте, учитывая, что нужны небольшие припуски на швы.
5. Вырежьте заготовку будущего конверта.
6. Теперь пришла пора воспользоваться швейной машинкой. Сшейте внутренний, внешний слой.
7. Кружево вручную соберите небольшими оборками, пристрочите к верхней части конверта.
8. С помощью оверлока тщательно обработайте все края будущего изделия.

Остается лишь пришить ленты и конверт на лето готов. Можете украсить его бантом.

Видео мастер-класс по созданию конверта-одеяла

Чтобы вам были понятны все нюансы шитья очень красиво конверта на выписку малыша из роддома, я подобрала для вас видео с детальной инструкцией. Благодаря такому уроку вы сможете сделать самостоятельно не только летний, но и демисезонный вариант конверта, или порадовать свое новорожденное чудо тепленьким зимним аксессуаром.

Преимущество такой модели в том, что она может быстро превращаться в небольшое одеяло для ребенка. Впрочем, вы все увидите сами.

Как сшить конверт-трансформер

В последнее время все более актуальными и востребованными у молодых мам считаются модели трансформеров, которые достаточно легко можно превращать в спальный мешок для малыша, уютное одеяло или даже чехол в санки.

Если вам тоже нравится такая многофункциональная вещь, предлагаю посмотреть видео мастер-класс, в котором мастер раскрывает все секреты пошива изделия в домашних условиях. Стоит заметить, что такая вещь, сшитая своими руками, будет стоить гораздо дешевле вариантов, представленных в магазинах для детей.

Универсальный конверт на выписку для мальчика и девочки

Я предлагаю вам сделать еще один стильный конверт, подходящий для прохладной погоды, который по своей цветовой гамме можно назвать универсальным. На такую работу в среднем вам нужно будет потратить 4 часа своего времени.

Для работы вам нужно будет подготовить:

• флис;
• капитоний;
• нитки;
• хлопок;
• швейную машинку;
• молнию 90 см;
• пуговицы 4 шт.;
• длинную линейку;
• холлофайбер.

По себестоимости покупка таких расходников будет гораздо ниже, чем цена готового изделия.

Пошаговая инструкция к работе.

1. Из подготовленного бирюзового капитония и флиса вам нужно сделать отрезы одинаковых размеров 100 на 100.
2. Из 2-х отрезков ткани и выбранного наполнителя сделайте выкройку. Повторите те же размеры, что указаны на представленном фото. Помните что нужно еще сделать припуски на будущие швы.
3. В первую очередь вам нужно сшить наполнитель и флис. Для этой манипуляции требуется швейная машинка, сделайте продольный шов. Так наполнитель будет хорошо зафиксирован внутри и не будет сбиваться даже после частых стирок и длительной эксплуатации изделия. Посмотрите на фото, у вас должен получиться такой же результат.
4. На следующем этапе вам необходимо вшить молнию во внутреннюю сторону будущего конверта. В процессе работы сначала пришейте молнию к слою флиса, а после этого к лицевой стороне. Так будет намного проще.
5. Теперь следует сшить две части конверта, но на той стороне, где у вас отгиб, следует оставить небольшое отверстие, размером примерно 15-20 см. Через него вы сможете в конце без труда вывернуть конверт.
6. На стороне будущего капюшона сделайте две петельки под пуговицы. Лучше всего для этой цели использовать атласную ленту. Вы можете не делать этого, а просто пробить петли в самом материале, действуйте на свое усмотрение.
7. Через оставленное отверстие вам нужно вывернуть конверт и вручную аккуратно зашить его, делая скрытый шов.

Теперь вы можете сами убедиться, что, пошив конверта занимает не так много времени и под силу каждому желающему. Конечно, такую красоту нельзя оставлять без стильного декора. В качестве украшений я предлагаю вам использовать небольшие бантики.

Такую красоту можете прицепить к конверту булавкой или же просто пришить, делайте так, как вам удобнее.

Цвет банта выбирайте, учитывая пол будущего ребенка.

Я очень надеюсь, что эта идея приглянулась вам и вы решите воплотить ее в жизнь, готовясь к столь важному и радостному событию.

Как связать красивый конверт на выписку

Если вы хотите чего-то эксклюзивного и очень красивого для своего малыша, поэкспериментируйте с вязаным конвертом. Осваивать подобную технику лучше заранее, чтобы к сроку все было готово, а если вы умелая мастерица, то работа и вовсе не займет много времени.

Чтобы были понятны все нюансы работы, особенность набора петель и вывязывание узора, предлагаю вам посмотреть детальный мастер-класс.

Повторив изделие по такому уроку, вы получите не только конверт, но и очень красивое одеяло для новорожденного. Для холодного сезона можно добавить утеплитель, чтобы малыш не замерз, а вот для весны и прохладного лета такой вариант будет просто идеальным.

Запоминайте правила набора петель, следуйте рекомендациям мастера и наслаждайтесь полученным результатом.

Дорогие друзья, я предложила вам несколько вариантов создания разноплановых конвертов на выписку новорожденного. Надеюсь, вы решите сделать одно из таких изделий для себя, обязательно поделитесь результатами в комментариях.

Не забывайте подписывать на обновления блога, первыми читать свежие публикации и рассказывать о них друзьям в социальных сетях. Впереди много интересного, скоро увидимся!

С уважением, Анастасия Скореева

Конверт для новорожденного спицами ? мастер класс с описанием и схемами

Красивый вязаный конверт для младенца на выписку — отличный подарок для новорожденного малыша. Связанный из мягкой пряжи комплект обеспечит малышу тепло и уют во время прогулок. Конверт для новорожденного может быть теплым, связанным из трехнитьевой пряжи или тонким летним вариантом с разными узорами и рисунками.

Конверт, вязаный спицами, может быть украшен деталями, выполненными крючком. В некоторых случаях спальный вязаный конверт спицами выглядит как кокон.

Содержание материала

Принципиальная схема работы над конвертом

При вязании конверта для новорожденного спицами принято выбирать рельефный узор. Хороший мастер не ограничивается подбором интересной схемы, он уделяет не меньше внимания пряже интересных расцветок и подходящего качества, а также соответствующим спицам.

Изначально вяжется спинка. Набирают на спицы 72 петли и провязывают в соответствии со схемой. Рельефный узор начинает формироваться уже с 23 петли полотна. В вязаном конверте для новорожденного при достижении длины полотна в 48 см от наборного края, закрывают петли по 4 см с обеих сторон спинки для проймы. Связать еще 16,5 см полотна и закрыть все петли.

Вязание передней части отличается от спинки глубиной выреза горловины. В этом случае, начиная в 20 см от наборного края полотна, закрывают 4 петли и заканчивают раздельно. Для закругления выреза горловины в каждом 2-м ряду убавляют по 5 петель. Через пять сантиметров полотна закрывают оставшиеся петли. При вязании рукавов набирают на спицы 44 петли и провязывают резинку длиной в 3 см затем равномерно прибавляют 6 петель и вяжут рельефным узором. На скосы добавляют по 1 петле в каждом ряду. Всего 8 раз. Затем идут 2 см полотна без прибавления или удаления петель в соответствии с рисунком, и закрываются все петли.

При вязании капюшона набирают 78 петель и провязывают резинку длиной 2 см. Затем добавляют 6 пет. и следуют схеме. Через 9-10 см закрывают 24 петли и заканчивают.

Галерея: вязаный конверт для новорожденного (25 фото)

Инструменты и материалы

Для вязания детских вещей принято использовать круговые спицы диаметром 3,5 мм. Менее популярны спицы, имеющие большие размеры, диаметром 4 мм. Мастера рекомендуют вязать детский комплект на выписку длинными спицами или круговыми спицами. С их помощью удается справиться даже с самым сложным рисунком без риска потери петель.

Самое интересное на этапе подготовки для начинающих – выбор ниток. Под теплый конвертик выбираются плотные нити. Это может быть натуральная шерсть или комбинация шерстяной и синтетической нити. Нежная детская кожа остро реагирует на любую шершавость. Поэтому использование обычной собачьей шерсти в данном случае недопустимо. Многие описания рекомендуют использовать ангорку или козью шерсть. Такие нитки одновременно очень тонкие, ровные и теплые. Изделие получается всегда гладким и легким, что особенно важно для новорожденного.

Иногда нет возможности вязать из шерсти по какой-либо причине:

• отсутствие пряжи в местном магазине;
• аллергическая реакция;
• опасения, что ребенку будет не комфортно.

В таких случаях в вязанных конвертах для новорожденного используются легкие синтетические нитки. Для теплого изделия это обычно пушистый мохер.

Вязать летний конверт для новорожденного крючком проще, но не все владеют данной техникой. При вязании спицами летнего варианта особое внимание уделяется ниткам: подобрать тонкие и одновременно легкие достаточно проблематично.

Цветовое оформление

Детские вещи принято делать яркими. Любящие мамочки выбирают самые нежные, чистые и сочные цвета. Но каждый психолог скажет, что это мастер делает только для себя. Новорожденные не в состоянии первые 2 недели жизни различать цвет. Однако, против традиций идти не принято. Если веселые расцветки поднимают настроение молодой маме, то и ребенку от этого хорошо.

Когда конвертик вяжется не для выписки из роддома, а для более взрослого малыша, например, 3-5 месяцев, то внимание к цвету обязательно. Красные оттенки привлекают внимание, повышают раздражительность. Их можно использовать для небольших деталей, обвязки краев крючком.

Пастельные голубые, розовые, коричневые оттенки являются наиболее популярными. На таком фоне удачно смотрятся любые аппликации, узоры, и даже рельеф. В летнее время для легких конвертов можно использовать теплые оттенки зеленого. Он отлично сочетается с элементами синих, желтых оттенков.

При выборе цвета стоит обратить внимание на его практичность. Если новорожденный просто спит в коляске в конверте, то можно остановиться на любом понравившемся цвете. Если же предполагается, что малыша будут часто брать на руки любвеобильные бабушки, дедушки, тети и прочие родственники, то рекомендуется подобрать оттенок наименее маркий.

Виды конвертов для новорожденных

Вязать комплекты на выписку спицами и крючком в последнее время становится все популярнее благодаря оригинальному дизайну. Каждый малыш неповторим, все вокруг должны сразу понять насколько он уникален. Традиционно вязанный конверт выглядит небольшим мешочком с капюшоном. Но мастер, выполняющий работу для одного конкретного ребенка, может предусмотреть и наличие других деталей в модели.

1. Рукава. Они могут цельными с основной частью. Могут быть съемными. В летнем варианте их могут заменить лямочки подобные тем, что присутствуют в моделях сарафанов или комбинезонов.
2. Капюшон. Он может быть съемным или нет. Может разворачиваться в воротничок. Может служить местом для подушки во время прогулок. В этом случае он делается несколько глубже, чем предусмотрено в классическом описании.
3. Штанины. Обычно конверт выглядит мешочком, куда прячутся обе ножки. Но ребенок взрослее, начинает больше двигаться. В конверте может быть предусмотрен вариант разделения мешочка на две штанины с застежками кнопками или молнией.
4. Варежки и пинетки. В описании зимних конвертов на выписку часто предусматривается наличие варежек или пинеток. Они традиционно тонкие, выполненные крючком.
5. Объемная отделка. Различные карманы, цветочки, персонажи из мультфильмов. Чаще всего их выполняют крючком.

Вязаный конверт – это первая вещь, которую примерит ребенок в новом мире. Она должна быть удобной и уютной. Малышу не принципиально спицами или крючком выполнена работа, но заботливая мама должна позаботиться о качестве изделия. Так же можно связать красивое одеяло для малыша.

Другие схемы вязания

Бант и конверт на выписку (мини-МК)

Сшила для дочки на выписку конверт на выписку и бант. Сразу хочу сказать, что не люблю капрон, кружева и рюши, поэтому хотелось что-то более строгое и элегантное ))
На этой фотографии цвета немного не те, а вообще получилось нарядно.

Вот всё, что потребовалось (на конверт и на бант): основная ткань — 1 м, внутренняя ткань для конверта и для банта — 1,5 м, бязь (под цвет внутренней ткани) — 0,5 м, косая бейка — 1 м, синтепон — 1 м, молния разъемная — 50-55см, молния неразъемная — 20-25 см, нитки.

Про конверт рассказывать не буду, в интернете множество мастер-классов, я воспользовалась вот этим: ссылка удалена в соответствии с Пользовательским Соглашением сайта п.2.4.- на мой взгляд, всё очень подробно и понятно, спасибо автору.
А вот бант сама придумала, делюсь опытом )) Вырезаю из внутренней ткани и бязи по прямоугольнику, размеры — по желанию, у меня это примерно 40Х100 см. Складываю их вместе лицевой стороной внутрь и сгибаю пополам так, чтобы бязь оказалась сверху, а основная ткань банта — внутри. Закалываю и сшиваю по длинной стороне.

Затем, раскладываю получившийся «рукав» так, чтобы шов оказался по середине, и прострачиваю по узкой стороне.

Вот, что должно получиться. Это заготовка для основной части банта.

Теперь готовим «концы» банта, которые будут свисать. Для этого из основной ткани банта вырезаем прямоугольник, размеры — так же на ваше усмотрение, у меня примерно 20х50 см. Складываем пополам лицом внутрь. Закалываем булавками так, чтобы в итоге получить трапецию: концы будут скошены под углом 45 градусов. Длинная сторона трапеции получится без шва.

Незашитое место, чтобы вывернуть нашу деталь, я оставила по центру, т.к. в итоге это будет самое незаметное место. Поэтому начинаем с одного из углов и строчим чуть-чуть не доходя до середины короткой стороны (центр помечен у меня булавкой).

Потом оставляем незашитый кусок и строчим дальше, чуть отступив от центра до второго скошенного конца. Выворачиваем заготовку, незашитое место сшиваем потайным швом. Заготовка для свисающих концов банта готова.

Я решила, что бант будет не завязываться, а надеваться на конверт на широкой резинке. Сделаем для нее чехол. Для этого возьмем прямоугольник примерно 20х150 (чем длиннее он будет, тем красивее будет смотреться в итоге). Складываем его пополам лицом внутрь, прострачиваем по длинной стороне, выворачиваем. Я взяла резинку шириной 5 см, длину определила на глаз, так чтобы конверт ею стягивался. Также от этого «рукава» отрезаем кусок длиной примерно 25-30 см, он пригодится нам для оформления серединки банта.

Вдеваем резинку, вот что примерно получится.

Мне хотелось, чтобы конверт и бант представляли собой единое целое, комплект, поэтому для оформления серединки я взяла также основную ткань конверта. Вырезаем прямоугольник, у меня это примерно 15х20. Складываем пополам лицом наружу.

Затем складываем еще раз так, загибая с одной стороны не больше сантиметра, а с другой получится сторона со сгибом. Закалываем, строчим. Важно помнить, что эти швы будут лицевые.

Затем по другой стороне прокладываем вторую такую же строчку.

И третьим швом по середине сшиваем две заготовки для серединки банта.

Вернемся к основной части банта. Кладем ее лицевой стороной вниз, края загибаем внутрь внахлест. Размер получающейся детали — по желанию, лучше почаще прикладывать на конверт, чтобы посмотреть, что получится. Если с размером определились — обрабатываем незашитые края и сшиваем в кольцо. Нахлест придаст банту объем в середине, также как и вложенная внутрь бязь.

Итак, у нас получились 3 детали банта — серединка, основа и концы.

Их я еще раз примерила на конверт

Еще один нюанс, в ходе сборки банта выяснилось, что лучше будет смотреться, если у серединки чуть-чуть скосить концы. Их я просто аккуратно приметала.
Края клетчатой детали загибаем внутрь (как если бы подшивался рукав) и прострачиваем.

Формируем складки на основной части банта. Если все устраивает, вниз подкладываем согнутую пополам заготовку концов.

Фиксируем «на черновик» тесемкой и сшиваем вручную так, чтобы тесемку можно было снять.

Затем пришиваем сверху середину банта. С задней стороны аккуратно скрепляем вместе все детали.

Последний штрих — пришиваем бант к резинке. Готово!

фото удачных изделий и пошаговый МК по их изготовлению

Уютный и теплый конверт есть в гардеробе каждого малыша, и служит ему с первых дней жизни, сначала на выписку из роддома, потом для прогулок по улице. Связать его сможет любая мамочка, вложив в изделие свою любовь и заботу и, сделав его в единственном и неповторимом стиле. Вязаный конверт, который отлично подойдет на выписку из роддома для новорожденных получается удобный и компактный, а мягкая и теплая шерсть защитит кроху от непогоды.

Учимся делать вязаный конверт на выписку для новорожденных

Различают несколько моделей конвертов:

• Спальный кокон с капюшоном;
• Конверт с рукавами и капюшоном, с различными вязаными вставками и декоративными элементами в виде кружев и ленточек. Не мешает движению маленьких ручек;
• Конверт-плед, чтобы гулять с ребенком.

Объединяет все эти модели то, что малыш должен плотно лежать в конверте, поэтому необходимо внимательно рассчитать размер изделия. В первые месяцы детки быстро растут, и использовать конверт можно будет недолго. Конверт на выписку лучше связать в виде пледа с капюшоном без рукавов, так малышу будет теплее и уютнее. Он легко вяжется спицами даже начинающими рукодельницами, в него можно плотно завернуть кроху, а после роддома такой плед можно использовать, как одеяльце дома или на прогулке в коляске.

Обычно для таких конвертов делают специальную подкладку из теплых материалов (чаще всего из флиса), либо вяжут из мягкой пряжи рисунком без узоров. Для особо холодного климата с морозными зимами, между подкладкой и конвертом вставляют утепляющий синтепоновый слой. В качестве застежки для пледа используют кнопки или молнию по бокам. Пуговицы будет очень неудобно и долго застегивать, и могут мешать малышу.

В мастер-классе предлагается связать на спицах простую модель из полотна прямого покроя. Цвет пряжи можно выбрать в зависимости от пола ребенка и цветовых предпочтений родителей. Для вязания понадобится:

• Шерстяная пряжа на 50% шерсть, на 50% акрил;
• Спицы с номерами 3-3,5 для полотна конверта, 2,5 для подкладки;
• Материал для подкладки. Если она будет вязаная, то акриловая пряжа;
• Иголка и нитки;
• Застежки или молния.

Первым шагом нужно рассчитать количество необходимых петель для набора. Для этого вяжут образец узора спицами и пряжей, которые в дальнейшем будут использоваться для изделия. Стиль вязания может быть разный. В зависимости от величины конверта и вида узора, количество петель может меняться (главное, чтоб узор весь помещался).

Для вязаного конверта на выписку для новорожденного малыша ширина должна быть около 40 см (если у изделия в качестве застежки будут кнопки, то по 4 см с каждого бока нужно отнять на ширину клапанов). Длина будет около 125 см: 25 см-капюшон, оставшиеся 100 см-конверт.

В данном мастер-классе представлена модель, связанная с узором в виде кос. Сделан он в виде примера, узор может быть абсолютно любым, какой вам понравится.

Вяжем конверт своими руками:

1. Первым шагом провязывают платочной вязкой 4 см для отделочной планки, которая будет обрамлять конверт в районе груди ребенка.
2. Можно связать и простой резинкой 1 на 1.
3. Продолжаем вязать любимым узором необходимой длины, затем закрываем петли, начиная со второго края. Конверт можно сделать и без планки, в таком случае край перейдет в капюшон.
4. Далее в зависимости от вида застежки, вязание имеет несколько вариантов. Для молнии не нужна планка и полотно сразу будет вязаться на всю ширину. Если в качестве застежки выбраны кнопки, то с боков зимнего конверта выбираем петли и оформляем 4 см платочной вязкой или резинкой.
5. Петли необходимо закрыть и убрать, чтобы не было видно концы ниток. Для получения капюшона верхнюю сторону изделия складывают пополам и сшивают вместе.

Подкладка:

1. Подкладку можно связать из пряжи того же цвета, но толщина нити должна быть тоньше. По размеру подкладку будет меньше основного полотна. Заканчиваем работу такой же платочной вязкой или резинкой.
2. Между подкладкой и конвертом для новорожденного вставляем утепляющий слой и сшиваем все вместе. Верхнюю планку оставляем нетронутой, через нее вязание нужно будет вывернуть.
3. Молнию вшиваем между подкладкой и лицевой стороной конверта. Кнопки пришиваем к конверту на равном друг от друга расстоянии.
4. Осторожно соединяем подкладку с планкой и тщательно отпариваем готовый конверт.

При желании капюшон можно украсить кисточкой. Делать его просто: для шнура сложить нить в 4 раза, длиной около 8 см. Кисточку пришивают к капюшону перед подкладкой.

Видео-уроки по теме статьи

Несколько видео-уроков, о том, как связать конверт на выписку,  для более наглядного примера.

Страница не найдена — Chudopredki.ru

Вязание


0 просмотров

Сегодня мы научимся вязать красивое платье к лету Размеры платья: 34/36, 38/40, 42/44. Данные

Оплодотворение


0 просмотров

 Раздел который Вы открыли называется оплодотворение. Здесь мы будем выкладывать статьи на такие темы

Календарь беременности


0 просмотров

Шестой месяц беременности. Начинает расти животик все быстрее и быстрее. Маме все тяжелее долго

Праздничные стихи


1 просмотров

Очень интересные детские стихи про МасленицуПодборка стихов на масленицу для детей и взрослых, которые

Дизайн и интерьер


0 просмотров

Кухня – не только место встречи по утрам всех членов семьи, жаждущих успеть перехватить

Стихи о семье


0 просмотров

С кем пеpвым мы встpечаемся, Пpидя на белый свет, — Так это наша мамочка,

Мини мастер класс.

Конверт для новорожденного — 243 ответов на Babyblog

Как сшить конверт для новорожденного

Этот конверт сшит из трех слоев.

1 слой (внутренний) — флис

2 слой — 2 слоя синтепона (но синтепон тонкий). Слой синтепона вообще можно исключить если мы хотим сделать летний конверт.

3 слой (внешний) — в данном случае это плащевка, но можно использовать любую ткань. Я использовала и фланельку.

Итак, приступим. Первое что надо сделать определить в размерах вашего конверта. По отзывам девочек, которые шили себе конверты и потом их использовали я пришла к выводу, что оптимальный размер на первые три месяца 80х70 (ширина х длина)

Ширина сложиться пополам (когда мы застегнем молнию, а длина так и останется 70 см. Некотрые шили размерами и 90х90 но ребенок порой терялся в таком конверте (примерный рост ребенка при рождении 50-60 см. Вот и получиться что 90-50 = 40 см лишних …

Вообще размеры вы можете выбрать любые. Итак, я напишу для размеров 80х70.

1. Выкраиваем 3 одинаковых прямоугольника из флиса, синтепона и плащевки (если шьем теплый конверт то слоев синтепона можно сделать больше). Размер 82х72 (с учетом припусков на швы.)

2. Теперь выкраиваем кармашек . Карман кроим из основной ткани. Сам карман у нас будет размером 40х25 (но так как карман должен быть двойным, т.е. смотреться одинаково красиво и с лица и изнанки) делаем двойной и выкраиваем кармашек 40х50 . Тут припуски не нужны. Так как края кармашка будем обрабатывать косой бейкой и пришивать.

Складываем кармашек 40х50 пополам получаем прямоугольник 42х25.

Почиваем строчку примерно в 2 см от сгиба, чтобы свободно проходила резинка. (но и много отступать тоже не надо, иначе резинка будет болтаться). Вставляем резинку (сильно стягивать не надо). Закрепите резинку с двух сторон.

1. Теперь необходимо пришить карман к основе. Возьмем наш прямоугольник из основной ткани 82х72 и пришьем карман следующим образом:

Карман должен располагаться точно посередине.

Для того чтобы строчки были одинаково красивы и с лица и с изнанки, я обрабатываю края косой бейкой и пришиваю

Карман мы пришиваем только к основной такни (синтепон и флис сейчас лежит в сторонке) !!!

Когда приметаете карман к основной ткани выверните карман и проверьте, чтобы с изнанки он выглядел так же хорошо как и с лица!!!!!!!!!!!!!!

2. Теперь будем берем синтепон и флис. Я для надежности все же скрепила эти два слоя, чтобы синтепон не ерзал по одеялу (хотя при таких небольших размерах это возможно не обязательно. Для этого сложила два слоя (синтепон и флис), на флисе мелом наметила ромбики и прострочила (фигурной строчкой для красоты, можно и обычной). Тем самым соединив два слоя.

Теперь у нас готовы два слоя (синтепон и флис, скрепленные между собой) и основная ткань с кармашком.

3. Берем молнию разъемную 55 см основную и сантиметров 20 на верх. Наверх не обязательно разъемную, но разъемную легче вшить.

По бокам необходимо вставить молнии (с двух сторон). Я сначала приметывала молнии (к основной ткани )

Обязательно обратите внимание, чтобы застегнув молнии у вас все было ровно !!!

Я даже не знаю как описать как правильно пришить молнию …пробуйте, приметывайте смотрите….

На этой картинке молния уже вшита и показана на готовом изделии.

4. Итак складываем лицо к лицу флис с основной тканью. С наружной стороны получается изнанка с обоих сторон. И пришиваем оставив небольшое отверстие для того, чтобы потом вывернуть наш конвертик.

5. Выворачиваем и потайным швом зашиваем оставшуюся дырочку.

Конверт ГОТОВ!!!!!

Если что не понятно — спрашивайте. Конечно я далеко не профи .. и возможно делаю ошибки …. но чем смогу — помогу!!!!

а вот дополнение, которое придумала

Елена

вкладка в конвертик типа уголка

вот как это выглядит в готовом конверте

ниже есть еще примеры.

а вот тут http://www.womansterritory.ru/materinstvo/ot_0_do_3_let/879-kak-sshit-konvert-dlya-novorozhdennogo.html

более понятный и подробный мастер класс!!!!

как сделать своими руками для встречи мальчика и девочки из роддома

Рождение ребёнка – долгожданное и замечательное событие, сопровождающееся хлопотами и празднованием. Когда ребёнка забирают из роддома, его заворачивают в одеяло и перевязывают бантом, как подарок. Банты могут отличаться друг от друга в зависимости от сезона, погоды и личных предпочтений родителей. Многие счастливые родители ещё с зачатия ребёнка мечтают о классическом варианте выписки новорождённого или новорождённой – пышное одеяло и атласная лента розового или голубого цвета. …

Бант на конверт для выписки

Красиво и необычно
Ниже представлены видео и фото с подробными мастер классами по созданию нескольких видов бантиков. Каждый такой мастер класс рассказывает, как выполнить цветы kanzashi, банты из ленточек или на резинке, тканевые изделия.

Бант канзаши на выписку

Японская техника

Это украшение, выполненное по японской технике. Чтобы сделать пышный бант канзаши своими руками, нужно обладать аккуратностью и внимательностью. Такой бантик представляет собой цветок, лепестки которого сложены из ленточек. С этой целью ленту предварительно разрезают на полоски.

Бант из атласной ленты

Это очень быстро и легко

Если нет времени или возможности создавать сложные украшения, для конвертов новорожденных используют простой бант. Атласная ленточка – стандартное и стильное украшение, а завязывать бантики многие умеют с детства.

Главное – не забыть расплавить края ленты спичкой. Длина ленты зависит от сложности банта, который бывает одинарным или двойным. Украшения из атласных лент являются классикой.

Бант из ткани

Есть много видов ткани

Представляет собой оригинальный и стильный бантик, который можно повязать на конверте или украсить им коляску. Такие изделия выгодны тем, что фантазия ограничена только разнообразием тканей, которые вы захотите приобрести.

Украшение из ткани оригинально смотрится из обрезков, оставшихся после изготовления конверта для новорожденного. Так получается стильный набор на выписку.

МК бант на выписку

Существуют мастер классы, которые научат изготавливать разные виды бантов и лент с использованием креативных элементов. Например, ленты украшают вышивкой и стразами, в центр бантика помещают тканевое сердечко. Его изготавливают, используя флис.

Бант на резинке

Чтобы украшение легко крепилось, можно сшить резинку для него. С этой целью обычная резинка достаточной длины обшивается атласной лентой или тканью в цвет банта или подходящего цветового сочетания, после чего прострачивается с двух сторон от резинки. Такой вариант удобен тем, что бантик просто крепится к резинке.

Им не нужно обвязывать конверты или одеяло, он не будет слишком тугим или слабым, завязанным второпях, ведь резинка изготовлена заранее. Смотрятся такие изделия красиво и аккуратно. К резинке можно прикрепить большой бант из лент, ткани или цветы канзаши.

Бант на одеяло

Удобно в холодное время года

Если на выписку в родильный дом заготовлен не уголок, а детское одеяло, то удобней использовать украшение на резинке. Теплое одеяло используют вместо конверта, если новорожденный появился на свет в холодную пору года. Чтобы малыш не простудился, его одевают в комбинезончик и заворачивают в одеяльце.

На одеяло можно прикрепить пышный бантик из лент или ткани.

Порядок работы

Важнее всего — идея, которую придется воплощать. Можно почерпнуть мысль из мастер-классов по бантам на выписку. Обычно они включают поэтапное выполнение процесса работы с фотографиями или видеоролик.

Бантик можно сделать разноцветным, применив контрастные ленты, в него можно включить также:

• кружево;
• бусины;
• искусственные цветы;
• стразы;
• другие украшения, если они будут гармонично смотреться в общей композиции.

Популярный стиль канзаши в бантах на выписку тоже выглядит очень красиво. Для новичков складывание лепестков канзаши может вызвать некоторые затруднения, можно выполнить более простые варианты, которые комбинируются и дополняются собственными идеями.

Кроме лент нужного цвета и количества, украшений и прочих материалов, из которых будет состоять наш бант, надо приготовить:

• зажигалку или свечу для опаливания краев ленты;
• нитку с иголкой;
• пинцет;
• термопистолет с клеем;
• опытные мастерицы для отрезания ленты и одновременного опаливания краев используют специальный аппарат, которым также удобно обжигать лепестки канзаши, поэтому зажигалка им не требуется.

Центральная часть

Основному украшению полагается быть самым ярким и привлекающим внимание. Поэтому созданию центральной части банта следует уделить особое внимание.

Нижний ярус

Выполняются следующие действия:

1. Нарезаем ленты в соответствии с указанными в мастер-классе параметрами. Ленты шириной 5 см может понадобиться 6 отрезков длиной 13 см. Той же длины и в том же количестве отмеряем кружево шириной 2,5−3 см и узкую ленту шириной 12 мм (концы лент обжечь).
2. Накладываем отрезок кружева на отрезок широкой ленты в длину, чтобы он проходил посередине, и таким же образом накладываем самую узкую ленточку. Чтобы отрезки не смещались, можно, визуально поделив отрезок пополам, скрепить их каплей клея.
3. Собираем получившиеся лепестки на нитку, складывая их пополам. Нижний слой готов. Если есть желание сделать очень пышный бант, то можно собрать и средний ярус. Для этого нужно взять отрезки чуть короче, примерно по 11 см, можно использовать материал такой же ширины (5 см) или чуть уже (4 см). Нарезаем и обрабатываем края, как и в первом слое, также собираем на нить.

Оформляем серединку

Для серединки можно сделать небольшой георгинчик в стиле канзаши. Для этого нарезаем ленту (ширина 5 см) на квадраты, сворачиваем квадрат по диагонали и получившийся треугольник еще раз складываем пополам. Нижние углы соединяем, накладывая друг на друга. Формируется лепесток. Для основы георгина можно взять ватный диск или кружок из фетра диаметром 5−6 см. По краю диска на клей насадить первый ярус лепестков, укладывая их рядом друг с другом.

Отступив к середине располагаем второй ряд, он делается по принципу: новый лепесток приклеиваем между двумя из первого ряда. Третий ряд выполняется в таком же порядке, а четвертый будет завершающим, поэтому лепестки должны располагаться друг к другу настолько близко, чтобы образовать маленький цветочек. Его украшаем красивой серединкой из бусинок или страз по своему вкусу.

Собираем композицию

Средний ярус промазываем клеем ближе к середине (там, где собрано на нить) и вклеиваем в нижний, стараясь, чтобы лепестки цветка располагались не друг над другом, а в шахматном порядке. Затем наносим клей снизу на середину готового георгина и вклеиваем его в центр получившейся композиции.

Чтобы бант можно было снимать с ленты, которой перевязывают конверт с новорожденным, нужно сделать петельку для продевания ленты. Берем отрезок ленты, из которой выполнялся нижний ярус банта, длиной 8 см, обжигаем его края и аккуратно промазываем клеем примерно на 1−2 см. Приклеиваем ленту под бантом.

Завершающий этап

После того, как основная часть композиции будет готова, можно приступать к окончательному оформлению:

1. Длину ленты нужно рассчитать так, чтобы ее хватило на завязывание узла впереди и красивые длинные концы, которые тоже стоит украсить. Ленту можно сделать в 1−2 слоя, взяв контрастные цвета разной ширины и наложив их друг на друга, закрепляя каплей клея через равные промежутки. Главное, чтобы ширина получившейся ленты позволяла продеть ее через петлю на бантике. На концах ленточки можно сделать фигурные вырезы, свернув ее пополам и сделав косой срез, направленный к середине ленты. Осторожно обжигаем край, чтобы он не осыпался.
2. Для концов тоже выполняем небольшие украшения в том же стиле, что и главная композиция. Лучше всего сделать их в форме бантиков, взяв для этого отрезки широкой ленты по 16 см. По ним отмеряется столько же кружева и более узкой ленточки, как и при оформлении нижнего яруса банта. Скрепить посередине каплей клея, чтобы отрезки не смещались и формируем из них бантики.
3. Складываем концы каждого отрезка так, чтобы они находили друг на друга и образовывалось кольцо из ленты. Прошиваем нитью по ширине оба слоя ленты, чтобы концы не расходились, возвращаемся нитью обратно и стягиваем ее для бантика.
4. Для серединки тоже делаем украшения (можно по принципу основной композиции), но достаточно будет одного слоя лепестков и красивой серединки, которую можно сделать из крупной полубусины. Крепим с помощью клея цветок на бантик и все вместе пришиваем на конец ленты, отступив от фигурного среза примерно 10 см. В процессе пришивания, проходим в ширину по самой ленте, в несколько стежков, чтобы ее можно было стянуть по ширине, закрепляя сверху наше небольшое украшение.

Бант для выписки своими руками: мастер класс

Творческий человек может создавать одежду и поделки на выписку ребенку своими руками. Для этого потребуются следующие материалы:

• атласная лента понравившегося светлого оттенка, шириной 2-3 сантиметра и длиной не менее 4-х метров;
• аналогичная лента, но темней по тону;
• стразы или бусинки подходящего цвета;
• зажигалка или свеча;
• кружево;
• крепкая нить и иголка, либо клей.

Этапы изготовления:

1. Разрезать светлую ленту на кусочки, длиной 20 см, а темную на элементы длиной 17 см. Первые будут нижним слоем лепестков банта, вторые – верхним слоем.
2. Каждый кусочек сворачивается пополам, чтобы получился лепесток. Затем лепестки крепятся нитками или клеем по четыре в крестик, и два «крестика» складываются друг с другом, чтобы получились цветки из восьми лепестков.
3. Получившиеся два цветка накладываются друг на друга, чтобы края нижнего светлого выступали из-под краев верхнего равномерно.
4. Из тонкой полоски кружева складывается восьмерка и крепится в центре цветка. Можно сделать 2 полоски, создав третий нежный слой лепестков многослойного цветка-банта.
5. Из остатков светлой ленты складываются 6 клиновидных лепестков, полученный цветок крепится сверху на кружево. Чтобы сложить такой лепесток, кусочек тонкой ленто, длиной в 2 сантиметра, складывают наискосок, а затем кончики прикладываются друг к другу. При желании лепестки можно просто вырезать ножницами, чтобы получилась овальная форма, расплавив края ленты спичкой.
6. Последний этап – украшение серединки цветка бусинами или стразами. Блестками можно украсить лепестки первого и второго слоя цветка, тогда бант получится еще нарядней.

Самый простой вариант

Если навыков недостаточно, но очень хочется создать для малыша украшение, то можно попробовать изготовить очень простой, но при этом пышный и красивый бант.

Для него потребуется лента шириной 2,5 — 5 см. Из неё нужно формировать петельки у себя в руках. Размер петелек определяем «на глазок».

Чтобы они были одинаковыми, можно предварительно наметить места перегибов с изнанки.

Выполняются следующие этапы:

• набрав нужное количество завитков, посередине ниткой завязываем крепкий узел;
• обматываем еще несколько раз эту часть и снова завязываем на узел;
• петли аккуратно расправляем и обрезаем остатки ленты;
• не забываем обрабатывать края;
• концами лент можно обвязать основную ленточку, на которой будет крепиться наш пышный бант, и завязать на ней узел, или бант можно пришить к ней.

Как завязать красиво бант на выписку

Удобнее всего на резинке

Если вы покупаете набор для новорожденного, в его состав обычно уже входит лента из атласа или ажурного гипюра. Бант аккуратно завязывается посередине конверта: чем длиннее будет лента, тем пышней получится атласный бантик в итоге.

Если имеется готовый бант канзаши или сшитый из ткани, то лучше воспользоваться заранее заготовленной резинкой.

Астра канзаши для украшения

Это еще один оригинальный и красивый вариант получить бант на выписку канзаши. Для этого следует подготовить такие материалы:

• Цветная атласная лента, можно взять из одной палитры для плавного перехода цвета. Размеры ленты зависят от желаемого диаметра цветка.
• Фетровая подкладка для основания цветка.
• Термопистолет.
• Ножницы.
• Свеча, зажигалка или спички.
• Бусины, полудрагоценные камни, стразы, пайетки.

Когда все готово, можно приступать к выполнению:

1. Для начала необходимо порезать ленту на 70 равных отрезков. Количество лепестков зависит от диаметра фетровой основы и размеров ленты, а также желаемого размера цветка.
2. Для центральных лепестков отрезки ленты равны 7 см, но нарезая ленту, лепестки отрезать на 1 см короче.
3. Потом нужно начинать загибать первый лепесток с лицевой стороны наружу вдоль линии ленты.
4. Согнуть ленту, отрезать угол так, чтобы получился длинный и острый угол лепестка, затем край оплавить.
5. Противоположный край ленты загнуть изнаночной стороной наружу и скрепить между собой термопистолетом или сшить.
6. Таким способом обработать все отрезы ленты. Закончив все лепестки, собрать их в пышный цветок. Для этого вырезать круг из фетра диаметром 2,5 см.
7. Отступив от края примерно 1 см, приклеить первый лепесток.
8. Приклеить таким же методом следующие лепестки до конца круга.
9. После того как завершился первый круг, приклеить второй аналогично первому, но лепестки располагать ближе к центру так, чтобы их уголки располагались между лепестками на первом слое.
10. Продолжать крепить лепестки постепенно приближая к центру.

Лучшие подделки на выписку

Способы удивить и обрадовать

Создавать красивые поделки для новорожденных – это отличный способ поздравить молодую маму и малыша с выпиской из роддома:

1. Создание тортиков из памперсов для новорожденных — это возможность сделать полезный и красивый подарок, который порадует глаз и пригодится в будущем. Такие тортики создаются в Стране Мастеров из свернутых валиком памперсов и украшаются необходимыми для малыша мелочами: пинетками, игрушками.
2. Чтобы выписка из роддома прошла креативно и весело, родные готовят смешные плакаты и надписи, с которыми они встречают маму и малыша.
3. Если маму и младенца забирают на собственном автомобиле, то украшают машину. Существуют специальные наклейки, которыми украшают капот машины, а также ленты и бантики, воздушные шарики.
4. Хорошим подарком молодой семье становится и детский фотоальбом, особенно созданный своими руками. Его можно начать с фотографий, которые сделали в роддоме и во время выписки из родильного отделения.
5. Во время выписки новорождённый завернут в красивый праздничный конвертик, украшенный лентами и бантиками. Если для малыша подготовлена коляска, она тоже украшается цветами из лент и воздушными шариками.

История появления традиции

Банты на выписку из роддома своими руками можно выполнить в технике канзаши. Это вид творчества, при котором из различных тканей, органзы, атласных разноцветных лент выполняют оригинальные цветы.

Корни этого искусства идут из Японии. Именно там гейши декорировали свои кимоно и прически необычными цветами из шелка с драгоценными камнями. Использовать такие цветы в Японии, означает показать не только хороший вкус, значимость, возраст, но и семейное положение.

С появлением канзаши на Западе, они сразу потеряли свое прямое назначение и стали применяться, как обычный элемент декора. На сегодняшний день многие проводят специальные встречи, на которых подробно разбирают технику создания цветочных шедевров. Мастер — классы по изготовлению бантов на выписку собирают большую аудиторию. Бант на выписку может быть разнообразных цветов и оттенков.

ALM Busy Circuits NEW Pip Slope Mk2 II Compact Envelope Canada — Nightlife Electronics

«Pip Slope» (версия II) — это компактный генератор огибающей и функций. Он поддерживает огибающие как Attack / Decay, так и Attack / Sustain / Decay с прямым управлением и регулированием времени атаки и затухания по напряжению. Формы огибающей могут быть преобразованы между экспоненциальными, линейными и логарифмическими наклонами. Огибающие можно сделать циклическими, бесконечно повторяющимися или уменьшающимися со временем или амплитудой для эффектов типа эха и прыгающего мяча.Триггерный выход «End of Cycle» дополнительно расширяет функциональность огибающих как для синхронизации, так и для эффектов пакетного или заполняющего типа.

Улучшенный наклон точки добавляет ряд новых функций и обновлений по сравнению с исходной точкой наклона, сохраняя при этом тот же размер. Улучшения включают увеличенное выходное разрешение, более точное управление быстрыми огибающими, новый контроль формы морфинга, переключаемый максимальный уровень огибающей 5 В или 8 В, дополнительные режимы петли и дополнительный выход триггера.

• Ширина: 4HP
• Глубина: 38 мм
• Мощность: 30 мА при +12 В / 10 мА при -12 В
• Ручная

Характеристики

Видео

Фосфатидилсерин на конверте ВИЧ — кофактор инфицирования моноцитарных клеток

Реферат

ВИЧ-1 — ретровирус в оболочке, который приобретает свою внешнюю мембрану, когда вирион выходит из клетки. Из-за связи апоптоза с прогрессированием СПИДа можно ожидать, что ВИЧ-1-инфицированные Т-клетки или макрофаги будут экспрессировать повышенные уровни поверхностного фосфатидилсерина (ФС), что является признаком запрограммированной гибели клеток.Предполагается, что вирионы, продуцируемые этими клетками, также будут иметь PS на поверхности своих оболочек. В этом исследовании представлены данные, подтверждающие эту гипотезу и предполагающие, что PS необходим для макрофагальной инфекции. PS-специфический белок аннексин V использовали для обогащения вирусными частицами и для ингибирования репликации ВИЧ-1 в первичных макрофагах, но не в Т-клетках. Репликация ВИЧ-1 также значительно подавлялась везикулами, состоящими из PS, но не фосфатидилхолина. PS особенно необходим для инфекции ВИЧ-1, поскольку вирусы, псевдотипированные вирусом везикулярного стоматита G и оболочкой вируса амфотропного мышиного лейкоза, не ингибируются везикулами PS или аннексином V.Эти данные указывают на то, что PS является важным кофактором ВИЧ-1 инфекции макрофагов.

Вирус иммунодефицита человека — это ретровирус с оболочкой, проникновение которого в пермиссивные клетки-мишени зависит от рецептор-опосредованного слияния между вирусной и клеточной мембранами-мишенями. Связывание и слияние опосредуются белками вирусной оболочки gp120, который взаимодействует с рецепторами CD4 и хемокинов хозяина, и gp41, который содержит N-концевой слитый пептид. В последнее время внимание было сосредоточено на взаимодействии между gp120 и хемокиновыми рецепторами, особенно CXCR4 и CCR5, что позволило понять факторы, влияющие на тропизм ВИЧ-1, прогрессирование СПИДа и потенциальные новые стратегии лечения (1).Хотя CD4, хемокины и их рецепторы явно важны в установлении ВИЧ-инфекции, появляется все больше свидетельств того, что дополнительные поверхностные молекулы действуют как кофакторы для связывания и проникновения. Сообщения о первичных изолятах ВИЧ, которые инфицируют клеточные линии, лишенные рецепторов CD4 и хемокинов, предполагают, что в инфекции участвуют не охарактеризованные вспомогательные молекулы (2, 3, 4, 5). Кроме того, оболочка ВИЧ, которая приобретается при выходе вирусной частицы из клетки, включает белки и липиды, которые избирательно получают из мембраны хозяина.Было продемонстрировано, что включение белков-хозяев, таких как молекулы ICAM-1 и MHC-II, усиливает инфекцию, возможно, за счет связывания контррецепторов на клетках-мишенях и стабилизации взаимодействий вирус-клетка (6, 7, 8, 9, 10).

Хотя много внимания уделяется тому, как специфические белки опосредуют слияние вируса с клеткой, относительно мало известно о роли липидов в этом процессе. Присутствие различных липидов в мембранах клетки-мишени или вирусных мембран может существенно повлиять на инфекцию.Например, было показано, что гликосфинголипиды в мембранах клеток-мишеней увеличивают инфицирование ВИЧ (3, 11, 12, 13). Кроме того, вирусная оболочка, несмотря на то, что она была получена из клеток-хозяев, имеет липидный состав, который отличается от плазматической мембраны хозяина повышенными уровнями сфинголипидов, холестерина и некоторых видов фосфолипидов (14).

Одним из обогащенных мембранным фосфолипидом в оболочке ВИЧ является фосфатидилсерин (PS) ⁶ (14). PS обычно секвестрируется во внутреннюю створку бислоя плазматической мембраны.Однако во время апоптоза механизм, который обычно поддерживает PS во внутренней створке, подавляется (15), что делает возможным появление PS на поверхности клетки. Воздействие PS является признаком апоптоза и сигналом распознавания для фагоцитирующих клеток, которые очищают умирающие клетки (16, 17). Некоторые рецепторы макрофагов участвуют в распознавании PS на апоптотических клетках, включая различные рецепторы скавенджеров, CD36, CD14 и рецептор PS (PSR) (16). Таким образом, PS обладает продемонстрированной способностью опосредовать межклеточные взаимодействия и функционировать в качестве лиганда, что делает его появление в вирусной мембране весьма подозрительным как фактор слияния вируса с клеткой-мишенью.

Поскольку первичными мишенями ВИЧ-инфекции являются Т-клетки CD4 ⁺ и макрофаги, оболочка вируса приобретает специфические свойства этих клеточных плазматических мембран. После инфицирования ВИЧ-1 Т-клетки очень чувствительны к запрограммированной гибели клеток, а пиковые уровни апоптоза Т-клеток коррелируют с высокими уровнями репликации вируса (18). Более того, зрелые макрофаги конститутивно экспрессируют PS во внешнем листке своих плазматических мембран (19), хотя их предшественники, моноциты, этого не делают (20).Следовательно, можно ожидать, что ВИЧ-инфицированные Т-клетки и макрофаги будут иметь повышенные уровни поверхностного PS, а частицы ВИЧ-1, продуцируемые этими клетками, будут иметь PS, включенный во внешний листок их оболочек. Мы непосредственно проверили эту гипотезу и продемонстрировали, что PS присутствует на поверхности оболочки ВИЧ-1. Что еще более важно, наши результаты показывают, что этот фосфолипид является кофактором макрофагальной инфекции.

Материалы и методы

Ячейки

Моноцитарные клетки

U937 и THP-1 и Т-клетки Jurkat CD4 ⁺ культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 2 мМ глутамина и 10% FBS при 37 ° C в 5% CO ₂ .Клетки 293T культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS и инкубировали при 37 ° C в 5% CO ₂ .

Мононуклеарные клетки получали дифференциальным центрифугированием с использованием градиента фиколла / гипака (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури), как описано ранее (21). Макрофаги, происходящие из моноцитов (MDM), отделяли от лимфоцитов путем прикрепления к пластику в течение ночи и позволяли дифференцироваться in vitro в течение 5-7 дней до инфицирования. CD4 ⁺ Т-клетки очищали от фракции неприлипающих мононуклеарных клеток с использованием микрогранул Dynal, покрытых антителами против CD4 человека, и магнитного разделения (Dynal, Lake Success, NY), следуя протоколу производителя.

Генерация инфекционных титров и инфекций ВИЧ-1

Компетентные к репликации вирусы HXB.2, Ba-L и HXBnPLAP-IRES-N ⁺ (22) были получены путем трансфекции клеток 293T 15 мкг вирусных клонов ДНК и 3 мкг ДНК вируса саркомы Рауса-Rev кальцием. фосфатная трансфекция (23). Инфекционный вирус при множественности заражения 0,5–0,1 добавляли к клеткам в отсутствие или в присутствии везикул аннексина V, PS или фосфатидилхолина (PC) в указанных концентрациях.Инфекционную среду удаляли через 24 часа после заражения и заменяли свежей средой с аннексином V или фосфолипидными везикулами или без них. Для некоторых экспериментов в культуральную среду также добавляли 2 мМ CaCl ₂ . Репликацию вируса контролировали путем измерения обратной транскриптазы (RT), как описано ранее (21), или с помощью ELISA p24 (NEN, Бостон, Массачусетс). Очищенный в градиенте плотности сахарозы ВИЧ-1 IIIB, прошедший через Т-клетки H9, был получен от Advanced Biotechnologies (Колумбия, Мэриленд).

Гликопротеин вируса везикулярного стоматита (VSV-G) и ВИЧ-1, псевдотипированный вирусом амфотропного мышиного лейкоза (aMLV), был получен временной трансфекцией с использованием 15 мкг pNL43-Luc ⁺ Env ^— ДНК (24), 3 мкг ДНК pLTR (L) -VSV-G (25) и 3 мкг ДНК вируса саркомы Рауса-Rev.Заражение проводилось, как описано выше. Клетки собирали через 48 часов после инфицирования для анализа люциферазы с использованием системы анализа люциферазы Promega (Promega, Madison, WI).

Получение везикул аннексина V и фосфолипидов

Аннексин V был продуцирован и подвергнут аффинной очистке из бактериальной системы экспрессии, как описано ранее (26, 27). Единственная полоса, которая мигрировала при ~ 30 кДа, наблюдалась на окрашенном серебром 12% SDS-полиакриламидном геле после очистки.

Для получения липидных везикул PS бычьего мозга и PC яиц (Sigma-Aldrich) сушили в атмосфере азота, ресуспендировали в PBS встряхиванием и обрабатывали ультразвуком в течение 10 мин. Везикулы использовали в конечных концентрациях от 15 нМ до 1 мкМ (28).

Магнитное разделение вирионов и клеток, инфицированных ВИЧ-1

Система магнитной сепарации Dynal (Dynal) использовалась для обогащения вирионов и ВИЧ-1-инфицированных клеток. Dynabeads, покрытые аннексином V, получали путем инкубации гранул, конъюгированных со стрептавидином, с биотинилированным аннексином V.Гранулы, покрытые аннексином V, добавляли к разным концентрациям исходного материала вируса, с добавлением 2 мМ CaCl ₂ или 0,5 мМ EGTA и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Гранулы собирали с помощью магнита, и связанный вирус контролировали с помощью RT-активности или p24 ELISA.

Экспрессию плацентарной щелочной фосфатазы (PLAP) использовали в качестве положительного маркера для клеток, инфицированных вирусом HXBnPLAP-IRES-N ⁺ (22). Клетки PLAP ⁺ выделяли с использованием набора CELLection Pan Mouse IgG от Dynal, следуя протоколам производителя.Все мышиные IgG Dynabeads были покрыты мышиными антителами против PLAP (Sigma-Aldrich). Клетки, инфицированные HXBnPLAP-IRES-N ⁺ , инкубировали с шариками при 4 ° C в течение 15 мин в RPMI с добавлением 1% FBS. Магнит использовали для обогащения клеток PLAP ⁺ , которые были высвобождены из гранул путем инкубации с высвобождающим буфером Dynal. Экспрессию PLAP подтверждали проточной цитометрией (данные не показаны).

Проточная цитометрия

Клетки окрашивали на экспрессию PLAP с использованием первичных антител мыши против плацентарной щелочной фосфатазы человека (Sigma-Aldrich) и вторичных антител, конъюгированных с FITC, крысиного антитела против мышиного IgG2a (клон R19-15; BD PharMingen, San Diego, CA).Клетки, окрашенные только вторичным Ab, использовали в качестве отрицательного контроля. Для окрашивания аннексином V клетки ресуспендировали в буфере для окрашивания аннексина V (10 мМ HEPES / NaOH, pH 7,4, 140 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl ₂ ) перед окрашиванием аннексином V, конъюгированным с PE (BD PharMingen). Иодид пропидия был добавлен перед проточной цитометрией для удаления мертвых клеток (19). В качестве отрицательного контроля для всего окрашивания аннексином V клетки тщательно промывали в PBS без Ca ²⁺ перед добавлением аннексина V.

Клетки анализировали с использованием проточного цитометра EPICS-XL-MCL (Coulter Electronics, Hialeah, FL), оснащенного одним аргоновым ионным лазером мощностью 15 мВт, обеспечивающим возбуждение при 488 нм.FITC контролировали через полосовой фильтр с длиной волны 525 нм, тогда как PE регистрировали с помощью полосового фильтра с длиной волны 575 нм.

Анализ связывания вируса

ВИЧ-1 метили радиоактивной меткой путем добавления 1 мКи ³⁵ S-меченного 1-метионина (> 1000 Ки / мМ; ICN Biomedicals, Ирвин, Калифорния) в культуральную среду после трансфекции 293T. Меченые вирионы при множественности инфицирования 1–10 инкубировали с 1 × 10 ⁶ клеток / мл U937, THP-1 и MDM в присутствии или в отсутствие анти-CD4 Ab, растворимого CD4 (полученного из Национальных институтов США). Health AIDS Research and Reference Reagent Program), везикулы аннексина V, PS или PC в указанных концентрациях в течение ~ 3 ч при комнатной температуре.Клетки собирали центрифугированием, трижды промывали PBS перед обнаружением ассоциированного с клетками вируса путем измерения числа импульсов в минуту сцинтилляционным счетчиком Beckman LS 6000IC.

Результаты

Вирион ВИЧ-1 имеет внешний PS

ВИЧ-1-инфекция связана с повышенным апоптозом. Отличительной чертой апоптотических клеток является поверхностная экспрессия PS, фосфолипида, который обычно ограничен внутренним листком плазматической мембраны (16). Если клетки, инфицированные ВИЧ-1, претерпевают апоптоз, можно ожидать, что они будут экспрессировать PS на своей поверхности.Поэтому мы исследовали различные ВИЧ-1-инфицированные клетки на предмет поверхностного PS. Для идентификации и положительного отбора инфицированных клеток клетки инфицировали клоном, способным к репликации, который несет репортерный ген PLAP (22), и клетки, экспрессирующие PLAP, разделяли с помощью магнитных шариков. Затем ВИЧ-1-положительные и ВИЧ-1-отрицательные популяции исследовали на предмет поверхностного PS путем окрашивания флуоресцентным аннексином V, который специфически связывается с PS. В общей сложности 61% Т-клеток Jurkat и более 85% моноцитарных клеток U937 или THP-1, которые были PLAP-положительными, также положительно окрашивались аннексином V, тогда как менее 15% неинфицированных клеток в той же популяции имели поверхностный PS. (Рисунок.1⇓). Более 90% клеток были отрицательными по аннексину V до инфицирования (данные не показаны). Повышенный поверхностный PS также наблюдался на клетках U1, которые несут индуцибельный латентный провирус, после активации экспрессии вируса сложным эфиром форбола (рис. 1⇓), и на клетках 293T после временной трансфекции конструкций экспрессии кДНК ВИЧ-1 (данные не показаны). . Эти данные согласуются с предыдущими отчетами, которые показали корреляцию с репликацией ВИЧ-1 и клетками, положительными по окрашиванию аннексином V (18).

ФИГУРА 1.

Клетки, продуцирующие ВИЧ-1, имеют внешний PS. Клетки U937 ( A ), THP-1 ( B ) и Jurkat ( C ) инфицировали HXBnPLAP-IRES-N ⁺ в течение 6–9 дней. Клетки, экспрессирующие PLAP, были положительно отобраны с использованием магнитной сепарации Dynal, как описано в Materials and Methods , и окрашены на PS с использованием аннексина V (закрашенная гистограмма). Популяции клеток, лишенные ВИЧ-1-инфицированных клеток, также окрашивали на аннексин V (открытая гистограмма). D , необработанные клетки U1 (открытая гистограмма) или стимулированные PMA (закрашенная гистограмма) окрашивали аннексином V. Для этих экспериментов перед проточной цитометрией добавляли йодид пропидия для удаления мертвых клеток. Экспрессия вируса была подтверждена в этих экспериментах путем измерения активности RT (данные не показаны). Гистограммы для неокрашенных клеток, неинфицированных клеток или клеток, окрашенных в отсутствие Ca ²⁺ , не показали значительного окрашивания и полностью перекрывали профили для популяций клеток, лишенных ВИЧ-1-инфицированных клеток (данные не показаны).

Поскольку ВИЧ-1 приобретает свою оболочку при выходе из клетки, можно было бы ожидать, что вирион также будет иметь PS во внешнем листке своей мембраны. Это было проверено путем определения того, могут ли шарики, покрытые аннексином V, специфически связываться и разрушать ВИЧ-1. Первоначально мы использовали HXB.2, который экспрессирует CXCR4-тропную (X4) оболочку, упакованную в клетки 293T. В присутствии Ca ²⁺ , который необходим для PS-специфического связывания, гранулы, покрытые аннексином V, связывают значительные уровни ВИЧ-1, что определяется активностью RT или связанными уровнями p24 (рис.2⇓). Если Ca ²⁺ был истощен с помощью EGTA или использовались непокрытые шарики, значительного связывания ВИЧ-1 не было обнаружено (рис. 2⇓). Чтобы свести к минимуму контаминацию клеточной мембраны и гарантировать, что внешний PS на вирионе не является артефактом упаковки вируса в клетках 293T, мы использовали очищенный в градиенте сахарозы вирус IIIB, продуцируемый Т-клетками H9. В соответствии с приведенными выше результатами, покрытые аннексином V гранулы вытягивали ВИЧ из этого источника (рис. 2⇓ B ). Эти данные указывают на то, что ВИЧ-1 имеет PS на поверхности оболочки.

ФИГУРА 2.

вирионов ВИЧ-1 имеют PS во внешнем листке оболочки. A , Всего 1 × 10 ⁶ вирионов, полученных из трансфицированных клеток 293T, как описано в материалах и методах , добавляли к гранулам, конъюгированным со стрептавидином без покрытия, или гранулам, покрытым аннексином V, в присутствии 2 мМ CaCl ₂ или 0,5 мМ EGTA и инкубировали в течение 30 мин. Гранулы собирали с помощью магнита, и связанный вирус определяли по активности RT.Эти данные взяты из одного эксперимента, который представляет собой три независимых эксперимента, которые дали аналогичные результаты. B , Всего 1 × 10 ⁷ вирионов ВИЧ, полученных из Т-клеток H9 и сконцентрированных с помощью градиента сахарозы, добавляли к шарикам, покрытым аннексином V, как описано выше. Вирус, связанный с шариками, определяли с помощью анализов p24. Фоновое связывание, определенное с помощью гранул, конъюгированных со стрептавидином, вычитали из исходных значений. Эти данные представляют три независимых эксперимента, а полосы ошибок представляют собой одно стандартное отклонение.

PS усиливает инфицирование макрофагов ВИЧ-1

Аннексин V использовали для блокирования PS на поверхности вириона, чтобы определить, играет ли этот фосфолипид роль в инфекции ВИЧ-1. Т-клетки Jurkat и линии моноцитарных клеток U937 и THP-1 были инфицированы вирусом HXB.2 X4 в отсутствие или в присутствии аннексина V. Присутствие аннексина V не оказало значительного влияния на инфицирование Т-клеток Jurkat (рис. 3⇓). А ). Однако при инфицировании клеток U937 и THP-1 в присутствии аннексина V наблюдалось 8-кратное снижение продукции вируса (рис.3⇓). Инфекция IIIB, очищенная в градиенте сахарозы, также ингибировалась обработкой аннексином V (данные не показаны). Способность аннексина V ингибировать инфекцию моноцитарных клеток была дозозависимой (фиг. 3⇓ B и данные не показаны). Кроме того, экспрессия некомпетентного к репликации клона ВИЧ-люциферазы, который был псевдотипирован оболочкой HXB.2, ингибировалась на 80% в линиях моноцитарных клеток при инфицировании в присутствии аннексина V (фиг. 6– C ). Аналогичные результаты наблюдались при использовании первичных CD4 ⁺ Т-клеток и MDM.Как показано на фиг. 4⇓, аннексин V не влиял на инфицирование ВИЧ-1 первичных CD4 ⁺ Т-клеток, хотя он значительно ингибировал инфицирование MDM тропическими вирусами CCR5 (R5). Эти последние результаты демонстрируют, что это явление не ограничивается линиями моноцитарных клеток и не связано со специфическими оболочками ВИЧ. Кроме того, инфицирование ВИЧ-1 линиями моноцитарных клеток и MDM блокировалось на 60–80% искусственными липидными везикулами, состоящими из PS, тогда как везикулы, состоящие из фосфатидилхолина (PC), не оказывали значительного влияния на экспрессию ВИЧ-1 (рис.5⇓). Эти результаты демонстрируют, что PS является важным кофактором ВИЧ-1 инфекции моноцитов / макрофагов.

РИСУНОК 3.

Аннексин V подавляет инфицирование моноцитов / макрофагов. A , Jurkat T-клетки и моноцитарные клетки U937 были инфицированы HXB.2 в присутствии или в отсутствие 0,1 мкМ аннексина V. Репликацию вируса контролировали с помощью анализов RT через 6 дней после инфицирования. B , линия моноцитарных клеток THP-1 была инфицирована HXB.2 в присутствии различных концентраций аннексина V.Репликацию вируса контролировали на 8-й день после инфицирования.

РИСУНОК 4.

Аннексин V подавляет инфицирование первичных макрофагов. A , CD4 ⁺ Т-клетки инфицировали HXB.2 в присутствии или в отсутствие 0,1 мкМ аннексина V. Репликацию вируса контролировали на 6 день с помощью p24 ELISA. B , MDM были инфицированы ВИЧ Ba-L в отсутствие или в присутствии аннексина V, и RT-активность определялась через 9 дней после инфицирования. Каждая полоса представляет три независимых инфекции.Эти данные представляют собой единичные эксперименты, которые повторяли не менее трех раз. Планки погрешностей представляют собой одну SD.

РИСУНОК 5.

Везикулы

PS подавляют инфекцию ВИЧ-1. U937 и MDM были инфицированы либо HXB.2, либо Ba-L, соответственно, в отсутствие или в присутствии 15 нМ везикул PS или PC. Через шесть дней после инфицирования репликацию вируса контролировали с помощью анализов RT. Данные представлены в виде процента активности ОТ в необработанных инфицированных клетках. Каждая точка данных получена из трех независимых случаев заражения, а столбики ошибок представляют собой одно стандартное отклонение.Эти данные взяты из отдельных экспериментов, которые представляют собой три независимых эксперимента, которые дали аналогичные результаты.

Способность PS влиять на инфекцию ВИЧ-1 зависит от белков оболочки ВИЧ-1

Чтобы проверить, ингибируют ли везикулы аннексина V и PS специфически gp120-опосредованную инфекцию или эти реагенты приводят к более общему подавлению проникновения вируса, вирус люциферазы ВИЧ с дефектной репликацией был псевдотипирован с помощью VSV-G, который разрешает проникновение вируса. рецептор-опосредованный эндоцитарный путь или оболочка aMLV, в которой для входа используется натрий-зависимый фосфатный симпортер Pit-2 (29, 30).Эти вирусы использовали для заражения различных клеточных линий и первичных макрофагов, а экспрессию провирусов контролировали по активности люциферазы. Несмотря на доказательства того, что PS находился на поверхности различных псевдотипированных вирусов (данные не показаны), везикулы аннексина V или PS существенно не ингибировали экспрессию VSV-G-HIV-1 или aMLV-HIV-1, тогда как инфицирование HXB.2 X4 конверт был сильно скомпрометирован (рис. 6⇓, данные не показаны). Эти данные позволяют предположить, что PS является специфическим кофактором для проникновения ВИЧ-1 в моноцитарные клетки.

РИСУНОК 6.

gp120 требуется для ингибирования ВИЧ-1-инфекции аннексином V. Репликационно-некомпетентная ВИЧ-люцифераза, псевдотипированная VSV-G ( A ), aMLV ( B ) и конвертами HXB.2 ( C ). использовали для инфицирования указанных клеток в отсутствие или в присутствии 1 мкг анти-CD4 Ab, 0,1 мкМ аннексина V, 15 нМ везикул PS или везикул PC. Через сорок восемь часов после инфицирования ВИЧ-1 инфекцию определяли путем измерения активности люциферазы.Каждая полоса представляет не менее двух независимых инфекций. Планки погрешностей показывают 1 SD. Эти данные взяты из одного эксперимента, который проводился не менее трех раз.

Блокирование PS не изменяет связывание ВИЧ-1

Чтобы понять механизм, с помощью которого PS влияет на инфекцию ВИЧ-1, мы непосредственно оценили, влияют ли везикулы аннексина V или PS на связывание ВИЧ-1 с клетками-мишенями. Запасы инфекционных вирусов были помечены радиоактивной меткой путем упаковки в присутствии [ ³⁵ S] метионина.После инкубации с вирусом в течение 3 часов и нескольких промывок клетки собирали и связанный вирус определяли путем измерения ³⁵ S. Значительное связывание ВИЧ-1 с моноцитами U937 наблюдалось независимо от того, присутствовали ли везикулы аннексина V или PS, тогда как растворимый CD4 значительно блокирует связывание ВИЧ-1 (фиг. 7⇓). Подобные результаты наблюдались в экспериментах с клетками THP-1 и первичным MDM (данные не показаны). Следовательно, хотя PS на поверхности оболочки ВИЧ-1 усиливает инфицирование макрофагов ВИЧ-1, он не влияет на связывание вируса с клеткой-мишенью.

РИСУНОК 7.

Везикулы аннексина V и PS не ингибируют связывание ВИЧ-1. Клетки U937 совместно культивировали с ³⁵ S-меченым вирусом в течение 3 ч в отсутствие или в присутствии 5 мкг sCD4, 1 мкМ аннексина V, 15 нМ везикул PS или 15 нМ везикул PC. Клетки собирали центрифугированием и трижды промывали, а связанный вирус определяли путем измерения количества импульсов в минуту в осадке клеток. Каждая точка данных представляет как минимум три независимых заражения. Эти данные взяты из одного эксперимента, который проводился три раза.

Обсуждение

Взаимодействие между ВИЧ-1 и его клетками-мишенями является сложным и не объясняется полностью наличием или отсутствием CD4 и хемокиновых рецепторов, таких как CXCR4 и CCR5 (2, 31). Было показано, что несколько молекул, включая ICAM-1, LFA-1, MHCII, CD28, гликозаминогликаны и гликосфинголипиды на поверхности клетки и вируса, участвуют в инфекции ВИЧ-1, возможно, за счет стабилизации взаимодействий вирус-клетка или стимулирования пост-связывания. события (3, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 13, 32).Кроме того, была описана инфекция ВИЧ-1, независимая от рецепторов CD4 и хемокинов, что позволяет предположить, что новые рецепторы могут экспрессироваться на разных типах клеток (2).

Мало внимания было уделено липидному составу оболочки ВИЧ-1 или потенциальному значению липидов в процессе инфицирования. Анионные фосфолипиды, включая PS, были задействованы в качестве рецепторов и кофакторов для нескольких вирусов, включая VSV, рабдовирусы, гепатит B, вирусы гриппа, геморрагическая септицемия, вирус Сендай, вирус краснухи и вирус Синдбус (33, 34, 35, 36, 37). , 38, 39, 40).Характеристика липидного состава оболочки ВИЧ-1 показывает, что многие липиды, включая гликосфинголипиды, холестерин и PS, обнаруживаются в мембране с большей частотой, чем та, которая представлена ​​в мембране хозяина, что предполагает избирательное включение этих липидов (14). . Было продемонстрировано, что гликосфинголипиды на поверхности клетки усиливают инфекцию ВИЧ-1. Кроме того, оболочка ВИЧ-1 требует холестерина для организации и функционирования мембраны (41, 42, 43). При использовании модельных липосом было показано, что слияние ВИЧ-1 зависит от липидного состава, а везикулы кардиолипина ингибируют инфекцию (44, 45).Наши результаты добавят PS к этому короткому списку критических липидов, влияющих на инфекцию ВИЧ-1.

Мы демонстрируем, что PS находится во внешнем листке мембраны ВИЧ-1, и если этот липид блокируется аннексином V или за него конкурирует избыток PS, инфицирование моноцитарных клеток значительно подавляется. Поскольку ВИЧ-1 получает свою оболочку из клетки-хозяина, наблюдение, что PS находится во внешней створке вирусной мембраны, согласуется с исследованиями, которые показывают положительную корреляцию между репликацией ВИЧ-1 и апоптозом (18).Аннексин V, скорее всего, ингибирует инфекцию, блокируя PS на оболочке, а не на клетках-мишенях, потому что клетки не окрашиваются аннексином V до инфицирования. То, что эффект ограничен моноцитарными клетками и не распространяется на Т-клетки, предполагает участие PSR в макрофагах. Макрофаги экспрессируют множество рецепторов, которые распознают PS, включая членов семейства рецепторов-скавенджеров, β-интегрины, PSR и CD14 (см. Ссылки 16, 46 и 47), несмотря на то, участвует ли какой-либо из этих рецепторов в инфекции ВИЧ-1. не исследовано.Предварительные исследования предполагают ограниченную роль CD14 в инфицировании макрофагов ВИЧ-1, поскольку антитела, которые блокируют CD14, не оказывают отрицательного воздействия на проникновение вируса (данные не показаны).

Результаты, представленные в этом исследовании, предполагают, что распознавание PS рецепторами макрофагов не требуется для связывания вируса. Однако, задействуя специфические рецепторы макрофагов, PS может стабилизировать взаимодействие вируса с клеткой и способствовать более эффективному слиянию. Также возможно, что связанный с вирусом PS, взаимодействующий со специфическим рецептором или комплексом рецепторов, инициирует сигнальные каскады, которые активируют процессы в клетке-хозяине, такие как перестройки цитоскелета, необходимые для проникновения вируса.Это согласуется с недавней моделью, предложенной для фагоцитоза апоптотических клеток, которая предполагает, что при взаимодействии с PS, PSR трансдуцирует сигналы, необходимые для активации аппарата фагоцитоза (46, 48, 49).

PS, в силу своих физических свойств, может способствовать образованию вириона, более способного к слиянию. PS во внешнем листке мембран участвует в обеспечении слияния клеток, экзоцитоза и передачи сигналов (50, 51, 52). Исследования с эритроцитами показали, что жирные ацильные боковые цепи PS менее насыщены, чем боковые цепи других фосфолипидов, и что потеря мембранной асимметрии увеличивает текучесть мембран и гидрофобность поверхности (50).Следовательно, изменяя структуру и организацию мембраны, PS во внешнем двойном слое оболочки ВИЧ-1 может усиливать слияние и проникновение вируса.

Приведенные выше модели предполагают, что PS действует, влияя на проникновение вируса; однако везикулы аннексина V или PS не оказывают существенного влияния на прикрепление ВИЧ-1 к клеткам-мишеням, что позволяет предположить, что маловероятно, что PSR служат основными корецепторами для ВИЧ-1. Было высказано предположение, что по крайней мере один PSR на макрофагах отвечает не за связывание, а скорее за передачу сигнала (48).Кроме того, поглощение апоптотических клеток, которое требует внешнего PS, изменяет экспрессию цитокинов и функцию макрофагов (51, 52, 53, 54). Следовательно, возможно, что распознавание ассоциированного с вирусом PS макрофагами может напрямую влиять на обратную транскрипцию и / или провирусную транскрипцию или косвенно влиять на репликацию ВИЧ-1, изменяя микроокружение цитокинов. Хотя мы не наблюдали каких-либо эффектов на транскрипцию ВИЧ-1 в инфицированных моноцитах / макрофагах, обработанных аннексином V или везикулами PS, мы не можем исключить, что PS, распознаваемый в контексте вирусной частицы или апоптотической клетки, изменяет экспрессию ВИЧ-1 (54, 55).Текущие исследования сосредоточены на механизмах, с помощью которых PS влияет на репликацию ВИЧ-1, и на том, на каких стадиях жизненного цикла вируса действует этот липид.

Таким образом, наши данные демонстрируют, что PS во внешней створке вириона ВИЧ-1 имеет решающее значение для слияния ВИЧ-1 и проникновения в макрофаги. Помимо определения липидного кофактора, который влияет на инфекцию ВИЧ-1, и новых мишеней для блокирования проникновения ВИЧ-1, эти исследования предполагают, что общие свойства вирусных мембран влияют на инфекцию, тропизм и течение СПИДа.

Благодарности

Мы благодарим доктора Рут Коннор (Университет Брауна, Провиденс, Род-Айленд) за критическое чтение рукописи и щедрое предоставление вирусных клонов. Мы также благодарим доктора Бяо Хэ (Университет штата Пенсильвания) за критическое прочтение и обсуждение этой рукописи. Доктор Мари Водичка (Центр исследования рака Фреда Хатчинсона, Сиэтл, Вашингтон) предоставила конструкцию экспрессии VSV-G и клон HXBnPLAP-IRES-N ⁺ ; анти-CD4 и растворимый CD4 были получены от Национального института здравоохранения по исследованию СПИДа и программе эталонных реагентов.Элейн Кунце помогала с проточной цитометрией, а Центр клинических исследований Университета Пенсильвании помогал со сбором крови.

Сноски

• №1 Эта работа была частично поддержана фондами Программы грантов Консорциума наук о жизни Пенсильвании и гранта AI46261 Национальных институтов здравоохранения для R.A.S. и A.J.H.

• ↵2 M.K.C. и P.M.P. внес равный вклад в эту работу.

• ↵3 Текущий адрес: Cleveland Clinic Foundation, Отдел неврологии NC3-106, 9500 Euclid Avenue, Cleveland, OH 44195.

• ↵4 Текущий адрес: Департамент клинической неврологии, Университет Калгари, 3330 Hospital Drive, NW, Calgary, AB T2N 4N1, Canada.

• №5 Направляйте корреспонденцию и запросы на перепечатку доктору Эндрю Дж. Хендерсону, Департамент ветеринарии, Лаборатории иммунологических исследований, Государственный университет Пенсильвании, 115 Хеннинг-билдинг, Юниверсити-Парк, Пенсильвания 16802.Электронный адрес: ajh6 {at} psu.edu

• №6 В статье использованы сокращения: PS, фосфатидилсерин; aMLV, вирус амфотропного мышиного лейкоза; MDM, макрофаг, происходящий из моноцитов; ПК, фосфатидилхолин; PLAP, плацентарная щелочная фосфатаза; PSR, рецептор PS; RT — обратная транскриптаза; VSV-G, гликопротеин вируса везикулярного стоматита.

• Получено 30 мая 2002 г.
• Принято 27 февраля 2003 г.

• Авторское право © 2003 Американская ассоциация иммунологов

Ссылки

1. ↵

   Бергер, Э.А., П. М. Мерфи, Дж. М. Фарбер. 1999. Хемокиновые рецепторы как корецепторы ВИЧ-1: роль в проникновении вирусов, тропизме и болезнях. Анну. Rev. Immunol. 17: 657.

2. ↵

   Панг, С., Д. Ю, Д. Ан, Г. Болдуин, Ю. Се, Б. Пун, Ю. Чоу, Н. Парк, И. Чен. 2000. Вирус иммунодефицита человека env -независимая инфекция человеческих клеток CD4 ^— . J. Virol. 74: 10994.

3. ↵

   Харуз, Дж., С. Бхат, С. Спитальник, М. Лафлин, К. Стефано, Д. Зильберберг, Ф. Гонсалес-Скарано. 1991. Ингибирование проникновения ВИЧ-1 в линии нервных клеток антителами против галактозилцерамида. Наука 253: 320.

4. ↵

   Эндрес, MJ, PR Clapham, M. Marsh, M. Ahuja, JD Turner, A. McKnight, JF Thomas, B. Stoebenau-Haggarty, S. Choe, PJ Vance, et al. 1996. CD4-независимая инфекция, вызванная ВИЧ-2 опосредуется фузином / CXCR4.Ячейка 87: 745.

5. ↵

   Talbot, S.J., R.A. Weiss, T. F. Schulz. 1995. Снижение гликозилирования клеточных линий человека увеличивает восприимчивость к CD4-независимой инфекции вирусом иммунодефицита человека типа 2 (LAV-2 / B). J. Virol. 69: 339.

6. ↵

   Фортин, Дж. Ф., Р. Кантин, Дж. Ламонтань, М. Трембле. 1997. Производные от хозяина гликопротеины ICAM-1, включенные в вирус иммунодефицита человека типа 1, являются биологически активными и усиливают вирусную инфекционность.J. Virol. 71: 3588.

7. ↵

   Фортин, Дж. Ф., Р. Кантин, М. Дж. Тремблей. 1998. Т-клетки, экспрессирующие активированный LFA-1, более восприимчивы к инфицированию частицами вируса иммунодефицита человека типа 1, несущими кодируемый хозяином ICAM-1. J. Virol. 72: 2105.

8. ↵

   Риццуто, К., Дж. Содроски. 1997. Вклад вириона ICAM-1 в инфекционность вируса иммунодефицита человека и чувствительность к нейтрализации.J. Virol. 71: 4847.

9. ↵

   Кантин Р., Дж. Ф. Фортин, Г. Ламонтань, М. Трембле. 1997. Приобретение гликопротеинов класса II главного комплекса гистосовместимости, происходящих от хозяина, вирусом иммунодефицита человека типа 1 ускоряет процесс проникновения вируса и инфицирования в Т-лимфоидные клетки человека. Кровь 90: 1091.

10. ↵

    Hioe, C., P. Chien, C. Lu, T. Springer, X. Wang, J. Bandres, M.Tuen. 2001. Экспрессия LFA-1 на клетках-мишенях способствует инфицированию и передаче вируса иммунодефицита человека типа 1. J. Virol. 75: 1077.

11. ↵

    Puri, A., P. Hug, K. Jergnigan, J. Barchi, H.-E. Ким, Дж. Гамильтон, Дж. Вильс, Дж. Дж. Мюррей, Р. О. Брэди, Р. Блюменталь. 1998. Нейтральный гликосфинголипид глоботриаозилцерамид способствует слиянию, опосредованному CD4-зависимым CXCR4-утилизирующим гликопротеином оболочки ВИЧ типа 1. Proc. Natl. Акад.Sci. США 95: 14435.

12. ↵

    Hug, P., H.-M. Дж. Линь, Т. Корте, Х. Сяо, Д. С. Димитров, Дж. М. Ван, А. Пури, Р. Блюменталь. 2000. Гликосфинголипиды способствуют проникновению широкого диапазона изолятов вируса иммунодефицита человека типа 1 в клеточные линии, экспрессирующие CD4, CXCR4 и / или CCR5. J. Virol. 74: 6377.

13. ↵

    Хаммаче, Д., Н. Яхи, М. Мареска, Г. Пьерони, Дж. Фантини. 1999 г.Гликосфинголипиды эритроцитов человека как альтернативные кофакторы для проникновения вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1): доказательства индуцированного CD4 взаимодействия между gp120 ВИЧ-1 и восстановленными мембранными микродоменами гликосфинголипидов (Gb3 и GM3). J. Virol. 73: 5244.

14. ↵

    Алоя, Р. К., Х. Тиан, Ф. К. Йенсен. 1993. Липидный состав и текучесть оболочки вируса иммунодефицита человека и плазматических мембран клеток-хозяев. Proc. Natl.Акад. Sci. США 90: 5181.

15. ↵

    Verhoven, B., R.A. Schlegel, P. Williamson. 1995. Механизмы воздействия фосфатидилсерина, сигнала распознавания фагоцитов, на апоптотические Т-лимфоциты. J. Exp. Med. 182: 1597.

16. ↵

    Шлегель Р. А., П. Уильямсон. 2001. Фосфатидилсерин, похоронный звон. Смерть клетки отличается. 8: 551.

17. ↵

    Фадок, В.А., Д. Р. Фолькер, П. А. Кэмпбелл, Дж. Дж. Коэн, Д. Браттон, П. Хенсон. 1992. Воздействие фосфатидилсерина на поверхность апоптотических лимфоцитов запускает специфическое распознавание и удаление макрофагами. J. Immunol. 148: 2207.

18. ↵

    Гербейн, Г., К. Ван Линт, Дж. Л. Ловетт, Э. Вердин. 1998. Различные механизмы запускают апоптоз в инфицированных вирусом иммунодефицита человека 1-го типа и в неинфицированных случайных Т-лимфоцитах. J. Virol.72: 660.

19. ↵

    Каллахан М., П. Уильямсон, Р. А. Шлегель. 2000. Поверхностная экспрессия фосфатидилсерина на макрофагах необходима для фагоцитоза апоптотических тимоцитов. Смерть клетки отличается. 7: 645.

20. ↵

    Тейт, Дж. Ф., К. Смит, Б. Л. Вуд. 1999. Измерение экспозиции фосфатидилсерина в лейкоцитах и ​​тромбоцитах с помощью проточной цитометрии цельной крови с аннексином V. Blood Cells Mol.Дис. 5: 271.

21. ↵

    Хендерсон А.Дж., Каламе К.Л. 1997. Сайты CCAAT / связывающего белка энхансера (C / EBP) необходимы для репликации ВИЧ-1 в первичных макрофагах, но не в Т-клетках CD4 ⁺ . Proc. Natl. Акад. Sci. США 94: 8714.

22. ↵

    Чен, Б., Р. Ганди, Д. Балтимор. 1996. Понижающая модуляция CD4 во время инфицирования человеческих Т-клеток вирусом иммунодефицита человека типа 1 включает независимые активности vpu , env и nef .J. Virol. 70: 6044.

23. ↵

    Груша, В. С., Г. П. Нолан, М. Л. Скотт, Д. Балтимор. 1993. Производство беспомощных ретровирусов с высоким титром с помощью временной трансфекции. Proc. Natl. Акад. Sci. США 90: 8392.

24. ↵

    Коннор, Р., Б. Чен, С. Чоу, Н. Ландау. 1995. Vpr требуется для эффективной репликации вируса иммунодефицита человека типа 1 в мононуклеарных фагоцитах. Вирусология 206: 936.

25. ↵

    Барц С., Водичка М. 1997. Получение высокотитрового вируса иммунодефицита человека типа 1, псевдотипированного гликопротеином вируса везикулярного стоматита. Методы 12: 337.

26. ↵

    Burger, A., R. Berendes, D. Voges, R. Huber, P. Demange. 1993. Быстрый и эффективный метод очистки рекомбинантного аннексина V для биофизических исследований. FEBS Lett. 329: 25.

27. ↵

    Кралинг, С., М. К. Каллахан, П. Уильямсон, Р. А. Шлегель. 1999. Воздействие фосфатидилсерина является общим признаком фагоцитоза апоптотических лимфоцитов макрофагами. Смерть клетки отличается. 6: 183.

28. ↵

    Прадхан Д., П. Уильямсон, Р. А. Шлегель. 1994. Везикулы фосфатидилсерина ингибируют фагоцитоз эритроцитов с симметричным трансбислойным распределением фосфолипидов. Мол. Membr. Биол. 11: 181.

29. ↵

    ван Зейл, М., С. В. Йоханн, Э. Клосс, Э. Каннингем, Р. Дж. Эдди, Т. Б. Шоу, Б. О’Хара. 1994. Рецептор амфотропного ретровируса человека является вторым членом семейства рецепторов вируса лейкемии обезьян гиббонов. Proc. Natl. Акад. Sci. США 91: 1168.

30. ↵

    Миллер, Д. Г., Р. Х. Эдвардс, А. Д. Миллер. 1994. Клонирование клеточного рецептора амфотропных мышиных ретровирусов обнаруживает гомологию с рецептором вируса лейкемии обезьян гиббонов. Proc. Natl. Акад. Sci.США 91:78.

31. ↵

    Домс, Р., Д. Троно. 2000. Плазматическая мембрана как зона боевых действий на поле битвы с ВИЧ. Genes Dev. 14: 2677.

32. ↵

    Giguere, J. F., J. S. Paquette, S. Bounou, R. Cantin, M. J. Tremblay. 2002. Новое понимание функциональности заякоренного вирионом белка мембраны клетки-хозяина: CD28 по сравнению с ВИЧ типа 1. J. Immunol. 169: 2762.

33. ↵

    Шлегель Р., Т. С. Тралка, М. Уиллингем, И. Пастан. 1983. Ингибирование связывания VSV и инфекционности фосфатидилсерином: является ли фосфатидилсерин сайтом связывания VSV ?. Ячейка 32: 639.

34. ↵

    Хуанг Р. Т. К., Б. Лихтенберг, Р. Оливер. 1996. Участие аннексина V в проникновении вирусов гриппа и роль фосфолипидов в инфекции. FEBS Lett. 392: 59.

35. ↵

    Луан П., Ян Л., М.Глейзер. 1995. Формирование мембранных доменов, созданных во время почкования вируса везикулярного стоматита: модель для селективной сортировки липидов и белков в биологических мембранах. Биохимия 34: 9874.

36. ↵

    Эстепа А., Дж. М. Coll. 1996. Картирование пепсаном и связанные со слиянием свойства главного фосфатидилсерин-связывающего домена гликопротеина вируса вирусной геморрагической септицемии, рабдовируса лосося. Вирусология 216: 60.

37. ↵

    Мастромарино, п., Л. Чиое, С. Риети, Н. Орси. 1990. Роль мембранных фосфолипидов и гликолипидов в рецепторе клеточной поверхности Vero для вируса краснухи. Med. Microbiol. Иммунол. 179: 105.

38. ↵

    Кугэ, О., Я. Акамацу, М. Нисидзима. 1989. Абортивная инфекция вирусом Синдбис мутантных клеток яичников китайского хомячка, дефектных по биосинтезу фосфатидилсерина и фосфатидилэтаноламина. Биохим. Биофиз. Acta 986: 61.

39. ↵

    Ойэ, М.. 1985. Обратимая инактивация и реактивация вируса коровьей оспы путем изменения липидного состава вируса. Вирусология 142: 299.

40. ↵

    Neurath, A. R., N. Strick. 1994. Предполагаемые клеточные рецепторы вируса гепатита B (HBV), аннексина V и аполипопротеина H связываются с липидными компонентами HBV. Вирусология 204: 475.

41. ↵

    Манес, С., Г. дель Реаль, Р. А. Лакаль, П. Лукас, К. Гомес-Мутон, С.Санчес-Паломино, Р. Дельгадо, Дж. Алками, Э. Мира, К. Мартинес-А. 2000. Микродомены мембранных рафтов опосредуют латеральные сборки, необходимые для ВИЧ-1 инфекции. Отчеты EMBO 1: 190.

42. ↵

    Раулин Дж. 2000. Липиды и ретровирусы. Липиды 35: 123.

43. ↵

    Оно, А., Э. Фрид. 2001. Рафты плазматических мембран играют решающую роль в сборке и высвобождении ВИЧ-1. Proc. Natl. Акад. Sci. США 98: 13925.

44. ↵

    Ларсен, К. Э., С. Нир, Д. Р. Алфорд, М. Дженнингс, К. Д. Ли, Н. Дузгунес. 1993. Слияние вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) с модельными мембранами: кинетический анализ и роль липидного состава, pH и двухвалентных катионов. Биохим. Биофиз. Acta 1147: 223.

45. ↵

    Конопка, К., Б. Дэвис, К. Ларсен, Д. Алфорд, Р. Дебс, Н. Дюзунес. 1990. Липосомы модулируют инфекционность вируса иммунодефицита человека.J. Gen. Virol. 71: 2899.

46. ↵

    Henson, P., D. Bratton, V. Fadok. 2001. Рецептор фосфатидилсерина: решающий молекулярный переключатель ?. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. I2: 627.

47. ↵

    Ханаяма Р., М. Танака, К. Мива, А. Шинохара, А. Ивамацу, С. Нагата. 2002. Идентификация фактора, связывающего апоптотические клетки с фагоцитами. Природа 417: 182.

48. ↵

    Фадок, В.А., Д. Л. Браттон, Д. М. Роуз, А. Пирсон, Р. А. Эзекевиц, П. М. Хенсон. 2000. Рецептор фосфатидилсерин-специфического клиренса апоптотических клеток. Природа 405: 85.

49. ↵

    Хоффманн, П. Р., А. М. де Кателине, К. А. Огден, Ю. Леверье, Д. Л. Браттон, Д. Л. Далеке, А. Дж. Ридли, В. А. Фадок, П. М. Хенсон. 2001. Фосфатидилсерин (PS) индуцирует макропиноцитоз, опосредованный рецепторами PS, и способствует удалению апоптотических клеток.J. Cell Biol. 155: 649.

50. ↵

    Уильямсон П., Р. А. Шлегель. 1994. Туда и обратно: регуляция и функция трансбислойного движения фосфолипидов в эукариотических клетках. Мол. Membr. Биол. 11: 199.

51. ↵

    Диллон, С. Р., М. Манчини, А. Розен, М. С. Шлиссель. 2000. Аннексин V связывается с жизнеспособными В-клетками и колокализуется с маркером липидных рафтов при активации рецептора В-клеток.J. Immunol. 164: 1322.

52. ↵

    Санчес-Мигаллон, М. П., Ф. Дж. Аранда, Дж. К. Гомес-Фернандес. 1994. Роль фосфатидилсерина и диацилглицерина в слиянии хромаффинных гранул с целевыми мембранами. Arch. Биохим. Биофиз. 314: 205.

53. ↵

    Мантовани, А., С. Соццани, М. Локати, П. Аллавена, А. Сика. 2002. Поляризация макрофагов: ассоциированные с опухолью макрофаги как парадигма поляризованных мононуклеарных фагоцитов M2.Trends Immunol. 23: 549.

54. ↵

    Корнблут, Р.С. 1994. Иммунологический потенциал апоптотического дебриса, продуцируемого опухолевыми клетками и во время ВИЧ-инфекции. Иммунол. Lett. 43: 125.

55. ↵

    Фадок В. А., Д. Л. Браттон, А. Коновал, П. В. Фрид, Дж. Ю. Весткотт, П. М. Хенсон. 1998. Макрофаги, которые проглотили апоптотические клетки in vitro, подавляют выработку провоспалительных цитокинов посредством аутокринных / паракринных механизмов с участием TGF-β, PGE2 и PAF.J. Clin. Вкладывать деньги. 101: 890.

Платье-конверт темно-синего цвета для Августа Tulip Twist

Платье-c / o Тюльпан (экономия, вариант в полоску) | Каблуки-DSW (сэкономьте, потратитесь) | Сумка-ифчик (сэкономьте, потратитесь) | Ожерелье-c / o Happiness Boutique (сэкономь, разорись) | Watch-MK c / o Shopbop (сэкономь, разорись) | Браслеты-Alex & Ani (похожие, похожие)

Мне посчастливилось участвовать в нескольких Tulip Twists. Приятно развивать отношения с бутиками и иметь возможность сотрудничать с ними снова и снова.Раньше я создавала бордовое платье, бордовые леггинсы, топ с рисунком в двух направлениях, жилет, платье в горошек и это платье от Tulip. Сегодня я снова участвую в Tulip Twist в этом супер-милом темно-синем платье-конверте. Голосование проводится только сегодня, и я был бы очень признателен, если бы вы могли зайти на страницу Tulip в facebook и проголосовать за меня, как только они проголосуют! Я также хотел поблагодарить всех вас за сладкие пожелания на день рождения. Это был насыщенный, но замечательный день!

Платье-c / o Тюльпан (экономия, вариант в полоску) | Каблуки-DSW (сэкономьте, потратитесь) | Сумка-ифчик (сэкономьте, потратитесь) | Ожерелье-c / o Happiness Boutique (сэкономь, разорись) | Watch-MK c / o Shopbop (сэкономь, разорись) | Браслеты-Alex & Ani (похожие, похожие)

Платье-c / o Тюльпан (экономия, вариант в полоску) | Каблуки-DSW (сэкономьте, потратитесь) | Сумка-ифчик (сэкономьте, потратитесь) | Ожерелье-c / o Happiness Boutique (сэкономь, разорись) | Watch-MK c / o Shopbop (сэкономь, разорись) | Браслеты-Alex & Ani (похожие, похожие)

Платье-c / o Тюльпан (экономия, вариант в полоску) | Каблуки-DSW (сэкономьте, потратитесь) | Сумка-ифчик (сэкономьте, потратитесь) | Ожерелье-c / o Happiness Boutique (сэкономь, разорись) | Watch-MK c / o Shopbop (сэкономь, разорись) | Браслеты-Alex & Ani (похожие, похожие)

соединяется с четвергами Fashion Files What I Wore to Work, Thursday Style Finds, Spotlight Weekly, Happiness at Midlife, The Red Closet Diary, High Latitude Style, Thursday Moda, A Labor of Life, Rachel the Hat, Friday’s Fab Любимые, Веселая мода пятницы, Избранное пятницы Сказочная пятница, Мода пятницы, Шикарная стильная мама, Шила пишет, В преддверии недели, Берди стреляет

Взаимосвязь структуры и функции последовательности оболочки ВИЧ-1 — вариабельные области Дизайн вакцины для перефокусировки

Гликопротеины gp120 и gp41 оболочки ВИЧ (Env) являются мишенями антител, которые ингибируют инфекционность вируса, и пытаются индуцировать эти антитела с профилактическим действием ВИЧ. вакцина использовала различные подходы.Неспособность ранних вакцин на основе белка gp120 индуцировать нейтрализующие антитела ¹ перенаправили внимание на опосредованную вакциной индукцию клеточного плеча иммунного ответа. Последующий отказ от вакцины на основе Т-клеток ² оставил область вакцины против ВИЧ-1 на распутье, с неопределенностью относительно дальнейших действий. Недавно была введена двухкомпонентная вакцина против ВИЧ-1, в которой за праймированием рекомбинантным вектором оспы канареек следовали бустеры двумя рекомбинантными белками gp120, обеспечена степень защиты от инфекции ³ .Защита в этом исследовании могла быть связана с индукцией ответа антител ⁴ , но природа и специфичность защитных антител, а также способы создания иммуногенов, которые индуцируют более высокие и устойчивые уровни таких антител, остаются нерешенными проблемами.

Трудности исследования вакцины против ВИЧ-1 отчасти являются результатом экстремальной антигенной изменчивости ВИЧ-1. Согласно общепринятому мнению, иммунная система должна нацелить на «постоянные», а не на «вариабельные» области Env, чтобы вызвать широкие ответы против антигенно различных штаммов ВИЧ.Однако эти области были классифицированы в ранних исследованиях на основе последовательностей только нескольких штаммов вируса ⁵ . Иммунологические и трехмерные (3D) структурные исследования Env из различных штаммов ВИЧ-1 теперь выявили наличие структурных особенностей более высокого порядка, которые могут изменить эти ранние классификации и объяснить, как антитела, специфичные для некоторых вариабельных областей, обладают нейтрализующей активностью против различных штаммов ВИЧ-1. вирусы. Хотя несколько эпитопов, которые индуцируют нейтрализующие антитела, были идентифицированы в консервативных областях как частей gp120, так и gp41 Env, индукция нейтрализующих антител, нацеленных на эти эпитопы с использованием рационально сконструированных иммуногенов, до сих пор была затруднена ^6,7,8,9 .Более того, хотя сильный ответ антител индуцируется естественной инфекцией ВИЧ-1, только небольшая часть индивидуальных сывороток ВИЧ-положительных пациентов нейтрализует широкий спектр штаммов ВИЧ ^10,11 .

Мы считаем, что нацеливание на консервативные элементы в пределах участков Env с вариабельной иммуногенной последовательностью (рис. 1) с использованием рационально сконструированных иммуногенов является многообещающим подходом для создания вакцины, но индукция широких, нейтрализующих перекрестные штаммы антител, специфичных для этих областей, является проблемой.Тем не менее, текущие данные показывают, что 3D-визуализация может идентифицировать дополнительные инвариантные эпитопы, которые способны индуцировать защитные антитела и которые скрыты в областях Env с вариабельной последовательностью. Действительно, эта точка зрения обеспечивает рациональную основу для понимания документально подтвержденной иммунологической перекрестной реактивности многих моноклональных антител, направленных на вторую (V2) и третью (V3) вариабельные петли gp120, а также на четвертичные нейтрализующие эпитопы (QNE), образованные V2 и V3 ( Вставка 1; Таблица 1).Оглядываясь назад, эта перспектива является логическим продолжением классических иммунохимических исследований ¹² , показывающих, что перекрестно-реактивные антитела распознают антигены, которые связаны, но не идентичны по последовательности (как в случае V2-специфических моноклональных антител, которые распознают мономеры gp120, полученные из различных первичные изоляты ВИЧ-1 (ссылка 13)). Эти старые, но основополагающие исследования подтверждают новую парадигму дизайна иммуногена ВИЧ-1.

Рис. 1: Ленточная диаграмма кристаллографической структуры мономера gp120, связанного с CD4.

a | Эта структура мономера gp120 представляет собой усеченное дегликозилированное консервативное ядро ​​gp120 без вариабельных петель. Показаны положения стержней переменной области и перемычки. b | Ленточная диаграмма кристаллографической структуры петли V3 gp120 in situ из кристаллической структуры, показывающая области основания, стержня и короны петли V3. c | Зоны изменчивости последовательностей картированы на конформации β-шпильки коронки V3.Кристаллографическая структура коронки V3 показана в виде ленточной диаграммы с часто встречающимися боковыми цепями, изображенными на палочке. Разноцветный иллюстративный цилиндр наложен на структуру, чтобы выделить четыре зоны коронки V3: арку (зеленый), гидрофильную поверхность (красный) и гидрофобную поверхность (синий) круга, а также полосу (желтый). Только гидрофильная поверхность имеет высокую изменчивость последовательности, но аминокислоты, которые составляют область изменчивости, широко распределены в линейной последовательности белка, что скрывает существование такой области, если не принимается во внимание трехмерный структурный контекст.Боковые цепи короны V3, которые связаны нейтрализующими моноклональными антителами, помечены цветными линиями: моноклональное антитело 268 нейтрализует только несколько штаммов ВИЧ-1 и взаимодействует с различными боковыми цепями, включая одну на вариабельной гидрофильной стороне V3; моноклональные антитела 2219 и 3074 нейтрализуют вирусы нескольких подтипов ВИЧ-1 ³⁷ и избегают вовлечения гидрофильной вариабельной зоны. Изображение в части а было построено с использованием данных из [5]. 17. Изображение в части b было построено с использованием данных из [5].80. Изображение в части c адаптировано, с разрешения, из Ref. 40 © (2010) Mary Ann Liebert, Inc.

Таблица 1 Конверт-специфические нейтрализующие человеческие моноклональные антитела к ВИЧ-1

В этой статье мы объединяем данные как с биологической (вирусные и иммунологические исследования), так и с физической. (структурные и биоинформатические исследования), чтобы показать, как взаимосвязь между структурой и функцией белков Env может влиять на разработку эффективной вакцины против ВИЧ-1. С особым акцентом на вариабельные области gp120, мы подчеркиваем взаимосвязь между трехмерной молекулярной структурой, биологической функцией и иммунологической перекрестной реактивностью.Этот подход показывает потенциальную полезность нацеливания на участки с вариабельной последовательностью и QNE, которые образуются в результате взаимодействия участков с вариабельной последовательностью в контексте тримеров Env. Из-за вариабельности их последовательностей эти области ранее не рассматривались как мишени для вакцины, но теперь мы считаем, что их потенциальное использование следует пересмотреть.

Биологические функции областей gp120

Антитела, которые мешают ключевым биологическим функциям ВИЧ-1, могут «нейтрализовать» инфекционность вируса.Следовательно, понимание функции различных частей Env помогает определить мишени антител, которые должны индуцироваться защитными вакцинами.

Сайты связывания рецепторов . В настоящее время хорошо установлено, что для запуска экспозиции гибридного домена gp41 ВИЧ-1, который инициирует слияние вируса с клеткой-хозяином, gp120 должен сначала связываться с двумя рецепторами на поверхности клетки: CD4 и CXC-хемокиновым рецептором 4 (CXCR4) или CC-хемокином. рецептор 5 (CCR5) ^14,15 . Рецептор-связывающие поверхности на gp120 образуют отдельные структурные и антигенные области, которые являются высококонформационными и образованы прерывистыми аминокислотами в нескольких областях gp120 (Refs 16, 17 (Box 1).Сайт связывания CD4 состоит из многих остатков в константных областях gp120, но до недавнего времени было описано только одно из многих моноклональных антител, специфичных к сайту связывания CD4, с широкой нейтрализующей активностью ¹⁸ . Еще три были недавно отобраны и охарактеризованы ^19,20 (Таблица 1). Это говорит о том, что на ключевую область в большом CD4-связывающем сайте может быть трудно попасть с помощью вакцинных конструкций, и этот факт подтверждается неутешительными результатами попыток вызвать нейтрализацию CD4-связывающих сайт-специфических антител с помощью различных вакцинных конструкций ^{6, 7,9} .

Сайт связывания хемокинового рецептора gp120 состоит из инвариантных цепей β2 и β3 в двойной петле V1 – V2, цепей β20 и β21 в четвертой консервативной области (C4) и остатков в петле V3 ^16,17 . Эта высококонформационная прерывистая область gp120 часто известна как область, индуцированная CD4, потому что, как следует из ее названия, она присутствует после того, как gp120 связывает CD4 с высокой аффинностью. Многие человеческие моноклональные антитела, специфичные для CD4-индуцированной области, были описаны ^21,22,23,24 , что указывает на сильную иммуногенность этой области.Однако при воздействии на вирусную частицу CD4-индуцированная область стерически защищена от большинства специфических антител во время процесса инфекции, предположительно из-за ее непосредственной близости к клеточной мембране ²⁵ . Следовательно, антитела, специфичные для области, индуцированной CD4, могут не защищать от инфекции большинством штаммов ВИЧ-1.

Петля V3 . Петля V3 gp120 является компонентом области связывания хемокинового рецептора и является важной детерминантой использования корецептора ^{26,27,28,29,30,31} .Длина петли V3 практически постоянна и составляет 34–35 аминокислот. Хотя его аминокислотная последовательность очень вариабельна — за исключением вирусов клады C, где последовательность V3 обычно консервативна ³² — вариация последовательности ограничена только ~ 20% аминокислотных положений и локализуется в основном в двух β-цепях в макушка петли V3 (рис. 1б, 2г). Функциональное значение V3 подтверждается тем фактом, что делеция V3 полностью устраняет инфекционность вируса ³³ .Тем не менее, эффективность V3-специфических антител в блокировании вирусной инфекции была спорной, потому что некоторые V3-специфические антитела, особенно те, которые вырабатываются сразу после заражения, обладают ограниченной широтой нейтрализации с точки зрения различных штаммов ВИЧ-1 (ссылка 34): многие V3-специфические антитела нейтрализуют только наиболее чувствительные к нейтрализации вирусы «уровня 1» ^19,35 , ни одно моноклональное антитело, специфичное к V3, не нейтрализует более ∼10–25% более устойчивых вирусов «уровня 2» ^{19, 36,37} , а доступность V3 для многих вирусов оставляет желать лучшего ^38,39 .Однако, учитывая важную функцию V3 в инфекционности ВИЧ, его структурную консервативность ^40,41 , высокую иммуногенность ⁴² , существование многих V3-специфических моноклональных антител с нейтрализующей активностью перекрестной клады ^{19,36,37, 43} и демонстрации того, что могут быть индуцированы поликлональные V3-специфические антитела, которые нейтрализуют вирусы различных подтипов ВИЧ-1 ⁴⁴ , область V3 остается потенциально важной мишенью для разработки вакцины.

Рисунок 2: Консервативные и вариабельные остатки в петлях V1, V2 и V3 gp120.

a | Логотип последовательности, изображающий паттерн сохранения аминокислот при множественном выравнивании множества петель V1, каждая из которых была выбрана, потому что она имеет наиболее обычную длину V1, изображенную на фиг. 3a. Данные, использованные для получения логотипа последовательности, были получены из Лос-Аламосской национальной лаборатории (LANL), Нью-Мексико, США, с использованием одной последовательности на пациента, и были включены все подтипы ВИЧ-1. Высота буквы указывает на степень сохранения наиболее распространенной аминокислоты в этом положении.Аминокислоты окрашены в соответствии с их химическими свойствами: маленькие аминокислоты (G, P, A, S и T) имеют зеленый цвет; сильно полярные, заряженные основные или заряженные кислотные аминокислоты (K, R, D, E, Q и N) — черные, а гидрофобные аминокислоты (V, L, I, Y, W, F и M) — синие. Немногочисленные амино- и карбоксиконцевые аминокислоты петли V1 достаточно консервативны, но большая часть петли превращается в маленькие буквы, что указывает на отсутствие консервации, за исключением ряда остатков аспарагина (N) и треонина (T) рядом с центр петли, что указывает на область предполагаемого гликозилирования. b | Логотип последовательности, изображающий паттерн сохранения аминокислот при множественном выравнивании множества петель V2, каждая из которых была выбрана, потому что она имеет наиболее обычную длину V2 (как показано на фиг. 3b). Данные о последовательностях были получены из LANL (одна последовательность V2 на пациента, включая последовательности из всех подтипов ВИЧ-1). Хотя петля V2 имеет гораздо больше вставок и делеций, чем петля V3, она имеет степень аминокислотной консервации, аналогичную таковой для петли V3, когда контролируется длина петли, как объяснено выше. c | Положения аминокислот и сайты предполагаемого гликозилирования, которые участвуют в связывании V2-специфического моноклонального антитела 697-D и QNE-специфических моноклональных антител PG9, PG16 и 2909, картированы на схематической иллюстрации структуры петли V1 – V2. Квадратные скобки обозначают более одной часто встречающейся аминокислоты в одном положении. Индивидуальные сайты, связанные со связыванием каждого отдельного антитела, распределены по первичной последовательности V1 – V2 линейно, но в трехмерном пространстве должны сгруппироваться в один или несколько перекрывающихся эпитопов.Обратите внимание, что нумерация аминокислот на рис. 2c не совсем совпадает с нумерацией на рис. 2a и 2b из-за различий в длинах V1 и V2. d | Логотип последовательности, полученный таким же образом, как на фиг. 2a и 2b, изображает паттерн сохранения аминокислот при множественном выравнивании всех петель V3 из данных последовательностей LANL (одна последовательность V3 на пациента, включая последовательности из всех подтипов ВИЧ-1).

Петля V2 . Напротив, V2 не важен для инфекционности вируса ³³ , что предполагает, что эволюционные ограничения для сохранения инвариантной структуры V2 менее выражены, чем для V3.Однако V2 участвует в нескольких функциях Env: обеспечивая мотив, который связывается с интегрином α4β7 (рецептор, потенциально участвующий в перемещении вируса к клеткам слизистой оболочки кишечника) ⁴⁵ , способствуя образованию тримеров Env ⁴⁶ и участвуя как часть поверхности, связывающей хемокиновый рецептор. V2 также играет решающую роль в маскировке нейтрализующих эпитопов gp120: изменения длины V2 и паттернов гликозилирования позволяют вирусам избегать нейтрализации, опосредованной антителами, специфичными для V3 и сайтом связывания CD4 gp120 (ссылки 47, 48, 49, 50) .Учитывая эти функции петли V2, ее недавно признанную роль в качестве компонента QNEs ^51,52,53,54 и частичную структурную консервацию (см. Ниже), V2 становится дополнительной потенциальной мишенью для разработки вакцины.

V1, V4 и V5 . Функции других вариабельных областей gp120 определены плохо. V1 может иметь функциональное значение, поскольку он может быть нейтрализующим эпитопом, и у трансгенных мышей ⁵⁵ были разработаны несколько мощных нейтрализующих V1-специфических моноклональных антител.На иммуногенность V1 влияет гликозилирование ⁵⁶ , а мутации в V1 могут влиять на индуцированное вирусом образование синцития в клетках-хозяевах ⁵⁷ ; однако о функции V1 известно немного больше, чем это. V4, напротив, не имеет четко определенной функции, хотя он является мишенью для ранних аутологичных нейтрализующих антител ⁵⁸ и V4-специфические нейтрализующие антитела были описаны у иммунизированных кроликов ⁵⁹ . V4 участвует в нейтрализационном побеге ⁶⁰ и претерпевает крайние вариации на ранней стадии заражения ⁶¹ .Область V5, единственная вариабельная область, которая не образует петлю с дисульфидной связью, участвует в формировании поверхности сайта связывания CD4, но поликлональные или моноклональные нейтрализующие V5-специфические антитела не описаны; тем не менее, V5 участвует в ускользании от нейтрализации, хотя пептиды V5 не могут блокировать активность нейтрализующих антител в сыворотках ⁶² . Таким образом, текущие данные не поддерживают использование этих вариабельных областей в качестве мишеней для вакцин на основе ВИЧ-1-специфических антител.

Тримерные шипы Env . Кристаллические структуры мономеров gp120 доступны уже более десяти лет ¹⁷ , но кристаллическая структура тримерного шипа Env недоступна, хотя она была смоделирована с использованием структур мономеров и криоэлектронной томографии ^63,64,65 . Есть важные последствия для олигомеризации белка Env ВИЧ-1: образование тримеров является требованием для инфекционности, приводит к захоронению нейтрализующих эпитопов внутри олигомерных интерфейсов и позволяет маскировать конформационные эпитопы ^66,67,68 .QNE, которые образуются после тримеризации gp120, были определены различными моноклональными антителами человека и макака, которые являются исключительно мощными ^51,52,53,54 , факт, который отражает важную функцию QNE, которая еще не определена.

Консервация переменной петли

Недавно несколько трехмерных структурных исследований предоставили важную информацию о консервативных структурных элементах в вариабельных петлях gp120, которые указали на потенциальные окна возможностей для конструирования иммуногенов, экспрессирующих эти консервативные структуры.

Петля V3 . Хотя петля V3 является наименее вариабельной из вариабельных областей Env ВИЧ-1, потому что отчасти она единственная, которая по существу постоянна по длине, ее последовательность значительно варьируется в зависимости от штамма, и эта вариабельность наиболее выражена в ее короне. ‘, ~ 14 аминокислот на конце петли V3 (рис. 1б). Хотя специфичность некоторых V3-специфических антител ограничивает их иммунохимические и биологические функции ^69,70 , некоторые V3-специфические моноклональные и поликлональные антитела от инфицированных людей могут нейтрализовать различные штаммы ВИЧ-1 ^{19,36,43,71,72, 73,74} .Более того, некоторые индивидуальные V3-специфические моноклональные антитела могут нейтрализовать ~ 25-50% штаммов ВИЧ-1 уровня 1 и уровня 2, в которых присутствует правильный эпитоп ^{19,37,43,72,75} ; поликлональные V3-специфические ответы на инфекцию могут нейтрализовать вирусы уровня 1 и уровня 2 из различных кладов ⁷⁴ . Индуцированные вакциной иммунные ответы, нацеленные на V3, также могут вызывать более широкую нейтрализующую активность, чем та, которая наблюдается во многих ВИЧ-положительных сыворотках человека или смесях человеческих моноклональных антител ⁴⁴ .

Интересно, что кристаллографические структуры короны петли gp120 V3 из разных штаммов вируса в комплексе с различными моноклональными антителами человека ^{41,59,76,77,78,79} и структуры петли V3, свободно расположенные in situ на Ядро gp120 (Ref. 80), все имеют коронку V3, которая формирует вариации общей третичной структуры β-шпильки. Кроме того, изменение последовательности петли V3 имеет тенденцию группироваться в единую непрерывную небольшую зону при просмотре в трехмерном пространстве ⁴⁰ (рис.1в). Мы предполагаем, что корона петли V3 может быть организована в складчатый (хотя и очень гибкий) глобулярный домен, причем большая часть его поверхности является структурно, и, следовательно, потенциально антигенно инвариантной. Эта структурная перспектива объясняет как перекрестную реактивность многих V3-специфических антител, которые связывают консервативные поверхности V3, так и узкую специфичность некоторых V3-специфических моноклональных антител, которые связывают небольшую зону вариабельной последовательности ^40,41 ( Рис. 1в).Открытие консервативных трехмерных структур в петле V3 с переменной последовательностью согласуется с функцией петли V3 как элемента, связывающего хемокиновый рецептор: рецептор-связывающая поверхность gp120 должна быть консервативной, чтобы сохранить инфекционность вируса, и эти ограничения, по-видимому, включают больше аминокислотных положений петли V3, чем они оставляют свободными. Этот вид петли V3 указывает на то, какие области V3 должны быть нацелены иммуногенами для выработки широко нейтрализующих антител; он также указывает на область V3, которая вызывает только штамм-специфические ответы антител.

Двойной контур V1 – V2 . V2 различается как по последовательности, так и по длине (рис. 2, 3) и, в результате, является гораздо более вариабельной областью, чем V3. V2 иммуногенен примерно у 20–45% ВИЧ-1-инфицированных людей ¹³ в отличие от V3, который индуцирует антитела практически у всех инфицированных людей ⁴² . Было создано несколько V2-специфических человеческих моноклональных антител, которые перекрестно реагируют с молекулами gp120 из различных изолятов ВИЧ-1, а также V2-специфические моноклональные антитела были получены из клеток инфицированных шимпанзе и иммунизированных крыс ^81,82,83 ; это указывает на то, что V2 может также содержать некоторые структурно консервативные элементы.Интересно, что многие V2-специфические моноклональные антитела взаимодействуют с одними и теми же аминокислотными остатками или с перекрывающимися областями V2 (Refs 13, 52, 81, 83, 84) (Fig. 2c). Опубликованные исследования документально подтверждают нейтрализующую активность моноклональных антител человека и шимпанзе к V2; хотя многие из этих антител обладают небольшой или слабой нейтрализующей активностью, некоторые обладают заметной активностью ^83,85,86 .

Рис. 3. Гистограммы, показывающие распределение длин петель V1 и V2 gp120 из записанных последовательностей ВИЧ-1 в базе данных Лос-Аламосской национальной лаборатории (LANL).

Гистограммы показывают количество (ось y ) зарегистрированных вирусов, имеющих каждую длину V1 или V2, в зависимости от количества аминокислот в петле V1 или V2 (ось x ). Длина петли отложена от нуля до максимальной записанной длины; так, например, источник показывает, что не зарегистрировано ни одного вируса, который полностью удалил бы циклы V1 или V2 (длина цикла = 0).

Мало что известно о трехмерной структуре петли V2, но биологическое преимущество, обеспечиваемое интегрином α4β7-связывающим мотивом в V2 (Ref.45) может ограничивать по крайней мере часть структуры V2. Этот рецептор-связывающий мотив встречается в области V2, содержащей чередующиеся и периодические консервативные заряженные и гидрофобные аминокислотные остатки, которые типичны для свернутого домена. Кроме того, V2 содержит хорошо сохранившуюся дисульфидную связь; такие связи обычны в небольших, слабо свернутых доменах с вариациями последовательностей на высоком уровне в их трехмерных структурных складках (таких как тиоредоксиновая складка, обнаруженная во многих белках с известными трехмерными структурами) ⁸⁷ .Также примечательно, что карбоксиконцевая часть ножки петли V2 расположена непосредственно рядом с сайтом связывания CD4 в кристаллических структурах gp120, связанного с CD4 ^17,80 , и что некоторые данные указывают на то, что наличие или отсутствие V2 может влиять на распознавание и нейтрализацию CD4-связывающим сайт-специфическим антителом IgG1b12 (ссылки 66, 88). Дополнительная структурная информация получена из сравнения распределений длин V1 и V2 (рис. 3a, b). Нормальное распределение длин V1 типично для случайной выборки из нескольких дополнительных структур и, таким образом, предполагает, что V1, вероятно, будет динамической, развернутой и неупорядоченной гибкой петлей, которая чередуется между многими конформациями.Единственный другой структурный ключ, доступный для V1, связан с присутствием в последовательности средней области V1 (как наблюдается в наиболее распространенной длине) повторяющихся сайтов предполагаемого гликозилирования (Asn-X-Thr / Ser, показанные как остатки V1 136–144). ; см. рис. 2а).

Различные паттерны распределения длин V1 и V2 отражают биологические функции, которые предполагают трехмерный структурный порядок внутри V2, но, как уже отмечалось, структурный беспорядок внутри V1. В частности, картина распределения длин V2 имеет резкое уменьшение длины от наиболее частой длины к более коротким длинам, но более постепенное уменьшение по мере увеличения длины V2, что указывает на вирусный механизм, который имеет небольшой допуск к длинам V2 короче, чем ∼40 аминокислот.Этот паттерн изменения длины типичен либо для свернутого глобулярного домена, который требует критической длины, ниже которой складка не может собираться, либо для межмономерных контактов, для которых требуется критическая длина, ниже которой петля не может переходить от одного мономера к другому. В обоих случаях наблюдаемое распределение длин требует некоторого структурного порядка V2. Доступные структурные данные — вместе с наблюдаемыми перекрестно-реактивными иммунологическими паттернами V2-специфических антител — предполагают, что аналогичный, но более сложный подход к нацеливанию вакцины, предусмотренный для V3, также может быть успешным для V2, но данные также предполагают, что V1, вероятно, не является подходящей мишенью для вакцины.

Комплексы V2 – V3 в тримере оболочки . Теперь есть доказательства, что V2 и V3 могут вместе образовывать сложные эпитопы, состоящие из вкладов обеих вариабельных петель. Эти сложные эпитопы существуют преимущественно или исключительно в тримерной форме шипа Env ВИЧ, что определяет их как четвертичные эпитопы (Box 1). Антитела, специфичные к четвертичным эпитопам, были впервые описаны у обезьян-ВИЧ-инфицированных _89.6P (SHIV _89.6P ) макак; хотя эти антитела было трудно охарактеризовать в поликлональных сыворотках, их активность, по-видимому, соответствовала прерывистому эпитопу, образованному V2 и V3, присутствующим на шипах Env вируса ⁸⁹ .Подобные антитела были обнаружены у ВИЧ-инфицированного шимпанзе ^90,91 . Примечательно, что эти антитела были чрезвычайно мощными нейтрализующими реагентами. Первое описанное человеческое QNE-специфическое моноклональное антитело, 2909, является чрезвычайно эффективным (IC ₅₀ <1,0 нг / мл) и нацелено как на области V2, так и на V3 gp120 (ссылка 51). Эпитоп, с которым связывается моноклональное антитело 2909, обнаруживается только на поверхности вирионов и на трансфицированных env клетках и не существует на мономере gp120 или рекомбинантных растворимых тримерах Env ^52,68 , что указывает на то, что этот эпитоп образуется только когда мономеры gp120 образуют тримеры в липидных мембранах.Моноклональное антитело 2909 является высокоспецифичным к штамму, хотя оно допускает обширные изменения аминокислотной последовательности в V3 (ссылка 52). Специфичность штамма 2909 является результатом связывания с лизином, а не с более распространенным аспарагином, по остатку 160 в V2 (ссылки 52, 54) (рис. 2b, c). Итак, хотя 2909 имеет узкую реактивность, это моноклональное антитело определяет первый четвертичный эпитоп в белке Env ВИЧ-1 и обнаруживает как толерантность к обширным вариациям в V3, так и ограничения специфичности, налагаемые одной позицией в V2.

Недавно было получено несколько QNE-специфических моноклональных антител от макак, инфицированных SHIV _SF162P4 (ссылка 54). Подобно моноклональному антителу 2909, эти антитела обладают мощной, но штамм-специфической нейтрализующей активностью, мишенью V2 и V3, и ограничены с точки зрения широты их реактивности остатками в V2. Итак, макаки и люди вырабатывают аналогичные мощные QNE-специфические антитела.

Примечательно, что в настоящее время описаны два клонально родственных человеческих моноклональных антитела (PG9 и PG16), которые также нацелены на V2 и V3 и обладают мощной нейтрализующей активностью (IC ₅₀ <1.0 нг / мл для многих штаммов) ⁵³ . Оба этих моноклональных антитела можно рассматривать как QNE-специфические антитела, хотя PG9 слабо реагирует с мономерным gp120, а также с тримерным gp140 и, по-видимому, нацелен в основном на прерывистые остатки в gp120 V2. Моноклональное антитело PG16, которое является истинным QNE-специфическим антителом, распознает только тримерную форму gp120 и взаимодействует с прерывистыми остатками, обнаруженными в V2 и в короне V3. В отличие от человеческого моноклонального антитела 2909 и специфичных к QNE моноклональных антител макака, PG9 и PG16 обладают широкой нейтрализующей активностью, нейтрализуя 73% и 79% 162 различных псевдовирусов соответственно.Решающее различие, которое отличает PG9 и PG16 от моноклонального антитела 2909 и объясняет широту нейтрализации PG9 и PG16, заключается в их зависимости от связанного с аспарагином углеводного фрагмента, который присутствует в большинстве изолятов ВИЧ-1 в положении 160 в V2 (рис. 2б, в). Ширина нейтрализации PG9 и PG16 указывает на то, что эпитопы, на которые они нацелены, консервативны и не замаскированы в большинстве штаммов ВИЧ-1.

Иммунологическая реактивность и нейтрализующая активность человеческих QNE-специфических моноклональных антител показывают, что они легко переносят обширные аминокислотные изменения в V3 (ссылки 52, 53), и что широкая или узкая нейтрализующая активность зависит от вариации V2.Кроме того, широкая нейтрализующая активность PG9 и PG16 показывает, что четвертичные эпитопы, которые они распознают, состоят из консервативных элементов в вариабельных областях последовательности V2 и V3 и являются одними из наиболее доступных из всех нейтрализующих эпитопов, присутствующих на CD4-нелигандированной форме тримерный шип Env. Смоделированные тримеры Env ^63,64,65 предоставляют ключи для визуализации трехмерных структур контактов V2 и V3, которые, вероятно, встречаются во многих возможных несвязанных формах тримера Env.Определенная трехмерная структура (или структуры) тримеров Env в конформациях, связанных с QNE, в конечном итоге должна быть высокоинформативной для разработки вакцины.

Таким образом, недавние данные выявили консервативные мишени для широко реактивных антител в вариабельной последовательности V2 и V3 петель gp120 и на четвертичных структурах, образованных этими петлями в тримерном Env. Эти данные объясняют широкую иммунологическую и функциональную перекрестную реактивность некоторых моноклональных антител, специфичных для этих областей, и обеспечивают основу для концептуального представления значения таких областей при разработке вакцины.

Структурный вид картирования эпитопов

Хотя маскирование часто описывается с точки зрения способности гликанов и других структурных особенностей предотвращать или уменьшать нейтрализующую активность V3-специфических антител ^{19,34,38,47,92} , маскирование эпитопов — явление, которое является обычным явлением. ко всем нейтрализующим эпитопам ВИЧ-1 и является результатом многих факторов ⁶⁷ . Например, трехмерная структура конкретного эпитопа может быть собрана путем принятия «правильной» конформации, которая объединяет ключевые боковые цепи связывающих антитело аминокислот вместе в единую структуру, но белок может быть сконструирован так, чтобы легко «мерцать» из эта конформация, которая будет наблюдаться как маскировка эпитопа от его родственного антитела.Точно так же другие белковые петли или гликаны могут «мерцать», чтобы покрыть эпитоп, что также будет наблюдаться иммунологически как частичное или полное маскирование. В результате, хотя антитела могут быть вызваны стратегиями иммунизации, нацеленными на эпитопы, широко присутствующие в циркулирующих вирусах, эффективная нейтрализация, опосредованная этими антителами in vivo , снижается до неопределенной степени за счет различных типов маскировки.

Маскирование иногда можно преодолеть, когда определенные конформации эпитопа стабилизируются различными молекулярными лигандами.Например, в некоторых штаммах ВИЧ-1 доступность эпитопа V3 на gp120 заметно увеличивается за счет связывания с CD4 и некоторыми специфическими для gp120 моноклональными антителами, которые индуцируют и стабилизируют конформационные изменения в gp120 (Refs 39, 93, 94). Эти данные предполагают, что воздействие «замаскированных» эпитопов может быть достигнуто и, таким образом, достигнута эффективная нейтрализующая активность путем индукции «демаскирующих» антител вместе с антителами, специфичными для «замаскированного» эпитопа (или эпитопов). Другой взгляд на маскировку иллюстрируется некоторыми моноклональными антителами, которые обладают различной нейтрализующей активностью, несмотря на то, что они нацелены на аналогичные области Env (рис.2в). Связывание V2-, V3- и QNE-специфических антител с перекрывающимися областями V2 и V3 имеет различные эффекты, которые могут зависеть от молекулярной динамики петель V2 и V3 в различных конформациях тримера Env и / или от кинетики V2 и V3. Движение V3 при переключении между конфигурациями с низким и высоким энергопотреблением ⁹⁵ .

Таким образом, маскирование может быть результатом функциональных, а также физических характеристик эпитопа в любой из нескольких молекулярных конформаций.Гипотетически остатки в V2 и V3 могут образовывать эпитоп (или эпитопы), распознаваемый QNE-специфическими антителами, только когда V2 и V3 взаимодействуют в конфигурации, которая приводит к инфекционности вируса. Напротив, некоторые индивидуальные V2- и V3-специфические антитела могут распознавать эпитопы на своих соответствующих петлях только тогда, когда эти петли занимают разное пространство, то есть не контактируют друг с другом, как в тримерных шипах Env, которые не находятся в инфекционной зоне. конформация. Эпитопы, которые не контактируют друг с другом, могут казаться «замаскированными», поскольку в этом случае эти V2- и V3-специфические антитела не могут нейтрализоваться.

Попытки полностью понять маскировку, вероятно, потребуют междисциплинарных исследований, которые включают структурные, а также иммунологические и вирусологические элементы.

Выводы и дальнейшие шаги

Хотя гликопротеины Env ВИЧ-1 используют вариации — с точки зрения как последовательности, так и конформации — для избежания нейтрализации, тем не менее, существуют области структурной консервации, которые могут быть нацелены на разработку вакцины. Эта точка зрения подтверждается данными, показывающими, что петли с переменной последовательностью gp120 ВИЧ-1 могут вызывать ряд антител, некоторые с узкой специфичностью только для одного или нескольких штаммов ВИЧ-1, а другие с широкой иммунологической и нейтрализующей активностью против различных Штаммы ВИЧ-1.Это особенно верно для антител, специфичных к V2, V3 и QNE, образованным этими двумя областями gp120. Иммунологическая перекрестная реактивность многих моноклональных антител, специфичных для этих эпитопов, теперь может быть объяснена с точки зрения структурной консервации трехмерных форм в этих петлях с переменной последовательностью и в контексте функциональных требований, которые ограничивают качество и количество последовательности. изменчивость. Этот синтез структурной, функциональной и антигенной консервации участков вариабельной последовательности gp120 обеспечивает парадигму для рационального дизайна рекомбинантных иммуногенов: он показывает, как форма должна следовать за функцией, он напоминает, как форма соотносится с антигенностью, и предлагает, как иммуногены могут быть рационально разработан, чтобы сфокусировать иммунный ответ на частях структур, которые вырабатывают широко реактивные антитела, и вдали от тех регионов, которые вырабатывают антитела с узкой реактивностью.Такие рационально сконструированные иммуногены будут смоделированы на детальных трехмерных структурах эпитопов, которые распознаются семействами перекрестно-кладовых и широко нейтрализующих антител, нацеленных на консервативные структурные особенности и устраняя или заменяя те элементы, которые сужают специфичность антитела.

Новые методы привели к значительному увеличению количества и специфичности моноклональных антител, которые могут быть получены из образцов пациентов ^{19,20,51,53,73} . Другие недавно открытые эпитопы и еще не идентифицированные эпитопы, распознаваемые сывороточными антителами с нейтрализующей активностью против ВИЧ-1 ^{10,73,74,96,97,98} , будут обеспечивать дополнительные мишени для вакцины помимо тех, которые были описаны здесь.Использование структурной и вычислительной биологии для рационального конструирования рекомбинантных иммуногенов эпитоп-каркас на основе нейтрализующих эпитопов в вариабельных областях Env имеет потенциал для разработки иммуногенов, которые вырабатывают антитела с большей специфичностью и эффективностью, чем в настоящее время достигаются при использовании различных форм gp120 и / или gp41. используются. Действительно, до недавнего времени был ограниченный успех в индукции широко реактивных ответов поликлональных нейтрализующих антител, нацеленных на выбранные эпитопы в gp120 и gp41 (ссылки 6, 7, 8, 9 и суммированные в Ref.99). Однако фокусирование иммунного ответа на нейтрализующих эпитопах посредством использования эпитоп-каркасных вакцин, разработанных для представления консервативных структурных элементов иммунной системе и для устранения тех эпитопов, которые сужают специфичность антител, начинает приносить скромные успехи ⁴⁴ . Эти методы открывают перспективы создания иммуногенов, которые вызывают ответы поликлональных антител, специфичные для конкретных выбранных эпитопов ВИЧ-1, с более тонкой специфичностью и большей эффективностью, чем это достигается в настоящее время.

Ящик 1 | Типы связывающих антитело эпитопов

Антигенная детерминанта, также известная как эпитоп, представляет собой область молекулы, которая распознается иммунной системой, в частности антителами и рецепторами Т-клеток.

Linearepitopes

Линейные эпитопы в белках состоят из непрерывных участков аминокислот, полученных из последовательности белка. Хотя антитела, нацеленные на линейные эпитопы, могут реагировать с линейными пептидами, они не обязательно могут реагировать с непрерывными участками аминокислот внутри пептидов, а вместо этого распознают дискретные остатки внутри пептидов, которые складываются в определенные конформации.Это может привести к большему сродству антитела к молекуле нативного белка по сравнению с соответствующим пептидом ¹⁰⁰ . Конформация вносит свой вклад в большинство линейных эпитопов. Примеры включают эпитопы, распознаваемые многими gp120 V3- ⁴¹ , gp120 C5- ¹⁰¹ и gp41-специфическими моноклональными антителами ^102,103 (Таблица 1).

Прерывистые эпитопы

Прерывистые эпитопы состоят из аминокислот, которые находятся в непосредственной близости в свернутом белке, но далеки от них, когда белок развернут.По определению, эти эпитопы требуют некоторой или обширной вторичной и / или третичной белковой структуры. Следовательно, их часто называют «конформационными» эпитопами. Примеры включают эпитопы, распознаваемые человеческим рекомбинантным антителом IgG1b12, которое реагирует с остатками в нескольких областях gp120 (ссылка 104), и человеческое моноклональное антитело 17b, которое реагирует с индуцированным CD4 эпитопом gp120 (ссылки 16, 21, 105). (Таблица 1). Их также можно назвать составными эпитопами.

Четвертичные эпитопы

Четвертичные эпитопы создаются белок-белковыми взаимодействиями, которые происходят во время мультимеризации.Именно в результате такой реорганизации многие белки (такие как ферменты и тримерный шип gp120 ВИЧ-1) выполняют свои физиологические функции. Антитело, которое реагирует с истинным четвертичным эпитопом, не будет взаимодействовать с отдельными мономерными субъединицами. Примеры включают моноклональные антитела 2909 и PG16, которые взаимодействуют с тримерной формой gp120 на поверхности вирионов ВИЧ-1 или клеток, трансфицированных env , но не с мономерным gp120 (ссылки 51,53) (таблица 1). Однако некоторые антитела, которые реагируют с четвертичными эпитопами, слабо реагируют с мономерными субъединицами, но сильнее с тримерами.Это похоже на моноклональное антитело PG9 (ссылка 53). Мультимеризация может приводить к изменениям четвертичной структуры внутри отдельных субъединиц или за счет переориентации субъединиц относительно друг друга, поэтому участки, вносящие вклад в четвертичный эпитоп, могут быть межмолекулярными ( транс ) или внутримолекулярными ( цис ).

Mk 82 Авиационная бомба — GICHD

Введение

В этом исследовании изучаются характеристики, использование и эффекты конкретной авиационной бомбы.Это часть серии технических исследований по оружию взрывного действия, проведенных ЖМЦГР, которые предоставляют доказательства и способствуют анализу. С версией этого исследования можно ознакомиться в заключительном отчете о характеристиках взрывоопасного оружия (GICHD, 2016) в Приложении F.

Фото 1.

авиационные бомбы типа Mk 82, установленные на взрывозащите A-6 Intruder (фото предоставлено © BrokenSphere / Wikimedia Commons. Creative Commons Attribution-Share Alike 3.0 Непортированная лицензия.).

Боеприпасы, доставляемые по воздуху, могут обеспечить возможность поражения наземных и морских целей, не подвергая риску большое количество военнослужащих, даже при действии в глубине территории противника. Авиабомба Mk 82 и ее управляемые варианты широко используются во всем мире и являются одним из наиболее распространенных семейств когда-либо производимых авиационных боеприпасов.

Mk 82 и его варианты — это универсальные авиационные бомбы с низким сопротивлением массой 500 фунтов (227 кг), содержащие 89 кг фугасного вещества.Первоначально сбрасываемая как неуправляемая бомба (иногда называемая «железной» или «глупой» бомбой), ранние версии Mk 82 могли поражать свою цель только в 5,5% случаев, что требовало сброса большого количества бомб ( Blackwelder, 1993). Управляемые версии, такие как GBU-12 и GBU-49, теперь имеют КВО менее 4 м, что свидетельствует об очень высокой точности. Во время операции «Буря в пустыне» в 1991 году сообщалось, что GBU-12 с лазерным наведением поражает свои цели в 88% случаев, причем большинство целей представляют собой одиночные машины (Blackwelder, 1993).Внедрение PGM означает, что цели могут быть уничтожены относительно небольшим и точным ударом, что снижает риск потери экипажей.

Авиабомба Mk 82 использовалась вооруженными силами США и других стран с 1950-х годов и широко использовалась в Юго-Восточной Азии во время войны во Вьетнаме. Mk 82 остается актуальным в текущих и недавних конфликтах. Во время войны в Персидском заливе 1991 года США и их союзники использовали более 4500 бомб Mk 82, сконфигурированных как PGM модели GBU-12 с лазерным наведением (Friedman, 1997).В 2016 году Mk 82 в различных конфигурациях использовался в ряде стран и территорий, включая Афганистан, Газу, Ирак, Ливию, Сирию и Йемен (ARES, n.d.).

MK 82 СМЕРТЕЛЬНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ

Фото 2. Взрыв GBU-38 в Ираке (фото предоставлено армией США).

В своей простейшей конфигурации стандартная бомба Mk 82 содержит 87-89 кг фугасного вещества в кованой стали массой 140-142 кг (Glass et al., 1997; Ordtech, 2016). Именно этот стальной корпус является основным источником осколков бомбы.Бомба основана на естественном дроблении тела, а характер рассеивания и размер осколков в значительной степени случайны.

Один из производителей Mk 82 также выпускает версию с предварительно фрагментированным корпусом. Это означает, что на корпусе бомбы через равные промежутки времени нанесены царапины по длине и ширине, так что она легко разобьется на фрагменты одинакового размера. Влияние предварительной фрагментации на общую эффективность Mk 82 очень велико. Корпус стандартной бомбы Mk 82 создает зону поражения приблизительно 80 м (поперечник) на 30 м (вдоль), что дает зону поражения приблизительно 2400 м ² .Предварительно фрагментированная версия, известная как PFB-82, имеет аналогичную форму, но гораздо большую зону поражения: 240 м (в поперечнике) и 80 м (по высоте), что дает зону поражения 19 200 м ² . Как показано на рисунке 1, Mk 82 со стандартным корпусом из кованой стали произведет менее 3000 естественных фрагментов, а модель PFB-82 произведет почти 17000 фрагментов (Ordtech, 2016).

Рис. 1. Осколки, вызванные различными моделями бомбы Mk 82 (источник: Ordtech Industries).

Эти цифры показывают, что при той же массе взрывчатого вещества предварительная фрагментация может создать смертельную зону в восемь раз большую, чем площадь, вызванная естественным дроблением. Это достигается за счет производства почти в шесть раз большего количества фрагментов относительно меньшего размера. Это представляет собой более эффективный способ нанести смертельный урон человеческим целям. Это также демонстрирует, что на открытой местности, где эффекты взрыва быстро затухают, фрагментация является основным средством выведения человека из строя.

Как показано в Таблице 1, существует 10% риск вывести из строя на расстоянии 250 м от точки взрыва и 0,1% (1 из 1000) риск вывести из строя на 425 м. Производитель заявляет, что Mk 82 предназначен для производства осколков, вес которых варьируется от 0,2 г до 20 г, которые будут двигаться с начальной скоростью от 760 м / с до 2440 м / с (Ordtech, 2016). На практике Mk 82 производит некоторые осколки, которые намного крупнее заявленных 20 г.

Таблица 1 — Расчетное расстояние (м) для различных моделей бомбы Mk 82

Источник: Военно-морское ведомство, 1998 г.

АВИАЦИОННАЯ БОМБА MK 82

Mk 82 — одна из серий универсальных авиационных бомб с низким сопротивлением, которые вместе известны как серия бомб Mk 80. В этой серии четыре бомбы, от 113 кг Mk 81 до 907 кг Mk 84. Серия бомб Mk 80 была разработана в конце 1940-х годов и остается на вооружении до сих пор (USN, 1999).

Рисунок 2. Бомбы серии Mk 80 (источник: Defense Industry Daily).

После войны во Вьетнаме бомба Mk 81 использовалась редко (476 VFG, USAF.Это решение привело к тому, что Mk 82 (вес 227 кг) стал самой маленькой авиационной бомбой, находившейся на вооружении сил США до недавнего времени. Несмотря на то, что Mk 82 имеет номинальную массу 227 кг, он выпускается в нескольких конфигурациях, каждая из которых имеет немного разные взрывные устройства и блоки наведения. Это означает, что точный вес бомбы зависит от того, как она настроена для работы. Этот вес может составлять от 230 до 260 кг.

Авиационные бомбы Mk 82 обычно содержат фугас одного из двух типов: состав H6, который представляет собой комбинацию гексогена, тротила, алюминия и хлорида кальция; или Тритонал, который состоит из комбинации 80% тротила и 20% алюминия (Fadden et al., 2009; УСН, 1985). Существует также версия Mk 82 для ВМС США, которая содержит 89 кг PBXN-109. Это термически нечувствительное взрывчатое вещество, специально разработанное для использования на борту авианосцев. ВМС США используют термически нечувствительное взрывчатое вещество, а также специальное внешнее покрытие бомбы (получившее название «кожа аллигатора»), которое изолирует корпус бомбы, чтобы снизить вероятность ее взрыва в условиях корабля. Когда Mk 82 заполнен PBXN-109, ему дается обозначение Bomb Live Unit-111 A / B (BLU-111 A / B) (USN, 2003).

Обозначение «универсального назначения» в описании бомбы указывает на то, что Mk 82 не предназначен для конкретной роли, такой как прокалывание бетона или образование воронок на взлетно-посадочной полосе; вместо этого это более гибкое оружие, которое можно использовать против целого ряда целей, обеспечивая широко применимые эффекты взрыва и фрагментации. Mk 82 может использоваться как простая неуправляемая бомба или может быть сконфигурирован как взрывное ядро ​​для ряда боеприпасов, доставляемых по воздуху.

ВАРИАНТЫ САМОЛЕТНОЙ БОМБЫ MK 82

Базовая конфигурация Mk 82 может быть модифицирована с помощью множества различных хвостовых частей, взрывателей и блоков наведения.Различные конфигурации были разработаны в модульном стиле, ядро ​​каждой из которых составляет корпус Mk 82.

БОМБА MK 82 (НЕПРАВИЛЬНАЯ)

На рис. 3 показан основной корпус бомбы Mk 82 без хвостового оперения или блока наведения. Бомба может быть оснащена носовым, хвостовым или обоими одновременно.

Рис. 3. Схема корпуса бомбы Mk 82 без оперения и блока наведения (источник: CORD).

Во время войны во Вьетнаме Mk 82 мог поставляться как простая железная бомба с хвостовым оперением с низким лобовым сопротивлением, известная как MAU-93 / B.Его заменило хвостовое оперение БСУ-33. Когда Mk 82 оснащается MAU-93 / B или BSU-33, он функционирует как типичная неуправляемая авиационная бомба. Mk 82 также может быть оснащен хвостовым оперением, предназначенным для замедления его снижения, например стабилизирующим стабилизатором Mk 15 Snakeye (USN, 2001). Принцип, лежащий в основе стабилизирующего стабилизатора, заключается в том, чтобы позволить самолету-доставщику сбрасывать бомбы с малой высоты и с относительно низкой скоростью без воздействия на самолет взрыва или фрагментации детонации.Mk 15 Snakeye широко использовался во время войны во Вьетнаме и до сих пор часто используется во Вьетнаме, Лаосе и Камбодже. На смену Mk 15 Snakeye пришли визуально похожие хвостовые части типа BSU-86 (Everett & Oster, 1994).

Рис. 4. Самолет-бомба Mk 82 с различными хвостовыми оперениями (источник: форум Zone-Five http://zone-five.net/showthread.php?t=25432).

Фото 3. Бомбы Mk 82, оснащенные стабилизатором-замедлителем Mk 15 Snakeye (источник: U.С. ВВС).

Еще один способ замедлить спуск бомб Mk 82 — использовать хвостовое оперение с воздушным надувным замедлителем (AIR), как показано на фото 4. AIR разворачивает баллют из хвостового оперения, обеспечивая высокую скорость доставки на малой высоте. В зависимости от требований миссии может быть выбрана конфигурация с высоким или низким сопротивлением. AIR был разработан для обеспечения более высокой скорости доставки боеприпасов серии Mk 80 (Kareffa, 1972; USN, 2001). Для любой неуправляемой авиационной бомбы правильная высота применения, расстояние, скорость и пеленг от цели имеют решающее значение для обеспечения точности и точности.Таким образом, навыки пилота являются фактором точного применения этого оружия. Точность и точность могут быть увеличены за счет использования комплектов, которые превращают Mk 82 в высокоточный боеприпас (PGM), а также за счет использования различных современных систем управления огнем.

Фото 4. Бомбы типа Mk 82 с хвостовым оперением Air Inflatable Retarder (AIR) (источник: Kris Brackx / Belgian Wings).

MK 82 МОДЕЛЬ 7

Mk 82 Model 7 еще не принят на вооружение, но он будет иметь идентичные размеры и вес с существующими бомбами серии Mk 82.Корпус Model 7 будет изготовлен из чугуна с шаровидным графитом, в отличие от стандартного стального корпуса. Литой корпус из высокопрочного чугуна спроектирован так, чтобы обеспечить более широкий разброс осколков, чем стальной корпус. Он будет оснащен неконтактным взрывателем, так что он взорвется над целью, а не при ударе. Этот эффект обычно называют эффектом воздушного взрыва, и, как и корпус из высокопрочного чугуна, он разработан для максимального распространения осколков. Mk 82 Model 7 должен поступить на вооружение в 2018 году (Drew, 2014).

JOINT Direct ATTACK MUNITION (JDAM) — УПРАВЛЯЕМАЯ БОМБА (GBU-38)

Добавление блока наведения и управления превращает Mk 82 в высокоточный боеприпас (PGM), обычно называемый «умной бомбой». Наиболее распространенные PGM, основанные на Mk 82, включают в себя таковые из семейств Joint Direct Attack Munition (JDAM) и Paveway. Важно отметить, что было несколько итераций этих боеприпасов, и что с течением времени они подвергались поэтапным программам улучшения.

Оружие серии JDAM предлагает наведение INS / GPS (см. Ниже) и в настоящее время составляет основу авиационных боеприпасов США. На рисунке 5 ниже, Mk 82 был модифицирован путем добавления комплекта наведения в управляемую бомбовую установку-38 (GBU-38), которая является частью инвентаря JDAM, используемых США и другими военно-воздушными силами (IISS , 2010).

Рис. 5. Схема GBU-38 JDAM (источник: Air Power Australia).

Семейство боеприпасов JDAM использует комплекты наведения «с болтовым креплением», оснащенные как инерциальной навигационной системой (INS), так и технологией GPS, чтобы обеспечить базовый бомбовый блок со значительно повышенной точностью и точностью.Блок наведения и управления (ГПА) находится в хвостовой части. Блок наведения GPS должен быть предварительно запрограммирован с информацией о цели перед сбросом бомбы, но предварительное программирование координат теперь может быть выполнено удаленно через канал передачи данных самолета. Если он может использовать как системы наведения GPS, так и INS, GBU-38 имеет КВО 5 м или меньше. Если после запуска произойдет сбой GPS, GBU-38 будет иметь КВО 30 м. Пакет инструкций JDAM стоил примерно 27 000 долларов США в 2015 году (Balle, 2015).

Базовый пакет наведения JDAM также может быть дополнен рядом других искателей самонаведения, известных как прецизионные терминальные искатели самонаведения (PTHS).Они могут принимать разные формы; наиболее распространенными из них являются получение изображений миллиметрового диапазона (MMW), инфракрасное изображение (также известное как тепловизионное изображение) и электрооптическое изображение. Функции этих искателей самонаведения выходят за рамки данного отчета, но их цель — расширить существующий пакет инструкций JDAM. Пример поискового устройства MMW показан на рисунке 6. Было несколько итераций по усовершенствованию производства боеприпасов серии JDAM. Комплекты Laser JDAM были разработаны для дополнения существующих JDAM или «голых» корпусов Mk 82, увеличивая способность боеприпасов поражать движущиеся цели.ВМС США заказали более 2300 комплектов Laser JDAM (Boeing, 2013).

Рис. 6. Схема GBU-38 JDAM, оснащенного системой формирования изображений миллиметрового диапазона или головкой самонаводящейся самонаводящейся самонаводящейся самонаводящейся инфракрасной области спектра (источник: Air Power Australia).

PAVEWAY II — БЛОК УПРАВЛЯЕМЫХ БОМБ-12 (GBU-12)

Рис. 7. Схема PGM GBU-12 (источник: Air Power Australia).

Mk 82 также служит боевой частью для GBU-12, в котором используется лазерное наведение вместо наведения на основе инерции и GPS, как у GBU-38.Чтобы GBU-12 функционировал должным образом, цель должна быть обозначена лазерным устройством. Это иногда называется освещением или «окраской» цели и может быть достигнуто с помощью второго летательного аппарата или беспилотной системы, кружащей над целью, или с помощью наземного лазерного целеуказателя, переносимого персоналом или установленного на транспортном средстве. Бомба должна быть сброшена на правильной высоте, расстоянии, скорости и пеленге от цели, чтобы функционировать должным образом. Он использует регулируемые хвостовые стабилизаторы («управляющие поверхности»), чтобы направить себя к точке, отмеченной лазером, но не оснащен двигательной установкой, поэтому возможно только частичное управление спуском.

Как и большинство боеприпасов с лазерным наведением, GBU-12 использует лазер, непрерывно освещающий цель, пока бомба движется к ней. Это может быть скомпрометировано такими факторами, как дождь, пыль, дым и облачный покров, и в этом случае бомба снова станет железной бомбой (то есть неуправляемым боеприпасом). Тот факт, что блок лазерного наведения может быть выведен из строя в плохих погодных условиях, ограничивает использование этой системы вооружения. Относительная простота лазерной системы наведения противоречит ее точности.У GBU-12 КВО менее 4 м (Lockheed Martin, 2010). Как и в случае с серией JDAM, боеприпасы Paveway претерпели несколько итераций.

Рисунок 8. PGM GBU-12 (источник: IOMAX).

ENHANCED PAVEWAY II — УСТРОЙСТВО С НАПРАВЛЯЕМЫМИ БОМБАМИ-49 (GBU-49)

GBU-49, произведенный Raytheon в 2000-х годах, сочетает в себе лазерное наведение Paveway GBU-12 с блоком GPS / INS GBU- 38. Впервые он поступил на вооружение Королевских ВВС Великобритании в 2008 году (Raytheon, 2016).Комбинация методов наведения позволяет использовать бомбу либо в качестве боеприпаса с лазерным наведением с резервированием GPS / INS, либо в качестве боеприпаса с наведением GPS / INS. По сути, GBU-49 обеспечивает точность оружия с лазерным наведением, сохраняя при этом всепогодные возможности. У GBU-49 есть КВО менее 10 м при использовании наведения GPS / INS или менее 4 м при использовании лазерного наведения (Church, 2016; Lockheed Martin, 2010). В 2015 году блок наведения GBU-49 стоил 42000 долларов США (Balle, 2015).

Фото 5.GBU-49 прикреплен к БПЛА MQ-9 Reaper (предоставлено ВВС США).

BLU-126 / B — БОМБА С НИЗКИМ УРОВНЕМ ПОРАЖЕНИЯ (LCDB)

В ответ на потребность в авиационной бомбе с более локализованным действием, чем Mk 82, американские военные искали бомбу, которая использовала бы тот же корпус, что и Mk 82, но имеют меньшую массу взрывчатого вещества. Во внутреннюю часть бомбы был добавлен инертный материал, чтобы гарантировать, что вес и аэродинамический профиль остались прежними, тем самым гарантируя, что бомба будет иметь такие же характеристики скольжения.Он получил обозначение Bomb Live Unit 126 / B (BLU-126 / B), также известный как бомба с низким сопутствующим повреждением (LCDB). BLU 126 / B был специально разработан для уменьшения радиуса фрагментации в ситуациях, когда авиаудары должны наноситься вблизи дружественных сил или гражданских целей. Поскольку BLU-126 / B имеет тот же размер и вес, что и Mk 82, он также может быть оснащен пакетами наведения, разработанными для Mk 82, такими как JDAM.

BLU-129 / B — ОРУЖИЕ С ОЧЕНЬ НИЗКИМ ЗАЩИТНЫМ УЩЕРБОМ (VLCDW)

Фото 6.Фотография BLU 126 / B (фото предоставлено Ливерморской национальной лабораторией Лоуренса).

Центральное командование США издало Совместную срочную оперативную потребность в оружии с очень низким сопутствующим ущербом. Результатом стал BLU-129 / B, который имеет те же размеры и вес, что и Mk 82, но с корпусом из углеродного волокна, а не из стали. Корпус из углеродного волокна не распадается на части при взрыве. Это приводит к локализации взрывной ударной волны и значительно снижает естественную фрагментацию, тем самым снижая уровень повреждений за пределами эффективного радиуса.

Как и BLU-126 / B, BLU-129 / B имеет габариты и весовые размеры Mk 82, а также может заменить бомбовый блок для JDAM и вариантов Mk 82 с лазерным наведением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ С САМОЛЕТНЫМИ БОМБАМИ MK 82

Было изучено более 20 случаев использования авиационных бомб. Для этого отчета было отобрано 5 тематических исследований на основе подтвержденного использования этого оружия, точности документации и географического распределения конфликтов в исследованиях оружия.Они охватывают период с апреля 2003 года по ноябрь 2015 года и следующие страны: Ирак, Афганистан и Ливия.

Поскольку неуправляемые бомбы Mk 82 встречаются в текущих конфликтах крайне редко, в тематических исследованиях в этом отчете рассматривается использование вариантов управляемых бомб Mk 82.В 2002 году, например, официальные лица США отметили, что 60 процентов всех используемых боеприпасов были МПГ, при этом заявленная эффективность этого оружия составляла 90 процентов (Schmitt, 2002). Найти достоверную информацию об использовании вариантов Mk 82 оказалось непросто. Почти все доступные отчеты с открытым исходным кодом были расследованиями причинения вреда гражданскому населению от этого оружия взрывного действия, что может быть предвзятым в отношении изучения эффективности и действенности бомбы Mk 82. Следовательно, все случаи в этом исследовании связаны с использованием высокоточных версий Mk 82 и случаями преднамеренного наведения на цель.В то время как 227-килограммовые варианты Mk 82 являются самыми маленькими из широко используемых авиационных бомб в арсенале НАТО, 87-89 кг фугасных веществ, содержащихся в бомбе Mk 82, достаточно, чтобы нанести значительный в военном отношении ущерб зданиям, транспортным средствам и другим объектам. люди в непосредственной близости от цели.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

Пример № 1

Аль-Тувайси, Басра, Ирак 5 апреля 2003 г., 05:20.

В 05:20 5 апреля 2003 г. была предпринята попытка убить иракского генерал-лейтенанта Али Хасана аль-Маджида (Химик Али), когда он находился у себя дома.227-кг бомба неизвестного назначения использовалась, чтобы попытаться минимизировать побочный ущерб. Бомба попала в целевое здание в густонаселенном районе Басры. Два соседних дома также были разрушены, в результате чего погибли семнадцать мирных жителей и пятеро получили ранения. Нет никаких свидетельств того, что цель нападения когда-либо посещала этот дом.

Пример № 2

Деревня Амерхейл, провинция Кундуз, Афганистан, 4 августа 2009 г., 01:45.

В 01:45 4 августа 2009 года два самолета сбросили две бомбы GBU-38 JDAM на два захваченных топливозаправщика, которые застряли при попытке пересечь реку Кундуз в деревне Амерхейл.Толпа людей окружила танкеры и откачивала топливо, когда попали бомбы. Сообщения о потерях варьируются от 125 до 142 убитых. Пострадали только два человека, но вполне вероятно, что число раненых было намного больше.

Пример № 3

Майер, Ливия 8 августа 2011 г., 23:00 и 9 августа 2011 г., 01:00.

Примерно в 23:00 8 августа 2011 года три бомбы GBU-12 поразили три дома на прилегающих территориях в деревне Майер, Ливия.Все три дома были разрушены. Другие люди пришли, чтобы помочь с поиском выживших, и через 10-20 минут были сбиты четвертой бомбой. В результате последнего нападения еще 18 человек погибли и 15 получили ранения. На месте были обнаружены остатки GBU-12. Дополнительная бомба попала в нежилой дом. Всего 34 человека погибли, 38 получили ранения.

Пример из практики № 4

Бани Валид, Ливия, 30 августа 2011 г., 03:30.

30 августа 2011 года в 03:30 две бомбы GBU-12 с лазерным наведением попали в дом в Бани-Валиде, Ливия.Пять членов одной семьи были убиты, еще один член семьи был ранен. Соседний дом также был разрушен. Данные свидетельствуют о том, что в результате взрыва погибли по меньшей мере три человека.

Пример № 5

Рамади, Ирак, 26 ноября 2015 г., время не указано.

26 ноября 2015 года беспилотный летательный аппарат (БПЛА) Reaper сбросил бомбу с лазерным наведением GBU-12 на дом, занятый боевиками Исламского государства. Дом был разрушен. Число жертв неизвестно.Видео об атаке включено в источники этого тематического исследования.

ПРИЛОЖЕНИЕ F: ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

Дата / время атаки:
5 апреля 2003 г., 05:20.

Место нахождения:
Аль-Тувайси, Басра, Ирак.

Карта местности:
См. Рисунок 9

Рис. 9.

Карта целевого района в Эль-Тувайси, Басра, Ирак (источник: Human Rights Watch).

Система вооружения:
Управляемая бомба массой 227 кг, обозначение неизвестно.

Количество сброшенных бомб:
Одна.

Потери:
17 убитых и 5 раненых. Все жертвы были из двух семей. Десять погибших были в возрасте до 18 лет, а самому младшему было всего 19 месяцев. Старшей из погибших оказался 68-летний гинеколог.

Ущерб:
Три дома разрушены.

Примечания:
Это была попытка убить генерал-лейтенанта Али Хасана аль-Маджида. Аль-Маджид, также известный как «Химик Али», находился дома.Для минимизации побочного ущерба использовалась бомба массой 227 кг. Бомба попала в целевое здание в густонаселенном районе Басры, но при этом были разрушены и окружающие здания, принадлежащие гражданским лицам. В результате этого нападения погибли 17 человек. Дома двух семей находились по обе стороны здания, подвергшегося нападению. Один семейный дом стоял с другой стороны от целевого дома. В общей сложности тринадцать членов большой семьи жили во временной безопасной комнате из железобетона.Размер воронки позволяет предположить, что оружие, использованное в атаке 5 апреля, представляло собой 500-фунтовую (227 кг) бомбу с лазерным наведением, наименьшую из имеющихся на тот момент МПГ.

Источник (и):

1. Хьюман Райтс Вотч: https://www.hrw.org/reports/2003/usa1203/4.htm#_Toc57442240

ПРИМЕР 2

Дата / время атаки:
4 сентября 2009 г., 01:45.

Место нахождения:
Деревня Амерхейл, Кундуз, Афганистан.

Карта местности:
См. Рисунок 10

Рисунок 10.

Карта деревни Амерхейл, Кундуз, Афганистан (источник: Google Earth).

Система вооружения:
ГБУ-38.

Количество сброшенных бомб:
Две.

Жертвы:
142 убиты, неизвестные ранены, но только двое упоминаются в отчетах. Весьма вероятно, что пострадали намного больше людей.

Урон:
Два бензовоза уничтожены.

Примечания:
Во второй половине дня 4 сентября 2009 года два топливозаправщика, принадлежавшие немецкой провинциальной группе реконструкции (PRT), работавшей в Кундузе, были захвачены боевиками «Талибана». При попытке перейти реку Кундуз танкеры увязли. Когда вокруг танкеров было замечено движение людей, командир преследования потребовал нанесения авиаудара. Информатор утверждал, что все люди на месте происшествия были боевиками, хотя на самом деле сотни простых жителей деревни устремились к застрявшим танкерам, чтобы слить топливо.

Фото 7.

Один из выброшенных на мель танкеров возле села Амерхейл, Кундуз (фото предоставлено NRZ Info).

Источник (и):

1. Amnesty International: https://www.amnesty.org/en/documents/asa11/015/2009/en/
2. Действия против вооруженного насилия (AoAV): https://aoav.org.uk/wp-content/uploads/2015/03/AOAV-Air-Power-in-Afghanistan.pdf
3. Spiegel: http: //www.spiegel.de / international / germany / deadly-bombing-in-kunduz-german-army-withheld-information-from-us-pilots-a-675229.html

ПРИМЕР 3

Дата / время атаки:
8 августа 2011 г., 23:00, и 9 августа 2011 г., 01:00.

Место нахождения:
Майер, Ливия (6 км к югу от Злитена).

Карта местности:
См. Рисунок 11

Рисунок 11.

Карта Майер, Ливия (6 км к югу от Злитена) (источник: Google Maps).

Система вооружения:
ГБУ-12.

Количество сброшенных бомб:
Пять.

Потери:
34 убитых и 38 раненых.

Ущерб:
Четыре дома разрушены.

Примечания:
Одна бомба сначала упала в 23:00, в результате чего был разрушен двухэтажный дом, в результате чего 14 человек погибли и 17 человек получили ранения. Через несколько мгновений были сброшены еще две бомбы, в результате чего были разрушены еще два дома. Четвертая бомба была сброшена через 10-20 минут.Эта бомба убила 18 и ранила 15, которые пытались найти выживших после первой атаки. Последняя бомба попала в другое здание, в котором в то время не было людей.

HRW обнаружила на месте обломки бомб GBU-12. Дома находились в двух семейных комплексах, в которых укрывались другие семьи, бежавшие от боевых действий в других частях Ливии.

Фото повреждений:

Фото 8.

Разрушенный дом в результате нападения в Майере, Ливия (Изображение предоставлено Deutsche Welle).

Фото 9.

Резиденция семьи Гафез (крайний слева) и резиденция семьи аль-Джарудов (в центре и внизу справа) 6 августа 2011 г., за два дня до того, как по этим комплексам нанесены удары авиации НАТО. Комплекс в центре был необитаем (фото предоставлено UNITAR / UNOSAT).

Фото 10.

Резиденция семьи Гафез (крайний слева) и резиденция семьи аль-Джаруда 9 августа 2011 года, на следующий день после авиаудара НАТО по собственности, погибли 34 человека (изображение предоставлено UNITAR / UNOSAT).

Источник (и):

1. Хьюман Райтс Вотч: https://www.hrw.org/report/2012/05/13/unacknowledged-deaths/civilian-casualties-natos-air-campaign-libya
2. Журнал внешней политики: http://www.foreignpolicyjournal.com/2011/08/13/natos-massacre-at-majer-libya/
3. CNN: http://www.cnn.com/2011/WORLD/africa/08/09/libya.zlitan/index.html
4. The Washington Post: https: //www.washingtonpost.ru / views / natos-lost-sizes-from-libya / 2012/06/11 / gJQAhkAoVV_story.html
5. DW: http://www.dw.com/en/more-questions-than-answers-about-natos-libya-role/a-15548186

ПРИМЕР 4

Дата / время атаки:
30 августа 2011 г., 03:30.

Расположение:
Бани Валид.

Карта местности:
См. Рисунок 12

Рисунок 12

Карта Бани Валид (источник: Google Maps).

Рис. 13.

Спутниковые снимки двух домов в особняке семьи Джфара в Бани-Валиде 22 мая 2011 г., до авиаудара (источник: Human Rights Watch).

Рис. 14.

Спутниковые снимки двух домов в особняке семьи Джфара в Бани-Валиде, 4 сентября 2011 г., после авиаудара (источник: Human Rights Watch).

Система вооружения:
ГБУ-12.

Количество сброшенных бомб:
Две.

Потери:
Пятеро убиты и один ранен. Все пострадавшие были членами одной семьи. Погибли двое мужчин, две женщины и 9-летняя девочка. Пострадала 15-летняя девочка.

Ущерб:
Два дома разрушены.

Примечания:
Три тела были брошены взрывом примерно на 25 метров. Два других тела находились внутри дома, засыпанного обломками. Пострадавшая девушка якобы страдает повреждением головного мозга. HRW обнаружила на месте происшествия остатки GBU-12.

Источник (и):

1. Хьюман Райтс Вотч: https://www.hrw.org/report/2012/05/13/unacknowledged-deaths/civilian-casualties-natos-air-campaign-libya
2. Хьюман Райтс Вотч: https://www.hrw.org/sites/default/files/reports/libya0512_brochure_low.pdf
3. НАТО: http://natowatch.org/sites/default/files/NATO_Watch_Briefing_Paper_No.21_-_UN_Human_Rights_Council_report_on_Libya.pdf

ПРИМЕР 5

Дата / время атаки:
26 ноября 2015 г., время не указано.

Место нахождения:
Рамади, Ирак.

Карта местности:
См. Рисунок 15

Рисунок 15.

Карта Рамади, Ирак (источник: Google Maps).

Система вооружения:
ГБУ-12.

Количество сброшенных бомб:
Одна.

Пострадавшие:
Цифры не приводились, только было указано, что это здание «удерживалось террористами».

Ущерб:
Один дом разрушен. Других повреждений по видеодоказательствам определить не удалось.

Примечания:
Этот случай является примером использования GBU-12, запущенного с БПЛА Reaper. Перед этим ударом команда Жнеца оказала помощь в наблюдении за успешным ударом коалиции, который уничтожил снайперскую группу Исламского государства в том же районе.

Фото 11.

Фотография БПЛА RAF Reaper (фото предоставлено RAF).

Фото 12.

Снимок дома, подвергшегося нападению, 26 ноября 2015 г., до забастовки (фото предоставлено The Daily Mail).

Фото 13.

Снимок дома, подвергшегося нападению, 26 ноября 2015 г., после забастовки (фото предоставлено The Daily Mail).

Источник (и):

1. Линкольнширское эхо: http://www.lincolnshireecho.co.uk/MOD-log-reveals-drones-piloted-RAF-Waddington/story-28298236-detail/story.html # ixzz4ARH75B7B
2. Министерство обороны Великобритании: https://www.gov.uk/government/publications/british-forces-air-strikes-in-iraq-monthly-list/november-2015

Видео:

1. YouTube: https://www.youtube.com/watch?v=VMN8WqIrLaY
2. YouTube: https://youtu.be/VMN8WqIrLaY

Подрыв сокрытия распределения в рандомизированном контролируемом исследовании: исторический пример | Испытания

Это исследование представляет собой один из очень немногих эмпирических примеров подрыва рандомизации и последствий такого подрыва для характеристик испытания.В этом исследовании мы обнаружили проблему подрывной деятельности, проверяя возрастную эквивалентность между рандомизированными группами. Хотя базовое тестирование обычно не поощряется (например, Altman and Dore, 1990 [4]), поскольку в правильно рандомизированном исследовании любые различия в исходном уровне, скорее всего, являются случайными, Бергер [8] решительно утверждает, что базовое тестирование по-прежнему играет роль в том, чтобы обнаружение возможной подрывной деятельности при распределении. Он утверждает, что, поскольку подрывная деятельность, вероятно, будет скрыта от исследователей, базовое тестирование имеет законное право убедить исследователей и читателей в том, что подрывная деятельность маловероятна.Однако уровень подрывной деятельности должен быть относительно значительным, как в нашем примере, чтобы эффективно идентифицировать проблему подрывной деятельности. Дополнительный подход, если в испытаниях используется блочная рандомизация, был предложен для выявления подозрительного дисбаланса [13].

Хотя существуют косвенные и неофициальные данные о значительной систематической ошибке, вызванной ошибочными процедурами рандомизации, исследователи по понятным причинам неохотно описывают такие проблемы. Новая хирургическая процедура, которую мы помогали оценить, вероятно, потребует более длительного периода общей анестезии и, вероятно, будет считаться менее подходящей для пожилых, более слабых пациентов.Поэтому мы были обеспокоены явным возрастным дисбалансом среди когорты, набранной на начальном этапе этого испытания; Дальнейшие исследования показали, что система была повреждена среди пациентов, набранных тремя клиницистами (их результаты не были использованы в окончательном анализе исследования). Проблема была ограничена периодом, когда использовался метод запечатанного конверта, и не наблюдалась после того, как была установлена ​​центральная телефонная рандомизация.

Проблема заключалась в недостаточном маскировании, а не в генерации последовательности.При использовании запечатанных конвертов существует ряд способов преждевременного раскрытия распределения до официального пробного ввода. Можно открыть более одного конверта до тех пор, пока не будет найдено желаемое распределение, порядок, в котором набираются пациенты, можно изменить таким образом, чтобы конкретному пациенту было назначено выбранное лечение, или распределение можно определить, не открывая конверт (например, с помощью трансиллюминации). ) с (необъективным) решением о включении в исследование, зависящим от распределения.Графики последовательности набора в зависимости от номера конверта были использованы для изучения этих возможностей; они должны показывать прямую линию, если процесс выполняется правильно, хотя даже это не исключает предвзятого входа. Мы действительно нашли примеры пропуска конвертов и изменения порядка среди участников, привлеченных тремя клиницистами. Изменение порядка вряд ли будет важным фактором; однако, поскольку только в двух из пяти случаев это произошло, пропущенное распределение отличалось от использованной карты.

Запечатанные конверты с последовательными номерами остаются широко используемым методом распределения в предполагаемых рандомизированных исследованиях, а иногда и единственным практическим методом рандомизации. Например, в выборке «открытых» исследований, опубликованных в крупных медицинских журналах в 2016 году, около 11% использовали запечатанные конверты для сокрытия распределения [10] Clark et al. Однако наш опыт подтверждает предыдущие анекдотические свидетельства, представленные Бергером [8] и Брауном и др. [9] иллюстрирует, почему использование конвертов более подвержено коррупции — часто из-за благих намерений, человеческой изобретательности, а не других подходов — и почему это далеко не идеальный метод сокрытия.В нем также подчеркивается рекомендация, содержащаяся в сводных стандартах отчетности по испытаниям (CONSORT) по отчетности о рандомизированных контролируемых испытаниях, о том, что должно быть дано полное описание реальных методов, используемых для генерации и сокрытия распределения исследований [14].

Ясно проиллюстрирована ошибка, связанная с отсутствием генерации последовательности распределения от исполнителя назначенной обработки. Если необходимо использовать запечатанный конверт или другой местный метод случайного распределения, ясный вывод из нашего исследования состоит в том, что это должна быть ответственность независимой третьей стороны, которая не имеет прямого участия в исследовании или в уходе за пациентами.Предпочтительна централизованная система, подобная той, которая действует в течение основного периода набора в это испытание.

В этом испытании метод распределения был изменен с блокированной рандомизации на минимизацию, а распределение было минимизировано центром. Однако использование любой формы ограничения рандомизации может увеличить риск предсказуемости и возможной подрывной деятельности через планирование [13]. Действительно, сообщалось о тематическом исследовании, когда подрывная деятельность произошла, несмотря на использование центральной телефонной службы рандомизации [15].Вероятно, это было вызвано использованием предсказуемой последовательности блоков при рандомизации.

(PDF) Тримерный иммуноген gp120 оболочки ВИЧ-1 индуцирует мощные и широкие петлевые антитела против V1V2 против ВИЧ-1 у кроликов и макак-резус

ССЫЛКИ

1. Фаучи А.С., Марстон HD. 2014. Ликвидация СПИДа — нужна ли вакцина против ВИЧ? N

Engl J Med 370: 495–498. https://doi.org/10.1056/NEJMp1313771.

2. Садананд С., Сускович Т. Дж., Альтер Г. 2016. Широко нейтрализующие антитела

против ВИЧ: новые идеи для разработки вакцины.Анну Рев Мед

67: 185–200. https://doi.org/10.1146/annurev-med-0

-0^.

3. Бертон Д. Р., Маскола-младший. 2015. Ответы антител на гликопро-

теинов оболочки при ВИЧ-1 инфекции. Nat Immunol 16: 571–576. https://doi.org/10

.1038 / ni.3158.

4. Храбер П., Матрос М.С., Бейлер Р.Т., Маскола Дж. Р., Монтефори, округ Колумбия, Корбер Б.Т.

2014. Распространенность широко нейтрализующих ответов антител во время

хронической инфекции ВИЧ-1. СПИД 28: 163–169.https://doi.org/10.1097/QAD

.0000000000000106.

5. Гаутам Р., Нисимура Ю., Пегу А., Насон М.К., Кляйн Ф., Газумян А.,

Голиджанин Дж., Баклер-Уайт А., Саджадпур Р., Ван К., Манкофф З., Шмидт

SD, Лифсон Д.Д., Маскола JR, Нуссенцвейг MC, Мартин Массачусетс. 2016. Одна инъекция

антител против ВИЧ-1 защищает от повторных заражений SHIV-

. Природа 533: 105–109. https://doi.org/10.1038/nature17677.

6. Shingai M, Donau OK, Plishka RJ, Buckler-White A, Mascola JR, Nabel GJ,

Nason MC, Montefori D, Moldt B, Poignard P, Diskin R, Bjorkman PJ,

Eckhaus MA, Klein F, Mouquet H, Cetrulo Lorenzi JC, Gazumyan A,

Burton DR, Nussenzweig MC, Martin MA, Nishimura Y.2014. Пассивная передача

умеренных титров сильнодействующих и широко нейтрализующих моноклональных антител против ВИЧ

блокирует инфекцию SHIV у макак. J Exp Med

211: 2061–2074. https://doi.org/10.1084/jem.20132494.

7. de Taeye SW, Moore JP, Sanders RW. 2016. Дизайн тримера оболочки ВИЧ-1

и стратегии иммунизации для индукции нейтрализующих антител широкого спектра действия.

Trends Immunol 37: 221–232. https://doi.org/10.1016/j.it.2016.01.007.

8.Томарас Г.Д., Плоткин С.А. 2017. Комплексные иммунные корреляты защиты

в испытаниях эффективности вакцины против ВИЧ-1. Immunol Rev 275: 245–261. https: // doi

.org / 10.1111 / imr.12514.

9. Rerks-Ngarm S, Pitisuttithum P, Nitayaphan S, Kaewkungwal J, Chiu J,

Paris R, Premsri N, Namwat C, de Souza M, Adams E, Benenson M,

Gurunathan S, Tartaglia J, Макнил Дж.Г., Фрэнсис Д.П., Стейблин Д., Биркс Д.Л.,

Чунсуттиват С., Хамбунруанг С., Тонгчароен П., Робб М.Л., Майкл

Н.Л., Кунасол П., Ким Дж.Х., следователи МОФ-ТАВЕГ.2009. Вакцинация

с ALVAC и AIDSVAX для профилактики ВИЧ-1 инфекции в Таиланде. N Engl

J Med 361: 2209–2220. https://doi.org/10.1056/NEJMoa02.

10. Haynes BF, Gilbert PB, McElrath MJ, Zolla-Pazner S, Tomaras GD, Alam

SM, Evans DT, Monte ori DC, Karnasuta C, Sutthent R, Liao HX, DeVico

AL, Williams G C, Пинтер A, Фонг Y, Джейнс H, DeCamp A, Huang Y,

Rao M, Billings E, Karasavvas N, Robb ML, Ngauy V, de Souza MS, Paris R,

Ferrari G, Bailer RT, Soderberg KA, Andrews C, Berman PW, Frahm N, De

Rosa SC, Alpert MD, Yates NL, Shen X, Koup RA, Pitisuttithum P,

Kaewkungwal J, Nitayaphan S, Rerks-Ngarm S, Michael NL, Kim JH .2012.

Иммунно-коррелятный анализ испытания эффективности вакцины против ВИЧ-1. N Engl J

Med 366: 1275–1286. https://doi.org/10.1056/NEJMoa1113425.

11. Золла-Пазнер S, deCamp A, Gilbert PB, Williams C, Yates NL, Williams WT,

Howington R, Fong Y, Morris DE, Soderberg KA, Irene C, Reichman C,

Pinter A, Parks R, Pitisuttithum P, Kaewkungwal J, Rerks-Ngarm S, Nitay-

aphan S, Andrews C, O’Connell RJ, Yang ZY, Nabel GJ, Kim JH, Michael

NL, Monte ioi DC, Liao HX, Haynes BF , Томарас Г.Д.2014. Вакцина-

, индуцированная антителами IgG к участкам V1V2 нескольких подтипов ВИЧ-1

, коррелирует со снижением риска заражения ВИЧ-1. PLoS One 9: e87572.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0087572.

12. Баруш Д.Х., Лю Дж., Ли Х., Максфилд Л.Ф., Аббинк П., Линч Д.М., Ямпьетро М.Дж.,

Сан-Мигель А., Моряк М.С., Феррари Г, Фортал Д.Н., Урманов И., Хирш В.М.,

Карвилл А. Mansfield KG, Stablein D, Pau MG, Schuitemaker H, Sadoff JC,

Billings EA, Rao M, Robb ML, Kim JH, Marovich MA, Goudsmit J, Michael

NL.2012. Вакцинная защита от приобретения нейтрализации —

Устойчивые к

вызовам SIV у макак-резусов. Nature 482: 89–93. https: //

doi.org/10.1038/nature10766.

13. Айер С.С., Гангадхара С., Виктор Б., Шен Х, Чен Х, Наби Р., Кастури С.П.,

Сабула М.Дж., Лабранш С.К., Редди П.Б., Томарас Г.Д., Монтефори, округ Колумбия, Мосс Б.,

Копейщик П., Пулендран Б, Козловский П.А., Амара Р.Р. 2016. Вирусоподобные частицы

, демонстрирующие тримерный вирус обезьяньего иммунодефицита (SIV) enve-

lope gp160, увеличивают широту ДНК / модифицированного вируса осповакцины ankara

Вакцинация против вируса осповакцины ankara

вызывает у макак резус индуцированный вакциной SIV.J Virol

90: 8842– 8854. https://doi.org/10.1128/JVI.01163-16.

14. Yates NL, Liao HX, Fong Y, deCamp A, Vandergrift NA, Williams WT, Alam

SM, Ferrari G, Yang ZY, Seaton KE, Berman PW, Alpert MD, Evans DT,

O’Connell RJ, Francis D, Sinangil F, Lee C, Nitayaphan S, Rerks-Ngarm S,

Kaewkungwal J, Pitisuttithum P, Tartaglia J, Pinter A, Zolla-Pazner S,

Gilbert PB, Nabel GJ, Michael NL, Kim JH, Монтефори, округ Колумбия, Haynes BF,

Tomaras GD.2014. Индуцированный вакциной Env V1-V2 IgG3 коррелирует с

более низким риском заражения ВИЧ-1 и снижается вскоре после вакцинации. Sci Transl

Med 6: 228ra39. https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3007730.

15. Ваккари М., Гордон С.Н., Фурати С., Шифанелла Л., Лиянаге Н.П., Кэмерон М.,

Кил ​​Б.Ф., Шен Х, Томарас Г.Д., Биллингс Э., Рао М., Чанг А.В., Доуэлл К.Г.,

Бейли-Келлог C, Brown EP, Ackerman ME, Vargas-Inchaustegui DA,

Whitney S, Doster MN, Binello N, Pegu P, Monte ¡ori DC, Foulds K, Quinn

DS, Donaldson M, Liang F, Lore K, Roederer M, Koup RA, McDermott A,

Ma ZM, Miller CJ, Phan TB, Forthal DN, Blackburn M, Caccuri F, Bissa M,

Ferrari G, Kalyanaraman V, Ferrari MG, Thompson D, Robert-Guroff M,

Ратто-Ким С., Ким Дж. Х., Майкл Н. Л., Фогат С., Барнетт С. В., Тарталья Дж.,

Вензон Д., Стейблин Д. М., Альтер Дж., Секали Р. П., Франчини Дж.2016. Адъювант-

зависимых врожденных и адаптивных иммунных сигнатур риска приобретения SIVmac251

. Нат Мед 22: 762–770. https://doi.org/10.1038/nm.4105.

16. Rolland M, Edlefsen PT, Larsen BB, Tovanabutra S, Sanders-Buell E, Hertz

T, deCamp AC, Carrico C, Menis S, Magaret CA, Ahmed H, Juraska M,

Chen L, Konopa П, Нария С., Стоддард Дж. Н., Вонг К., Чжао Х., Денг В.,

Мауст Б.С., Бозе М., Хауэлл С., Бейтс А., Лаззаро М., О’Салливан А., Лей Е.,

Брэдфилд А., Ибитамуно Г., Ассавадарачай В., О’Коннелл Р.Дж., деСуза М.С.,

Нитайяфан С., Реркс-Нгарм С., Робб М.Л., Маклеллан Д.С., Георгиев И., Квонг

П.Д., Карлсон Дж. Ким Дж.

2012. Повышенная эффективность вакцины против ВИЧ-1 против вирусов с генетическими сигнатурами

в Env V2. Nature 490: 417–420. Https://doi.org/10.1038/

nature11519.

17. Золла-Пазнер С., ДеКэмп А.С., Кардозо Т., Карасаввас Н., Готтардо Р., Вил-

Лиамс С., Моррис Д.Е., Томарас Г., Рао М., Биллингс Е., Берман П., Шен X,

Эндрюс С. , O’Connell RJ, Ngauy V, Nitayaphan S, de Souza M, Korber B,

Koup R, Bailer RT, Mascola JR, Pinter A, Monte ¡ori D, Haynes BF, Robb

ML, Rerks-Ngarm S, Michael Н.Л., Гилберт ПБ, Ким Дж.2013. Анализ антител V2

, индуцированных у вакцинированных в испытании эффективности вакцины ALVAC / AIDSVAX HIV-1

. PLoS One 8: e53629. https://doi.org/10.1371/journal

.pone.0053629.

18. Gottardo R, Bailer RT, Korber BT, Gnanakaran S, Phillips J, Shen X,

Tomaras GD, Turk E, Imholte G, Eckler L, Wenschuh H, Zerweck J, Greene

K, Gao H, Берман П. У., Фрэнсис Д., Синангил Ф., Ли К., Нитайяфан С.,

Реркс-Нгарм С., Кевкунгвал Дж., Питисутитум П., Тарталья Дж., Робб М.Л.,

Майкл Н.Л., Ким Дж. Маскола Дж. Р., Селф С., Гилберт

П, Монтефори, округ Колумбия.2013. IgG в плазме к линейным эпитопам в V2 и V3

областей gp120 ВИЧ-1 коррелируют со сниженным риском инфицирования в испытании эффективности вакцины

RV144. PLoS One 8: e75665. https://doi.org/10.1371/

journal.pone.0075665.

19. Кесавардхана С., Дас Р., Цитрон М., Датта Р., Экто Л., Шрилата Н.С., ДиСтефано

Д., Свойер Р., Джойс Дж. Г., Датта С., ЛаБранш С.С., Монтефори, округ Колумбия, Флинн Дж. А.,

Р. Варадара 2016. Дизайн на основе структуры циклически пермутированных тримеров ВИЧ-1

gp120, которые вызывают нейтрализующие антитела.J Biol Chem 292:

278–291. https://doi.org/10.1074/jbc.M116.725614.

20. Saha P, Bhattacharyya S, Kesavardhana S, Miranda ER, Ali PS, Sharma D,

Varadarajan R. 2012. Разработанные циклические пермутанты gp120 ВИЧ-1: импликации

катионов для структуры тримеров оболочки и дизайна иммуногена . Biochem-

истрия 51: 1836–1847. https://doi.org/10.1021/bi300003v.

21. Havenar-Daughton C, Carnathan DG, Torrents de la Pena A, Pauthner M,

Briney B, Reiss SM, Wood JS, Kaushik K, van Gils MJ, Rosales SL, van der

Woude P, Locci M, Le KM, de Taeye SW, Sok D, Mohammed AU, Huang

J, Gumber S, Garcia A, Kasturi SP, Pulendran B, Moore JP, Ahmed R,

Seumois G, Burton DR, Sanders RW, Silvestri G, Кротти С.2016. Прямое зондирование

ответов зародышевых центров выявляет иммунологические особенности

и узкие места для нейтрализации ответов антител на тример Env ВИЧ.

Cell Rep 17: 2195–2209. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2016.10.085.

22. Pauthner M, Havenar-Daughton C, Sok D, Nkolola JP, Bastidas R, Boopa-

ty AV, Carnathan DG, Chandrashekar A, Cirelli KM, Cottrell CA, Eroshkin

AM, Guenaga J, Kaushik , Kulp DW, Liu J, McCoy LE, Oom AL, Ozorowski

G, Post KW, Sharma SK, Steichen JM, de Taeye SW, Tokatlian T, Torrents

de la Pena A, Butera ST, LaBranche CC, Монте-фори, округ Колумбия , Silvestri G, Wilson

IA, Irvine DJ, Sanders RW, Schief WR, Ward AB, Wyatt RT, Barouch DH,

Crotty S, Burton DR.2017. Выявление надежных нейтрализующих реакций организма против

уровня 2 у нечеловеческих приматов путем иммунизации тримеров оболочки ВИЧ

с использованием оптимизированных подходов. Иммунитет 46: 1073–1088.