Рациональная антибиотикотерапия заболеваний нижних дыхательных путей в практике педиатра: проблемы и возможности uMEDp

В статье изложены основные цели антибиотикотерапии и показания к ней при острых респираторных вирусных инфекциях. Приведены данные литературы о современном спектре возбудителей бактериальных очагов нижних отделов дыхательных путей у детей (бактериальный бронхит и пневмония). Перечислены спектр и механизмы антибиотикорезистентности выделяемых возбудителей. Представлен краткий обзор фармакологических свойств и чувствительности антибактериальных препаратов основных групп, рекомендуемых для лечения заболеваний нижних дыхательных путей у детей, – полусинтетических аминопенициллинов, ингибитор-защищенных препаратов, цефалоспоринов, макролидов. Приведены отечественные алгоритмы антибактериальной терапии при бронхите и пневмонии, которые базируются на принципах доказательной медицины. Названы преимущества растворимой пероральной формы антибактериальных препаратов – диспергируемых таблеток Солютаб с высокой биодоступностью, эффективностью и безопасностью.

Введение

Как известно, при воспалительных заболеваниях инфекционной природы применяется антибактериальная терапия. Победное шествие антибиотиков началось в 1940-х гг., а в 1970–90-х гг. мир отпраздновал внедрение в клиническую практику большинства современных антимикробных препаратов – ингибитор-защищенных аминопенициллинов, цефалоспоринов III–IV поколения, карбапенемов, фторхинолонов, макролидов и др. 

Во всем мире антибиотики применяются в различных областях медицины. Их выбор огромен. Международный союз за разумное использование антибиотиков (Alliance for the Prudent Use of Antibiotic – APUA) зарегистрировал на мировом рынке более 600 торговых названий. В России используется около 200 (без учета генерических наименований). Тем не менее разработки новых антибиотиков продолжаются. Правда, в последнее десятилетие фармацевтическая индустрия зарегистрировала и вывела на рынок лишь единицы.

Одна из актуальных проблем, связанных с антибактериальной терапией в России, – распространенная практика необоснованно частого применения антибиотиков. По данным многих исследований, эти препараты получают до 75% больных с острыми респираторными заболеваниями (ОРЗ), хотя вирусная природа ОРЗ составляет 85–95% [1]. Антимикробные препараты нередко назначаются без соответствующих показаний, применяются нерационально (без учета спектра наиболее значимых возбудителей и данных антибиотикорезистентности, фармакокинетики, профиля безопасности). Кроме того, необоснованно часто амбулаторным пациентам антибиотики назначают парентерально, что затрудняет соблюдение режима введения лекарств и снижает приверженность больных лечению [2]. 

Как показали результаты фармакоэпидемиологических исследований [3], еще одна проблема – распространенная практика самолечения, приобретение антибактериальных средств в аптечной сети без предварительной консультации врача.

Верификация диагноза

Появление новых препаратов, новой информации о клинико-фармакологических характеристиках ранее известных лекарственных средств, динамика резистентности основных микроорганизмов к антибактериальным препаратам диктуют необходимость изменения подходов к лечению инфекционных заболеваний. 

Существует два подхода к лечению – этиотропный и эмпирический. И в амбулаторной сети, и в условиях стационара клиницист, как правило, использует эмпирический подход.

Российские рекомендации по антибактериальной терапии [2, 4–10], отражающие современные международные тенденции и стандарты лечения, основаны на доказательных данных, полученных в результате метаанализа многоцентровых клинических исследований. В них определены приоритетные препараты (препараты выбора), которые должны назначаться в первую очередь, и альтернативные, к применению которых следует прибегать в случае неэффективности или плохой переносимости препарата выбора или невозможности его назначения.

Выбор антибактериальной терапии основывается прежде всего на верификации диагноза. Важно также знать спектр наиболее часто выявляемых возбудителей при данной патологии, о наличии у пациента фоновых заболеваний, располагать сведениями о предшествовавшей настоящему лечению антибактериальной терапии, а также о свойствах самих фармацевтических средств (эффективности, безопасности, что особенно необходимо в педиатрической практике, возможности соблюдения режима введения или приема препарата). Клиницист, нацеленный в первую очередь на эффективность лечения, всегда должен рассчитывать на высокую приверженность лечению самого пациента. 

К инфекциям нижних дыхательных путей у детей относятся острый бронхит и пневмония. Острый бронхит обычно вызывается респираторными вирусами и не требует назначения антибактериальной терапии. Бактериальные бронхиты чаще рассматриваются как осложнения на фоне выраженного нарушения проходимости бронхов (аспирация инородного тела, стенозирующий ларинготрахеит), при наследственных заболеваниях легких (муковисцидоз) или пороках развития бронхов. Часто болеющие дети с измененной микробной картиной слизистой носоглотки имеют смешанную вирусно-бактериальную природу бронхитов. Этиологический спектр острых бактериальных бронхитов в педиатрической практике представлен в основном Streptococcus pneumoniae (45–50%), Haemophilus influenzae (17%), реже Moraxella catarrhalis и внутриклеточными патогенами Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae (17 и 4% соответственно) [11].

Пневмонии согласно современным взглядам представляют группу различных по этиологии, патогенезу, морфологической характеристике острых инфекционных заболеваний [12–14]. По данным официальной статистики, заболеваемость пневмонией в России в разных возрастных группах составляет около 4%, что скорее всего не отражает истинной картины. Пневмония – это жизнеугрожающее состояние. В России в год умирают от внебольничной пневмонии около 1000 детей, причем от 1 до 5% при лечении на дому [15]. С практической точки зрения пневмонию важно подразделять на внебольничную и нозокомиальную (госпитальную). В повседневной практике врачи сталкиваются в основном с внебольничной пневмонией, при которой инфицирование ребенка происходит в обычных условиях (вне лечебного учреждения). Этиология внебольничной пневмонии существенно зависит от возраста ребенка, времени года и преморбидного фона. Внебольничные пневмонии являются преимущественно результатом активизации собственной бактериальной микрофлоры ротоносоглотки ребенка. Реже имеет место внешнее инфицирование.

Внебольничные пневмонии у детей до 6 месяцев жизни часто развиваются на фоне муковисцидоза, привычной аспирации пищи, первичного иммунодефицита и обусловлены грамотрицательной кишечной флорой (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae) и Staphylococcus aureus. Нередко встречаются атипичные пневмонии, вызванные Chlamydia trachomatis (инфицирование ребенка происходит интранатально, манифестация заболевания через 1,5–2 месяца). У недоношенных детей пневмонию может вызывать условно патогенная микрофлора и Pneumocystis carinii. У детей, заболевших в результате контакта с больным ОРВИ, пневмонии могут быть вызваны типичной пневмотропной флорой S. pneumoniae и H. influenzae (10%). У детей с 6 месяцев жизни и старше во всех возрастных периодах преобладающим возбудителем внебольничных пневмоний является S. pneumoniaе (35–50%), реже заболевание вызывает H. influenzae (7–10%), M. catarrhalis (5–10%). У детей школьного возраста увеличивается частота атипичных пневмоний, обусловленных M. pneumoniae и C. pneumoniae (15–32%) [12–14].

Прогноз респираторных инфекций бактериальной природы существенно зависит от своевременной и адекватной антибиотикотерапии. Диагностические исследования (рентгенодиагностика, лабораторные анализы) не должны способствовать отсроченному началу антибактериального лечения. Современные рекомендации требуют раннего назначения антибиотиков: у амбулаторных пациентов в первые четыре часа, у госпитализированных по поводу внебольничной пневмонии сразу после поступления в стационар.

Рост резистентности микроорганизмов как следствие агрессивной антибиотикотерапии

Возбудители внебольничных пневмоний обычно обладают достаточно высокой чувствительностью к антибактериальным препаратам. Возрастающая резистентность микроорганизмов к антибактериальным препаратам вызывает чрезвычайное беспокойство у клиницистов [16]. Возникновение и рост резистентности – закономерный ответ на широкое, порой агрессивное использование антимикробных препаратов. Как следствие – мутация микроорганизмов, отбор и размножение резистентных штаммов. Инфекции, вызванные резистентными штаммами, отличаются более тяжелым течением, чаще требуют госпитализации, ухудшают прогноз заболевания. Чувствительность возбудителей к антибиотикам зависит как от их генетических свойств, так и от предшествующего контакта с антибиотиками. Механизмы, которые используют микроорганизмы для защиты от антибиотиков, разнообразны [3, 17]. Для группы бета-лактамных антибиотиков наиболее актуальным механизмом устойчивости является их инактивация в результате гидролиза одной из связей бета-лактамного кольца ферментами бета-лактамазами. На сегодняшний день известно 500 бета-лактамаз четырех молекулярных классов. Несмотря на широкую циркуляцию бактерий, вырабатывающих бета-лактамазы, они не представляют серьезной проблемы для терапии современными бета-лактамными антибиотиками – цефалоспоринами III–IV поколения, защищенными аминопенициллинами, карбапенемами. Эти группы лекарств нечувствительны к гидролизу. Еще одним механизмом устойчивости к бета-лактамам является модификация мишени действия, а именно снижение сродства к белкам, участвующим в синтезе клеточной стенки бактерий (КСБ), в результате чего повышается минимальная подавляющая концентрация (МПК) и снижается эффективность бета-лактама. Устойчивость пневмококков к бета-лактамам обусловлена мутациями в генах КСБ.

Резистентность H. influenzae и M. catarrhalis к бета-лактамам обусловлена продукцией бета-лактамаз. Но существуют штаммы H. influenzae с модификацией мишени воздействия – бета-лактамазонегативные ампициллинорезистентные, соответственно устойчивые и к ингибитор-защищенным бета-лактамам. Основной мишенью действия макролидов является 50S субъединица бактериальной рибосомы. Антимикробный эффект обусловлен нарушением синтеза белка на рибосомах микробной клетки. Защитой большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий от макролидных антибиотиков служит модификация мишени действия в основном в результате ее метилирования. Причем 16-членные макролиды наиболее защищены от разнообразных видов метилаз известных бактерий. Гены указанных ферментов локализуются на плазмидах, которые способствуют катастрофическому распространению резистентности. В последние годы отмечается нарастание резистентности избирательно в отношении 14- и 15-членных макролидов. Ограничение использования препаратов малоэффективно в борьбе с плазмидным распространением устойчивости.

Выбор препаратов для стартовой терапии

В связи с катастрофическим падением чувствительности актуальных микроорганизмов к антимикробным препаратам необходимо соблюдать определенные правила назначения антибиотиков для предотвращения селекции полирезистентных штаммов микроорганизмов. Особое внимание следует уделять выбору препарата для эмпирической стартовой терапии, режиму дозирования и соблюдению пациентом врачебных назначений.

Отечественные рекомендации выбора стартового антибактериального препарата в лечении заболеваний нижних дыхательных путей у детей разработаны с учетом возраста ребенка и формы заболевания [1–10]. Препаратами первого выбора признаны полусинтетические аминопенициллины, ингибитор-защищенные препараты и макролиды. Антибактериальную терапию следует начинать с пероральной формы амоксициллина, действующего на основного возбудителя бактериального бронхита и внебольничной пневмонии S. pneumoniaе. В России, по данным отечественного масштабного исследования ПеГАС (1999–2009) [18, 19], 99,6% штаммов S. pneumoniae чувствительны к амоксициллину. Именно поэтому в большинстве случаев выбор терапии оказывается эффективным и достаточным. Ингибитор-защищенные бета-лактамы не имеют преимуществ, поскольку стрептококки не вырабатывают бета-лактамазы. Высокая активность в отношении ключевых возбудителей S. pneumoniae, H. influenzae (штаммов, не продуцирующих бета-лактамазы), низкий уровень вторичной резистентности, хороший профиль безопасности, доказанная эффективность в контролируемых клинических исследованиях, оптимальное соотношение «стоимость/эффективность» делают амоксициллин в России препаратом выбора, то есть стартовым при большинстве бактериальных инфекций верхних и нижних дыхательных путей. Его обычная дозировка у детей составляет 30–60 мг/кг/сут, разделенная на два-три приема.

Показаниями для стартовой монотерапии макролидами являются непереносимость бета-лактамов, атипичная инфекция и микст-инфекция. В последнем случае возможна комбинация макролидов и бета-лактамов [20, 21]. К преимуществам современных макролидных антибиотиков относятся быстрая высокая концентрация препарата в воспалительном очаге, многократно превышающая сывороточную, и воздействие на биопленки с подавлением адгезии бактерий. Макролиды способны стимулировать определенные звенья иммунной системы. Кстати, максимальной активностью в отношении S. pneumoniae среди используемых в России макролидов обладает джозамицин (Вильпрафен). Макролиды на сегодняшний день считаются наиболее безопасной группой антибиотиков.

При наличии у ребенка ЛОР-патологии или хронических бронхолегочных заболеваний, а также курса антибиотикотерапии в предшествующие три месяца показано назначение защищенных аминопенициллинов или цефалоспоринов II–III поколения, действующих как на пневмококк, так и на гемофильную палочку, либо комбинация современных макролидов и бета-лактамов. 

При бактериальной суперинфекции на фоне гриппа показан старт антибиотикотерапии с курса бета-лактамов (аминопенициллины, цефалоспорины II–IV поколения). 

Эффективность терапии антибиотиками оценивают через 36–48 часов по улучшению общего состояния, появлению аппетита, снижению температуры тела, уменьшению одышки и отсутствию отрицательной динамики рентгенологических данных. Эффект от лечения наступает быстро обычно в 85–90% случаев. При неэффективности лечения первоначально выбранным антибиотиком его следует заменить на препарат выбора другой группы или использовать альтернативный из препаратов 2-го и 3-го ряда, наиболее дорогостоящих и порой имеющих более низкий профиль безопасности.

При тяжелом течении заболевания или невозможности (часто временной) перорального приема антибиотика (рвота на фоне интоксикации, кашля) целесообразно применять ступенчатую терапию. Такая терапия предполагает двухэтапное применение антибиотика  начиная с парентерального введения препарата (внутривенно капельно, внутримышечно) с переходом на пероральный прием после стабилизации клинического состояния пациента. Оптимальным вариантом ступенчатой терапии является последовательное использование двух лекарственных форм (для парентерального введения и приема внутрь) одного и того же антибиотика [22–24]. Экономическая выгода и психологическая разгрузка пациента в педиатрии очевидны.

Обратите внимание: пенициллины и цефалоспорины относятся к препаратам с зависимым от времени антимикробным действием. То есть важным условием является поддержание в сыворотке крови и очаге инфекции концентрации, в три-четыре раза превышающей МПК в течение 40–60% временного интервала между дозами. Причем увеличение концентрации антибиотика (дозы) не влияет на эффективность. В этой связи очень важно соблюсти режим приема и дозирования препарата [3].

Биодоступность препарата – важный фармакокинетический параметр

Для антимикробных препаратов, принимаемых внутрь, важен такой фармакокинетический параметр, как биодоступность. Высокой биодоступностью характеризуются современные лекарственные формы. Так, если амоксициллин в таблетках или капсулах имеет биодоступность около 75–80%, то у специальной растворимой формы Солютаб она превышает 90% [25]. При изготовлении диспергируемых таблеток Солютаб применяются инновационные технологии: сначала активное вещество заключается в микрогранулы, затем из микрогранул формируется таблетка, которая полностью растворяется (в действующем веществе антибиотика благодаря нанофильтрации отсутствуют примеси). Микрогранула защищает лекарственный препарат от воздействия соляной кислоты в желудке. Высвобождение антибиотика из микрогранул происходит только при воздействии щелочного сока в тонкой кишке. Выделившиеся микрогранулы равномерно распределяются по поверхности кишечного эпителия, обеспечивая максимальную площадь всасывания. Благодаря быстрому и полному всасыванию антибиотика его практически не остается в кишечнике, что существенно уменьшает раздражающее действие на слизистую оболочку. Кроме того, не угнетается жизнедеятельность нормальной микрофлоры. 

Контролируемое высвобождение антибиотика в кишечнике обеспечивает маскировку вкуса, а качество ароматизаторов сводит к минимуму возможность развития аллергических реакций, что немаловажно при лечении детей. 

Диспергируемая таблетка содержит минимальное количество наполнителя и не содержит сахара и глютена, что не ограничивает антибактериальную терапию у детей с фоновой патологией. Полное и стабильное по времени (50–55 секунд) растворение диспергируемой таблетки Солютаб в стакане воды комнатной температуры позволяет пациенту визуально убедиться в подлинности антибиотика при приготовлении раствора, что служит гарантией качества.

Преимуществом лекарственной формы диспергируемых таблеток Солютаб является обеспечение разнообразия способов приема в зависимости от ситуации, возраста пациента и личных предпочтений, что повышает приверженность терапии. Диспергируемую таблетку Солютаб можно проглотить целиком, разделить на части, разжевать, приготовить сироп или растворить в воде с образованием суспензии с приятным вкусом. Независимо от выбранного способа приема фармакокинетические свойства и клиническая эффективность лекарственного препарата остаются неизменными, поскольку адсорбируемая доза соответствует принятой.

Амоксициллин всасывается в кишечнике на 93%. Добавление клавуланата калия обеспечивает эффективную защиту амоксициллина. Клавулановая кислота – нестабильная молекула, ее концентрация снижается при хранении в растворенном виде [26, 27], а значит, уменьшаются ее содержание в препарате и протективный эффект защиты амоксициллина от бета-лактамаз. Технология Солютаб позволила улучшить параметры фармакокинетики амоксициллина и клавулановой кислоты: повышена биодоступность, снижена вариабельность всасывания. Кроме того, благодаря низкой остаточной концентрации и минимальному времени нахождения действующего вещества в кишечнике амоксициллина и клавуланата калия Флемоклав Солютаб хорошо переносится и оказывает незначительное влияние на нормальную кишечную микрофлору. Эффективность Флемоклава Солютаб достигает 95,9%, число нежелательных реакций в два раза ниже по сравнению со стандартными формами амоксициллина/клавуланата. Антибиотик-ассоциированная диарея у пациентов, принимающих препарат, встречается в 2,8 раза реже (6% против 17%) [28–29]. 

Примерами антибиотиков в форме диспергируемых таблеток являются Флемоксин Солютаб (амоксициллин), Флемоклав Солютаб (амоксициллин/клавулановая кислота), Вильпрафен Солютаб (джозамицин), Супракс Солютаб (цефиксим).

Длительность терапии при пневмонии

При нетяжелой внебольничной пневмонии антибактериальная терапия должна продолжаться не менее пяти дней (доказательства уровня I) и может быть завершена через два-три дня после нормализации температуры. В случаях недостаточной адекватности (доза, режим) стартового лечения терапию продлевают до семи – десяти дней (доказательства уровня III). Сохранение отдельных клинических, лабораторных или рентгенологических признаков пневмонии не является абсолютным показанием к продолжению антибиотикотерапии или ее смене. В подавляющем большинстве случаев их разрешение происходит самостоятельно или под влиянием симптоматической терапии (противовоспалительной, муколитической, дренажной). 

Рентгенологическое разрешение пневмонии всегда отстает от клинического, поэтому не может служить определяющим критерием длительности антибиотикотерапии. Однако в такой ситуации клиницист всегда должен проводить дифференциальную диагностику с онкологическими, специфическими (туберкулез) заболеваниями, пороками развития бронхолегочной системы, аспирацией инородного тела [8, 12–14]. 

Заключение

Индикаторами качества антимикробной терапии являются медицинский и экономический исход лечения. Рациональные алгоритмы и рекомендации по антимикробной терапии стандартизируют процесс лечения больных. Раннее начало антибиотикотерапии, адекватное стартовое лечение, использование ступенчатой схемы позволяют повысить эффективность лечения, снизить летальность, число госпитализаций, сократить затраты на лечение и повысить удовлетворенность пациентов медицинской помощью. Создание национальных руководств по лечению заболеваний способствует повышению эффективности лечения и благоприятному исходу воспалительных заболеваний нижних дыхательных путей, а также уменьшает риск принятия ошибочных решений при ведении больных.

Диспергируемые таблетки — что это такое и как применяются?

Обратившись к врачу с жалобой на здоровье, после обследования, доктор назначает прием таблеток, имеющих разную форму выпуска. Распространенными являются диспергируемые таблетки, упрощающие процесс приема.

Диспергируемые таблетки – что это понимает не каждый пациент, предлагаемый материал поможет ближе познакомиться с новой формой выпуска медпрепаратов, а специалисты GlobalPharma сделают все, чтобы на рынок попадал качественный продукт.

Что такое диспергируемые таблетки?

«Диспергируемые» означают измельченные. Привычный способ принятия таблеток оральный, их глотают с помощью воды. Диспергируемые таблетки запивать не нужно, они предназначены для рассасывания. Препарат помещается в рот, под язык и при воздействии слюны растворяются самостоятельно. Впервые такая форма появилась в 1996 году, разработчиками стали ученные из США. Таблетки растворяются за 30 секунд – такое правило установило Управление по санитарному надзору за медпрепаратами США (временные рамки сейчас пересматриваются).

Средство состоит из молекул, к примеру, антибиотика, и наполнителя. Два компонента образуют свою микросферу. При взаимодействии с водой медпрепарат распадается на составляющие микросреду. Одна таблетка может содержать множество таких образований, удерживающих активное вещество до момента проникновения в подходящую среду.

Попав в желудок, микросреда защищает медпрепарат от воздействия соляной кислоты, а в 12-перстной кишке антибиотик, связь с наполнителем теряется, активное вещество попадает в кровь.

Многие фармакологические фирмы разрабатывают известные лекарственные препараты в такой форме, к примеру, Золпидем, Циталопрам и другие.

Кому подходят?

Таблетки диспергируемые в полости рта подходят тем пациентам, которые не могут по состоянию здоровья и физиологическим отклонениям либо по другим причинам осуществить другой способ приема лекарств.

Препарат помогает пройти курс терапии, он назначается людям, имеющим дефект глотания, маленьким детям. Медпрепараты не нужно запивать водой, их прописывают парализованным пациентам, тем, кто прикован к постели. Такие лекарства хорошо подходят путешественникам, тем, кто постоянно в дороге и не имеет под рукой воду.

Прием: растворить в воде, положить под язык, растворить во рту. Если медпрепарат прописывают грудничкам, его дают во время грудного вскармливания.

Преимущества

Диспергируемая таблетка – это препарат, наделенный рядом преимуществ, среди которых выделяют:

1. Быстрая растворимость. Обычная таблетка медленно всасывается в кровь, она может повредить слизистую оболочку, желудочно-кишечный тракт. Диспергируемые исключают нанесение вреда организму.
2. Высокая биодоступность. Лекарства хорошо усваиваются организмом, быстрее влияют на источник заболевания.
3. Распад на микрогранулы. Терапевтический курс эффективней, его приравнивают к применению инъекций.

Диспергируемые медпрепаарты безопасные (меньший риск удушения), приятные на вкус, подходят взрослым, детям, пожилым людям. Их легко глотать, не нужно запивать водой, они распространенные в педиатрии, психологии. Медпрепарат всасывается в слизистую оболочку щек, активные компоненты попадают в организм, минуя пищеварительный тракт. Благодаря этому содержащиеся вещества быстрее попадают в кровь.

Работа с профессионалами

Для реализации лекарственных средств в России производителю нужно иметь разрешение, получить которое помогут специалисты компании GlobalPharma. Компания поможет пройти все этапы, а именно:

1. Подать заявку.
2. Пройти экспертизу документов.
3. Провести лабораторные исследования.
4. Зарегистрировать продукт в Едином Реестре.
5. Получить документ.

GlobalPharma гарантирует быстрые сроки прохождения регистрации, помощь в сборе нужного пакета документов, сотрудники отработают запросы, возражения, направленные представителями Роспотребнадзора.

Клинические исследования, проводимые компанией, включают: составление письменного соглашения, обсуждение сроков, выбор дизайна КИ и утверждение его с клиентом, работу с документацией, подготовка расчетов, выборки.

Публикации Лаборатории Биосинтеза | ФГБНУ «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе»

Публикации Лаборатории Биосинтеза

1. Голышкин А.В., Альмяшева Н.Р., Зиангирова М.Ю., Краснопольская Л.М. // Ростовые и биохимические характеристики Некоторых видов съедобных и лекарственных грибов в зависимости от способов предобработки лигноцеллюлозного сырья. / Сельхоз. Биология. 2019. Т. 54. № 3. С. 607-615. doi: 10.15389/agrobiology.2019.3.607rus
2. Горшенёв В.Н., Зиангирова М.Ю., Колесов В.В., Краснопольская Л.М., Просвирин А.А., Телешев А.Т. Новые аддитивные технологии формирования сложных костных структур для медико-биологических применений //РЭНСИТ, 2019. – Т. 11. — № 3. – С. 351-370. DOI: 10.17725/rensit.2019.11.351.)
3. Teplykh A., Zaitsev B., Borodina I., Semyonov A., Ziangirova M., Almyasheva N., Golyshkin A., Krasnopolskaya L. and Kuznetsova I. The study of the mechanical properties of thin films using piezoceramic acoustic resonators // ITM Web of Conferences. Vol. 30. 2019. Article Number 07002. DOI: https://doi.org/10.1051/itmconf/20193007002
4. Ziangirova M., Almyasheva N., Golyshkin A., Krasnopolskaya L., Teplykh A., Zaitsev B., Borodina I., Semyonov A., Kolesov V., Kuznetsova I. Mechanical properties of thin films based on Hericium erinaceus mycelium //Abstract Book “XVIII Congress of European Mycologists”, September, 16-21 2019, Warsaw and Białowieża, Poland, 2019. – P. 87.
5. Golyshkin A., Almyasheva N., Yarina M., Krasnopolskaya L. Mycelium growth of xylotrophic basidiomycetes on chemically modified lignocellulosic substrates // Abstract Book “XVIII Congress of European Mycologists”, September, 16-21 2019, Warsaw and Białowieża, Poland, 2019. – P. 98.
6. Almyasheva N., Golyshkin A., Rogozhin E., Krasnopolskaya L. The comparative study of phenolic metabolites produced by Hericium erinaceus and Agrocybe aegerita in vegetative and generative stages // Abstract Book “XVIII Congress of European Mycologists”, September, 16-21 2019, Warsaw and Białowieża, Poland, 2019. – P. 99.
7. Краснопольская Л.М. Метаболиты базидиальных грибов как основа создания лекарственных средств для борьбы с социально значимыми болезнями и повышения качества жизни пациентов // II Международная научная конференция по метаболомике, 6-7-инюня 2019 г. Москва http://vilarnii.ru/konferentciia-po-metabolomike-2019/
8. Тренин А.С., Краснопольская Л.М., Бычкова О.П., Альмяшева Н.Р., Голышкин А.В., Максимова М.А., Цвигун Е.А. // Скрининг ингибиторов биосинтеза стеролов для создания новых антифунгальных антибиотиков.  / Успехи медицинской микологии 2019. Т.20. С.465-467
9. Тренин А.С., Краснопольская Л.М.,  Бычкова О.П., Максимова М.А., Альмяшева Н.Р., Голышкин А.В. Биологически активные соединения высших грибов с антифугальной активностью и способностью к подавлению биосинтеза стеролов/ 5-ая Международная Междисциплинарная конференция  «Молекулярные и Биологические аспекты Химии, Фармацевтики и Фармакологии». 2019. С. 172.

    

10. Альмяшева Н.Р., Голышкин А.В., Зиангирова М.Ю., Петрова Д.А., Краснопольская Л.М. Продукция липолитических ферментов ксилотрофными грибами отдела Basidiomycota. //Антибиотики и химиотерапия./ 2018. Т. 63. № 1-2. С.8-13.

11. Almyasheva N.R., Shuktueva M.I., Petrova D.A., Kopytsyn D.S., Kotolev M.S., Vinokurov V.A., Novikov A.A. Biodisel fuel production by Aspergillus niger whole-cell biocatalyst in optimized medium // Mycoscience./ 2018. V. 59. № 2. P. 147-152. DOI: 10.1016/j.myc.2017.09.003.   

12. Корсун В.Ф., Корсун Е.В., Бореко Е.И., Краснопольская Л.М., Савинова О.В. Противовирусная активность чаголена // Успехи медицинской микологии (Материалы мемориальной конференции по медицинской микологии к 120-летию А.М.Ариевича, Москва, 14 апреля 2016 г.), 2016. – Т. XVI. – С. 267-271.
13.     Краснопольская Л.М., Автономова А.В., Ярина М.С. Клинические испытания препаратов полисахаридов высших грибов и выбор дальнейших путей их использования // В сб.: Биологические особенности лекарственных и ароматических растений и их роль в медицине (Сборник научных трудов международной конференции «Биологические особенности лекарственных и ароматических растений и их роль в медицине» 23-25 июня 2016 г., Москва), М., 2016. – С. 488-492.
14.     Краснопольская Л.М., Шуктуева М.И., Автономова А.В., Ярина М.С., Джавахян Б.Р., Исакова Е. Б., Бухман В.М. Противоопухолевые и антиоксидантные свойства водорастворимых полисахаридов из мицелия базидиального гриба Flammulina velutipes. Антибиотики и химиотерапия. 2016. Т.61. № 11-12.
15.     Автономова А.В., Краснопольская Л.М., Шуктуева М.И., Исакова Е.Б., Бухман В.А. Оценка противоопухолевого действия погруженной культуры Ophiocordy-ceps sinensis и Cordyceps militaris. //Антибиотики и химиотерапия, 2015, Т.60, № 7-8. С 14-17.
16.     Краснопольская Л.М., Ярина М.С., Автономова А.В., Усов А.И., Исакова Е.Б., Бухман В.М. Сравнительное изучение противоопухолевой активности полисахаридов из мицелия Ganoderma lucidum в опытах in vivo. // Антибиотики и химиотерапия, 2015, т. 60, №11-12, с. 25-29.
17.     Краснопольская Л.М., Нагубнова Л.А., Сафрай А.И. Фузикокцин А регулирует процесс плодообразования шампиньона двуспорового. // Успехи медицинской микологии, 2014, Т. 12, С.237-238.
18.     Шуктуева М.И., Ярина М.С., Автономова А.В., Исакова Е.Б., Бухман В.М., Краснопольская Л.М. Система скрининга водорастворимых полисахаридов базидиальных грибов с противоопухолевыми свойствами // Успехи медицинской микологии, 2014, Т. 12 С. 342-344.
19.     Автономова А.В., Краснопольская Л.М.Противовирусные свойства метаболитов базидиальных грибов. Антибиотики и химиотерапия. 2014. Т. 59. № 7-8. С. 41-48
20.     М.С. Евсенко, А.С. Шашков, А.В. Автономова, Л.М. Краснопольская, А.И. Усов. Полисахариды базидиальных грибов. Растворимые в щелочи полисахариды из мицелия трутовика лакированного Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P.Karst.// Биохимия, 2009. — Том 74. — Вып. 5. — С. 657 – 667.
21.     В.Г.Бабицкая, Т.А.Пучкова, Т.В.Черноок, В.В.Щерба, Л.М.Краснопольская, А.В.Автономова, В.М.Бухман, Е.Б.Исакова, Н.А.Бисько, Д.А.Смирнов, Н.В.Иконникова. Грибы рода Cordyceps: физиологически активные соединения, биологическое действие.//Биотехнология, 2009. — № 2. – С.
22.     Автономова А.В., Леонтьева М.И., Исакова Е.Б., Белицкий И.В., Усов А.И., Бухман В.М., Лапин А.А., Краснопольская Л.М. Противоопухолевые и антиоксидантные свойства полисахаридных экстрактов и фракций биомассы базидиомицета Hypsizygus ulmarius, полученной путем глубинного культивирования. // Биотехнология, 2008. — № 2. – С. 23-29.
23.     Krasnopolskaya L., Leontieva M., Avtonomova A., Isakova E., Belitskii I.V., Usov A.I., Buchman V.M. Antitumor Properties of Submerged Cultivated Biomass and Extracts of Medicinal Mushrooms of Genus Hypsizygus Singer. // Int. J. of Medicinal Mushrooms, 2008. V. – 10. N – 1. P – 25-35.
24.     Бухман В.М., Трещалина Е.М., Краснопольская Л.М., Исакова Е.Б., Седакова Л.А., Автономова А.В., Леонтьева М.И., Соболева Н.Ю., Белицкий И.В., Баканов А.В. Получение и биологические свойства водных экстрактов и их композиций из мицелия базидиомицетов. // Антибиотики и химиотерапия, 2007. Т. 52. — № 1-2. –С.4-9.
25.     Leontieva M.I., Avtonomova A.V., Belitskii I.V., Isakova E.B, Usov A.I., Buchman V.M., Krasnopolskaya L.M. Submerged cultivation and antitumor activity of Hypsizygus ulmarius // Int. J. of Medicinal Mushrooms, 2007. V – 9. N – 3&4. P – 275.
26.     Krasnopolskaya L.M., Leontieva M.I., Avtonomova A.V., Belitskii I.V., Isakova E.B, Buchman V.M., Desighn of effective submerged cultivation methods for xylotrophic medicinal and culinary-medicinal basidial mushrooms // Int. J. of Medicinal Mushrooms, 2007. V – 9. N – 3&4. P – 321-322.
27.     Avtonomova A.V., Belitskii I.V., Isakova E.B, Evsenko M.S., Usov A.I., Buchman V.M., Krasnopolskaya L.M. Production and antitumor properties of fruit body substances and submerged mycelium of Ganoderma lucidum // Int. J. of Medicinal Mushrooms, 2007. V – 9. N – 3&4. P – 273-274.
28.     Avtonomova A.V., Belitskii I.V., Isakova E.B, Evsenko M.S., Usov A.I., Buchman V.M., Krasnopolskaya L.M. Production and antitumor properties of fruit body substances and submerged mycelium of Ganoderma lucidum // Int. J. of Medicinal Mushrooms, 2007. V – 9. N – 3&4. P – 273-274.
29.     Автономова А.В.,Краснопольская Л.М.,Максимов В.Н. Оптимизация состава питательной среды для погружённого культивирования Ganoderma lucidum(Curt.:Fr.)P.Karst// Микробиология.- 2006. — Т.75,№2.-С.186-192.
30.     Краснопольская Л.М., Белицкий И.В., Автономова А.В., Соболева Н.Ю., Усов А.И., Исакова Е.Б., Либензон А., Бухман В.М. Система скрининга экстрактов базидиальных грибов, обладающих противоопухолевой активностью.// Успехи медицинской микологии. Том 5. Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии. Москва, 2005. — Т. 5. — С.192-195.
31.     Соболева Н.Ю., Краснопольская Л.М., Федорова Г.Б., Катруха Г.С. Антибиотические свойства и рост в погруженной культуре штаммов лекарственного базидиального гриба Lentinus edodes. // В сб.: Успехи медицинской микологии. Материалы второго всероссийского конгресса по медицинской микологии. Москва, 2004. — т. III. — с. 240-242. ремонт окон одинцово
32.     Краснопольская Л.М., Белицкий И.В., Антимонова А.В., Соболева Н.Ю. Стратегия оптимизации способов культивирования лекарственных грибов. // В сб.: Успехи медицинской микологии. Материалы второго всероссийского конгресса по медицинской микологии. Москва, 2004. — т. III. — с. 222-224.
33.     Методика проведения испытаний на отличимость, однородность стабильность. Вешенка (Pleurotus (Fr.) Kumm.) . RTG/1036/1. Официальный бюллетень ФГУ «Государственная комиссия РФ по испытанию и охране селекционных достижений». Москва, 2003. — № 6. — с. 455-465.
34.     Краснопольская Л.М., Антимонова А.В., Белицкий И.В., Бухман В.М., Исакова Е.Б., Либензон А.В., Завьялова Л.А., Гарибова Л.В. Лекарственный базидиальный гриб трутовик лакированный Ganoderma lucidum (Curt.:Fr.) P. Karst.: погруженное культивирование и противоопухолевые свойства. // В сб.: Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты, Москва, 2003. — С.46-55.
35.     Краснопольская Л.М., Антимонова А.В., Белицкий И.В., Бухман В.М., Исакова Е.Б., Либензон А.В., Завьялова Л.А., Гарибова Л.В. Лекарственный базидиальный гриб трутовик лакированный Ganoderma lucidum (Curt.:Fr.) P. Karst.: погруженное культивирование и противоопухолевые свойства. // В сб.: Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты, Москва, 2003. — С.46-55.
36.     Гарибова Л.В., Антимонова А.В., Завьялова Л.А., Краснопольская Л.М. Рост и морфологические признаки мицелия трутовика лакированного Ganoderma lucidum в зависимости от условий культивирования. // Микология и фитопатология, 2003. — Т. 37. — Вып. 3. — С. 14-19.
37.     Бухман В.М., Исакова Е.Б., Антимонова А.В.. Белицкий И.В., Либензон А.В., Краснопольская Л.М. Изучение противоопухолевых свойств мицелия лекарственного гриба Ganoderma lucidum (Curt.:Fr.) P. Karst в опытах in vivo. // В сб.: Успехи медицинской микологии, Москва, 2003. — т. 1. — С. 245-247.
38.     Краснопольская Л. М., Белицкий И. В. Система оценки качества посевного мицелия съедобных и лекарственных культивируемых грибов. // Гавриш, 2002. — № 4. -С. 25-28.
39.     Краснопольская Л.М., Белицкий И.В. Культивируемый съедобный гриб шиитаке: лечебные свойства и биотехнологии выращивания.// Гавриш, 2001. — №2. — с.21-25.
40.     Краснопольская Л.М., Белицкий И.В., Федорова Г.Б., Катруха Г.С. Pleutotus djamor: способы культивирования и антимикробные свойства.// Мик. и фитопатол., 2001.- Т.35.- Вып.1.- С.82-67.
41.     Белицкий И.В., Краснопольская Л.М. Посевной мицелий съедобных и лекарственных ксилотрофных грибов: технологии выращивания и критерии качества.// Гавриш, 2000.- № 3.- с.11-14.
42.     Белицкий И.В., Краснопольская Л.М. Посевной мицелий съедобных и лекарственных ксилотрофных грибов: технологии выращивания и критерии качества.// Гавриш, 2000.- № 3.- с.11-14.
43.     Макеева А.П., Краснопольская Л.М., Садовская В.Л. Закономерности накопления абсцизовой кислоты в культуральной жидкости гриба Cercospora rosicola. // Прикл.биохим. микробиол., 1999. — №4. — С.437-440.
44.     Макеева А.П., Краснопольская Л.М., Садовская В.Л. Закономерности накопления абсцизовой кислоты в культуральной жидкости гриба Cercospora rosicola. // Прикл.биохим. микробиол., 1999. — №4. — С.437-440.
45.     Макеева А.П., Краснопольская Л.М., Садовская В.Л. Закономерности накопления абсцизовой кислоты в культуральной жидкости гриба Cercospora rosicola. // Прикл.биохим. микробиол., 1999. — №4. — С.437-440.
46.     Краснопольская Л.М. Грибы класса Basidiomycetes — источники лекарственных веществ.// В сб.: Современные проблемы микологии, альгологии и фитопатологии. М., 1998, — С.230-232.
47.     Priede M., Krasnopolskaya l., Viestur V. Control of production of individual fusicoccins at different dissolved oxygen concentration. // World J. Microbiol. Biotechnol., 1997. — V13. — P. 665-670
48.     Краснопольская Л.М., Макеева А.П., Соколова Л.М., Садовская В.Л. Образование гиббереллинов А4 и А7 штаммами гриба Fusarium moniliforme.// Микробиология, 1997. — т 66. — №4. — С. 419-422.

Перейти к «Лаборатория биосинтеза биологически активных веществ»

Самой популярной формой антибиотиков для детей в России являются растворимые таблетки — опрос

Фото: Олег Яровиков

Самой популярной формой антибиотиков для детей в России являются растворимые таблетки — опрос Фото: Олег Яровиков

Российские мамы при лечении детей чаще всего отдают предпочтение растворимым таблеткам и порошку/гранулам для приготовления суспензий, однако правила применения последних соблюдаются не всегда. К такому выводу пришел Всероссийский центр изучения общественного мнения (ВЦИОМ). Социологи опубликовали данные об использовании детских антибиотиков.

К медикаментозному лечению детей родители почти всегда прибегают по рекомендации доктора: подавляющее большинство российских мам малышей до восьми лет (88 процентов) следуют назначению врача, когда дают ребенку тот или иной антибиотик. Еще 11 процентов вспоминают прошлый опыт (препарат, ранее прописанный врачом).

Наиболее популярной формой антибиотиков для детей в стране, согласно данным опроса, являются растворимые в воде таблетки (за последний год их применяли 38 процентов мам), на втором месте порошок или гранулы для приготовления суспензии (32 процента), на третьем — готовый сироп или суспензия.

При этом существенная доля мам не знает правил хранения и приготовления суспензий: 32 процента хранят их не в холодильнике, а в шкафу, аптечке или в другом месте, 16 процентов подвергают термическому воздействию, еще 16 процентов используют иные методы подогрева, вместо ожидания согревания при комнатной температуре.

В вопросе дозировки суспензий мамы более грамотны: 96 процентов используют мерную ложку, стаканчик или шприц из упаковки к препарату, только четыре процента применяют чайную ложку или отмеряют «на глазок». Среди опрошенных женщин, использующих суспензии, более половины испытывают трудности на различных этапах их приготовления, и опасения, что препарат будет неправильно приготовлен. Основные сложности связаны с точностью дозирования воды и ее температуры.

Всероссийский опрос ВЦИОМ проведен по заказу кафедры педиатрии РМАПО 30 октября — 06 ноября 2016 года среди женщин, воспитывающих детей в возрасте до восьми лет.

Новый антибиотик широкого спектра не вызвал резистентности у бактерий

Механизмы действия вещества SCH-79797 и его производного IRS-16

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

Ученые обнаружили новое антибактериальное вещество, активное против грамположительных и грамотрицательных бактерий и не вызывающее резистентность. Как говорится в статье, опубликованной в журнале Cell, вещество действует сразу на две цели: на метаболизм фолатов и на клеточную мембрану бактерий. Из-за двойного механизма действия бактерии не смогли выработать устойчивость к новому веществу.

За последние 20 лет для практического применения в медицине было одобрено всего шесть новых классов противомикробных препаратов, причем ни один из них не активен против грамотрицательных бактерий. Для сравнения, за первые 30 лет после открытия пенициллина в 1929 году было описано и внедрено в практику более двадцати классов антибиотиков. Такое резкое снижение темпов разработки и создания новых антимикробных препаратов часто связывают с экономическими факторами, ведь создание такого препарата стоит дорого и занимает много времени, а клинические испытания он может и вовсе не пройти. 

Поэтому фармакологические компании редко идут на риск, из-за чего в мире сложился кризис общественного здравоохранения: эволюция мультирезистентных бактерий, горизонтальный перенос генов резистентности между бактериями вкупе со старыми и уже не действующими препаратами — все это привело к появлению бактерий, на которые не действует практически ни один известный на сегодняшний день антибиотик. Самый яркий представитель этой когорты — метициллинрезистентный золотистый стафилококк, или MRSA. В нашем большом материале «Конец прекрасной эпохи» мы рассказывали про основные проблемы, с которыми сталкиваются врачи по всему миру, пытаясь лечить инфекции, вызванные устойчивыми к антибиотикам бактериями, и как вообще получилось, что потомки спасшего когда-то миллионы людей пенициллина не могут помочь нам сегодня.

Вопрос лечения резистентных бактериальных инфекций с каждым годом становится все острее. С этой целью модифицируют старые антибиотики, применяют аналоги витамина А, но, возможно, полностью решить эту проблему поможет создание новых классов антибиотиков, не вызывающих резистентности у микроорганизмов.

Группа ученых под руководством Джеймса Мартина II (James K. Martin II) из Принстонского университета занималась поиском антибиотиков широкого спектра с новыми механизмами действия на бактериальные клетки. Исследование проводили на кишечной палочке, лишенной липополисахарида. Среди 33000 уникальных молекул ученые обратили внимание на одну — SCH-79797. Это антагонист рецептора, активируемого протеазой, первого типа, который обнаруживается на тромбоцитах, клетках иммунной системы, клетках эпителия и многих других клетках. Рецепторы этого класса участвуют в регуляции гемостаза и воспаления. Сам же SCH-79797 увеличивает способность нейтрофилов убивать бактерии, действуя, возможно, как антибиотик. Учитывая, что исследования, посвященные его антикоагулянтной активности, показали, что по крайней мере пять миллиграмм SCH-79797 на килограмм массы тела могут безопасно переноситься у животных, ученые решили исследовать, как же это вещество убивает бактерии.

При культуральном исследовании обнаружилось, что SCH-79797 подавляет рост грамотрицательных бактерий Neisseria gonorrhoeae и Acinetobacter baumannii, и грамположительных бактерий Enterococcus faecalis и Staphylococcus aureus. В том числе снижался рост колоний мультирезистентных штаммов N. gonorrhoeae и MRSA.

Исследование in vivo на личинках восковой моли, зараженной летальной дозой A. baumannii, показало низкую токсичность вещества: личинке вводили четырехкратную минимальную ингибирующую концентрацию SCH-79797, и она не вызвала значимых изменений жизнедеятельности. При этом выживаемость личинки значимо возросла (p < 0,001).

Выживаемость личинок G. mellonella, зараженных летальной дозой A. baumannii, при лечении различными антибиотиками. Выживаемость G. mellonella, получавшей SCH-79797, была аналогична выживаемости при применении контрольных антибиотиков: меропенема, рифампицина и гентамицина.

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

При высеивании метициллинрезистентного золотистого стафилококка на агар, содержащий четырехкратную минимальную ингибирующую концентрацию, ученым не удалось выделить стабильных мутантов, резистентных к SCH-79797. Для количественного определения показателей резистентности последовательно выращивали две биологически независимые культуры S. aureus MRSA на агаре с сублетальными концентрациями SCH-79797, а также с тремя контрольными антибиотиками: новобиоцином, триметопримом и низином. Через 25 дней бактерии не демонстрировали перекрестной устойчивости к SCH-79797. Чтобы распространить эти результаты на грамотрицательные виды, ученые повторили последовательное выращивание двух биологически независимых культур A. baumannii. Резистентность бактерии оставалась постоянной для SCH-79797, но повышалась для всех других антибиотиков, включая гентамицин. Таким образом, отсутствие резистентности не зависело от вида бактерии.

Изменение резистентности A. baumannii к SCH-79797 и гентамицину

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

С помощью программного анализа ученые доказали отличие механизма действия SCH-79797 от механизмов других известных антибиотиков. Чтобы найти искомую цель, с которой взаимодействует SCH-79797, ученые использовали анализ теплового сдвига: интактные клетки и клетки, обработанные препаратом, нагревают до определенных температур и собирают денатурированные растворимые белки при каждом значении температуры. Белки, которые связываются с препаратом, термически стабилизируются, что приводит к сдвигу температуры, при которой эти белки осаждаются. Оказалось, что SCH-79797 значительно изменил термическую стабильность дигидрофолатредуктазы (точнее ее гомолога у E. coli — FolA). В качестве положительного контроля использовали хорошо описанный ранее антибиотик триметоприм, нацеленный на дигидрофолатредуктазу (DHFR), и обнаружили, что он также термически стабилизирует свою известную цель — FolA.

Схема анализа теплового сдвига, который сравнивает термическую стабильность всего протеома с лекарственной обработкой и без нее. Относительная доля растворимых и нерастворимых белков определяется с помощью ультрацентрифугирования и масс-спектрометрии

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

Чтобы определить, как SCH-79797 влияет на метаболизм фолатов в живых клетках, ученые использовали масс-спектрометрию для измерения относительного количества пулов метаболитов фолата в E. coli NCM3722, обработанных SCH-79797. Клетки E. coli NCM3722 обрабатывали SCH-79797 в концентрации 13,9 миллиграмм на миллилитр (13 минимальных ингибирующих доз) в течение 15 мин. В ответ на это уровни субстрата DHFR — 7,8-дигидрофолата — выросли в 10 раз по сравнению с необработанными клетками, в то время как уровни метаболитов фолата значительно снизились. Такая картина характерна при ингибировании дигидрофолатредуктазы (FolA у E. coli). Аналогичная картина наблюдается при действии триметоприма — известного ингибитора DHFR.

Из-за того, что SCH-79797 и триметоприм ингибируют дигидрофолатредуктазу, количество субстрата этого фермента — дигидрофолата (dihydrofolate) — увеличивается, а количество продукта реакции — тетрагидрофолата (tetrahydrofolate) — и последующих метаболитов фолата уменьшается

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

Чтобы определить, ингибирует ли SCH-79797 дигидрофолатредуктазу непосредственно, ученые получили очищенный фермент FolA и измерили его активность в зависимости от концентрации вещества. Было обнаружено, что концентрация полумаксимального ингибирования FolA составляет 8,6 ± 3 микромоль на литр. Также они измерили начальную активность FolA при различных концентрациях субстрата дигидрофолата, чтобы установить конкурентноспособность SCH-79797. При концентрации 8,6 микромоль на литр константа Михаэлиса увеличивается с 32 ± 25 микромоль на литр до 100 ± 80 микромоль на литр. Эти результаты указывают на то, что SCH-79797 функционирует, по крайней мере частично, как конкурентный ингибитор активности FolA на его субстрате.

Поскольку клетки, устойчивые к триметоприму, оказывались чувствительными к SCH-79797, ученые предположили, что у этого вещества есть еще одна мишень, при действии на которую бактериальные клетки погибали. Проточная цитометрия обработанных SCH-79797 клеток с флуоресцентными красителями выявила значительные изменения поляризации и проницаемости мембраны. Эти эффекты на мембрану не являются вторичными последствиями ингибирования дигидрофолатредуктазы, так как обработанная триметопримом кишечная палочка не показала существенных изменений поляризации и проницаемости мембраны. Таргетный эффект SCH-79797 на мембрану также не является видоспецифичным, так как аналогичные результаты были получены у B. subtilis. Эти результаты показывают, что независимо от своей способности ингибировать дигидрофолатредуктазу, SCH-79797 нарушает как мембранный потенциал, так и проницаемость клеточной мембраны.

Химический анализ SCH-79797 показал, что его ядро представлено пирролохиназолиндиамином, который ответственен за связывание с дигидрофолатредуктазой. Одной из двух боковых групп оказалась гидрофобная изопропилфенильная группа. Именно она изменяет проницаемость и поляризацию клеточной мембраны бактерии. Ученые присоединили к SCH-79797 еще одну фенольную группу и получили более гидрофобное вещество IRS-16. В эксперименте IRS-16 показал высокую антибактериальную активность, связанную с нарушением метаболизма фолатов у бактерий и изменениями проницаемости и поляризации их клеточной стенки.

Химическое строение SCH-79797

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

Химическое строение IRS-16

James K. Martin II et al. / Cell, 2020

SCH-79797 подавлял рост некоторых клеточных линий млекопитающих в связи с чем, ученые сосредоточили свое внимание на IRS-16, поскольку его летальная доза была в сто раз больше дозы, необходимой для убийства бактерий. Максимальная переносимая доза IRS-16 составила 15 миллиграмм на килограмм массы при внутривенном введении, при этой дозе концентрация IRS-16 в плазме достигала максимума — 1,4 миллиграмма на миллилитр с периодом полураспада 15,8 часов. Исследование микросомального аппарата печени исследуемых мышей показало высокую стабильность IRS-16.

Наконец, ученые определили, обладает ли IRS-16 антибактериальной активностью в модели бактериальной инфекции у мыши. С этой целью они смоделировали вагинальную инфекцию N. gonorrhoeae, поскольку для этого грамотрицательного патогена существует острая потребность в новых антибиотиках из-за широко распространенной резистентности к существующим препаратам. В бактериальной культуре IRS-16 проявлял устойчивую активность в отношении N. gonorrhoeae с минимальной ингибирующей концентрацией 0,03 миллиграмма на миллилитр. IRS-16 должен сохраняться у мышей в концентрациях выше 0,03 миллиграмма на миллилитр в течение почти 48 ч. После заражения мышей N. gonorrhoeae им внутривенно ввели дозу из расчета 10 миллиграмм на килограмм. Через 26 часов IRS-16 достоверно снижал нагрузку N. gonorrhoeae (Р < 0,05). Высокий терапевтический индекс и фармакокинетический профиль подтверждает, что IRS-16 может действовать как эффективный антибиотик в модели гонореи мышей in vivo.

Если вам интересно узнать что-то еще из мира новых антибиотиков, то обязательно обратите внимание на книгу Мэтта Маккарти, в которой он рассказывает про новый антибиотик, применяемый при инфекциях кожи и мягких тканей, приводит клинические случаи и рассуждает на тему будущего антибиотикотерапии.

Вячеслав Гоменюк 

Химики РУДН получили антибиотик из хитина

Химики РУДН впервые получили полимерные наночастицы из производных хитозана с антибактериальной активностью на уровне современных антибиотиков. Хитозан — это полиаминосахарид, который получают из хитина и активно используют как биологическую добавку и косметологическое средство, однако антибактериальные свойства хитозана выражены весьма слабо, главным образом, ввиду его низкой растворимости в воде. Химическая модификация хитозана позволяет получить растворимые в воде хитозановые производные с повышенной антибактериальной активностью. В данном же исследовании были получены производные хитозана, обладающие крайне высокой антибактерильной активностью и выраженной растворимостью в воде. Чтобы синтезировать хитозановые производные, из которых образуются высокоактивные наночастицы, ученые разработали новый подход на основе сочетания методов клик-химии и ультразвуковой обработки. С помощью предложенного подхода можно будет получать и другие полисахаридные частицы с антибактериальной активностью. Работа опубликована в журнале International Journal of Biological Macromolecules.

Хитозан – нетоксичный биоразлагаемый и биосовместимый полимер, который промышленно получают из хитина, удаляя из его звеньев ацетильную группу. Хитозан активно используют в качестве биологической добавки, косметологического средства и регулятора роста в сельском хозяйстве, добавляют в корма для животных. Однако все полезные свойства хитозана связаны с его адгезивными свойствами: он взаимодействует со слизистыми оболочками, облегчая проникновение лекарственных препаратов внутрь организма. Хитозан характеризуется слабой антибактериальной активностью, которая сильно ограничена его низкой растворимостью в воде.

Химики РУДН под руководством ассистента кафедры неорганической химии Андрея Критченкова впервые получили производные с антибактериальными свойствами на уровне современных антибиотиков. Повышенная антибактериальная активность оказалась характерна для соединений хитозана с триазольным циклом и бетаиновым фрагментом, в которых можно управлять количеством катионных групп.

Чтобы получить это соединение, Критченков и его коллеги впервые использовали оригинальную методику – она совмещает два подхода, сравнительно недавно применяемых для химических превращений хитозанов. Первый из них – это азид-алкиновое циклоприсоединение, один из важнейших методов клик-химии, который позволяет очень селективно и с высоким выходом скреплять между собой нужные молекулы. Второй подход — ультразвуковая обработка, за счет нее значительно ускоряется клик-реакция и не требуются анаэробные условия её проведения. Одновременно используя два этих метода, ученые могли получить катионный полимер, при этом контролируя его размер и точный химический состав.

«Mы впервые перенесли в область химии хитозана одновременное сочетание клик-реакций и ультразвуковой обработки и смогли подобрать такие условия ультразвукового облучения, при котором и реакция протекает скорее, и условия её выполнения значительно мягче и удобнее, и полимерная цепь исходного хитозана сохраняет свою целостность, то есть не разрывается. Видимо, сложность оптимизации условий по частоте, мощности, амплитуде ультразвука останавливала попытки наших предшественников закончить это дело. Это очень сложная и кропотливая работа», — сказал Критченков.

Затем, чтобы повысить антибактериальную активность полимера, из отдельных полимерных молекул химики получали наночастицы диаметром около 100 нанометров. Известно, что часто именно в форме наночастиц полимеры приобретают антибактериальные свойства. Наличие у наночастиц необходимых свойств Критченков и его коллеги  проверили на клетках золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus) и кишечной палочки (Escherichia coli). Оказалось, что если для отдельных компонентов полимерного соединения – триазола, бетаина и хитозана – зона ингибирования не превосходила 13 мм, то для полученных наночастиц эта величина достигала 45 мм для стафилококка и 36 мм для кишечной палочки. Это, например, более чем в полтора раза превышает показатели стандартных антибиотиков – амплициллина и гентамицина.

Авторы работы отмечают, что применение нашлось не только для наночастиц производных хитозана, но и для полимера в его изначальной форме. Полимерные молекулы представляют собой поликатионы, поэтому эффективно связывают полианионы, например нуклеиновых кислот. Поэтому их можно использовать для трансфекции – введения ДНК в эукариотические клетки невирусным методом. Ученые измерили трансфекционную активность на клетках печени человека, и получили значения порядка 30 тысяч клеток на квадратный сантиметр – то есть на уровне современных коммерческих препаратов, таких как липофектин.

«Перспектива применения в качестве антибактериального средства точно есть. Сейчас наши коллеги-биологи заканчивают эксперименты in vivo, и они очень успешные», — отметил ученый.

По словам ученых, основное преимущество полученных производных хитозана и в качестве антибактериального средства, и для систем переноса генетической информации – отсутствие токсических эффектов. Химики уверены, что аналогичным образом можно будет получать и другие полимерные частицы с антибактериальной и трансфекционной активностью.

Работа в журнале International Journal of Biological Macromolecules

Антибиотики для детей широкого спектра

Антибиотик (антибактериальный препарат, противомикробное средство) – это препарат, который эффективен при лечении бактериальных инфекций. Его эффект заключается в непосредственном влиянии на бактерию, он ее убивает. Также его эффект может заключаться в замедлении размножения бактерии, что позволяет иммунитету справиться с ним. Высокая распространенность инфекций, большой выбор антибиотиков для детей, неоправданное назначение данных препаратов при заболеваниях у детей и взрослых привела к угрожающим последствиям для жизни людей – антибиотикоустойчивости. Согласно Евразийским рекомендациям, в ЕС 25000 смертей ежегодно связаны именно с антибиотикоустойчивостью. На данный момент противомикробные средства являются невосполнимым ресурсом человечества. Устойчивость к антибактериальным средствам можно рассматривать как угрозу национальной безопасности.

Прежде, чем перейти к выбору детского антибиотика, рассмотрению дозировки, длительности применения, необходимо разобрать и объяснить основные моменты в формировании устойчивости к антибактериальным средствам. Лишь после этого можно адекватно судить о выборе и подходу к назначению данных лекарственных средств.

Антибиотикорезистентность

Антибиотикорезистентность – это термин, обозначающий устойчивость к антибиотикам. Кто виноват в этом? Основной причиной является избыточное и бесконтрольное применение противомикробных средств. Это касается не только медицины.

Назначение антибиотиков всегда должно быть оправданным.

Причины

• Применение в медицине. Неоправданное назначение на амбулаторном этапе, в стационаре, самолечение (безрецептурный отпуск). Основной акцент уделяется противодействию неоправданного назначения антибиотиков в первичном звене (на амбулаторном этапе). Для этого специально разрабатываются и внедряются в практическое здравоохранение клинические рекомендации и алгоритмы по назначению антибиотиков детям. Также через средства массовой информации проводятся разъяснения населению о необходимости разумного применения антимикробных средств и опасности их самостоятельного применения.
• Применение антибиотиков в ветеринарии.
• Применение в агроиндустрии.

Основные правила правильного применения антибактериальных препаратов

1. Противомикробное средство принимается только при наличии бактериальной инфекции, которая предполагается или доказана документировано.
2. Во время применения лекарственного средства необходимо придерживаться оптимального режима. Первое – это правильный выбор лекарства. В остальном необходимо соблюдать адекватную дозу и длительность применения.
3. При выборе лекарственного средства необходимо учитывать региональную ситуацию по устойчивости к антибиотикам наиболее распространенных возбудителей и учитывать вероятность инфицирования больного данными бактериями.
4. Не применять антибиотики низкого качества и с недоказанной эффективностью.
5. Не использовать антибиотики с целью профилактики.
6. Эффект от применения антибактериального средства оценивают через 48-72 часа после начала лечения.
7.  Объяснить вред несоблюдения режима применения лекарственного средства, а также пояснить опасность самолечения.
8. Способствовать правильному применению лекарственного средства со стороны больного.
9. В каждом случае необходимо использовать методы, позволяющие установить причину инфекции.
10. При назначении антибактериального препарата врачам необходимо придерживаться рекомендациям, основанным на доказательной медицине.

Показания к назначению антибиотиков

Довольно распространенной ошибкой является использование антибиотиков при заболеваниях, которые развиваются вследствие не бактериальной инфекции.

Не следует использовать антибиотики при вирусных инфекциях.

Среди таких заболеваний:

• Острый фарингит.
• Острый ларинготрахеит.
• Ринит.
• ОРВИ, только.
• Острый бронхит. Допустимо использование антибиотиков при развитии сужения бронхов, а также при длительности лихорадки более 5 дней.

В данных случаях назначение антибиотиков не оправдано, так как причиной, приведшей к данным заболеваниям, зачастую являются вирусы.

Существуют и спорные моменты, когда к развитию заболевания могут приводить как вирусы, так и бактерии. К таким заболеваниям относятся:

• Острый риносинусит.
• Острый средний отит.
• Острый тонзиллит.

В таких случаях антибиотик назначается исключительно после обследования и наблюдения врачом за пациентом.

При вирусных инфекциях (фарингит, ринит, ларингит, трахеит) эффективность антибиотиков равна эффекту плацебо. Важно помнить, что назначение антибактериальных средств не предотвращает развитие бактериальной суперинфекции (то есть присоединения бактериальной инфекции к уже имеющейся вирусной). Эффективных средств против ОРВИ нет. Применение распространенных в аптечных сетях противовирусных иммуностимулирующих средств зачастую не несет в себе никакого эффекта. В данном случае противовирусное средство можно рассматривать как аскорбиновую кислоту или чеснок. В таких случаях назначается адекватное патогенетическое и симптоматическое лечение, которое позволяет устранить и ликвидировать симптомы ОРВИ. Используются: парацетамол, ибупрофен, муколитики (амброксол, ацетилцистеин, карбоцистеин), сосудосуживающие капли в нос при насморке, назальный кортикостероид при риносинусите. Если же имеет место заболевания с вирусной или бактериальной причиной (тонзиллит, синусит, средний отит), то в таком случае рекомендуется отсроченная на 2-3 дня антибактериальная терапия. Отсроченная тактика назначения антибиотиков при инфекциях верхних дыхательных путей позволила снизить частоту назначений антибиотиков на 40%.

Данные утверждения несут за собой доказательный характер и более подробно описаны в учебном пособии «Рациональное применение антимикробных средств в амбулаторной практике врачей», написанное по основам и доказательной базе Евразийских рекомендаций 2016 года.

Основные виды антибиотиков и их распространенные представители на рынке

Ниже рассмотрим наиболее популярные и часто использующиеся группы антибактериальных средств:

• Бета-лактамы. Среди них выделяют пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы. Среди пенициллинов стоит выделить: амоксициллин, ампициллин, тикарциллин, карбенициллин, мезлоциллин, мециллам. Наиболее популярными цефалоспоринами являются: цефазолин, цефалексин, цефуроксим, цефотаксим, цефтриаксон, цефепим, цефтобипрол. Карбапенемы используются гораздо реже. Можно выделить меропенем.
• Макролиды. К макролидам относятся: кларитромицин, азитромицин (сумамед), джозамицин.
• Тетрациклины. Наиболее распространенные: тетрациклин, доксициклин, окситетрациклин.
• Аминогликозиды. Популярные из них: гентамицин, амикацин, изепамицин.
• Левомицетины. Торговые наименования: левомицетин, хлоромицетин.
• Гликопептидные антибиотики. Наиболее часто используют: ванкомицин, блеомицин.
•  Линкозамиды. В медицине используются: линкомицин, клиндамицин.
•  Фторхинолоны. Среди них чаще всего используют: ципрофлоксацин, левофлоксацин, гемифлоксацин. Являются антибиотиком для детей широкого спектра действия. Данные антибиотики не противопоказанные в детской практике, но их применение у ребенка резко ограничено. 

Важно помнить, что указанные препараты имеют свои показания и противопоказания, а также применяются против определенных инфекций.

Указанные препараты имеют свои показания и противопоказания, обладают узким или широким спектром активности в отношении бактерий. Некоторые из перечисленных препаратов могут использоваться детям до года. Детские антибиотики существуют в таблетках, в суспензии, в ампулах для внутривенного и внутримышечного введения. Расчет дозы, разведение антибиотиков и введение необходимой дозы ребенку должно производиться медицинским персоналом во избежание нежелательных, побочных реакций, а также осложнений во время выполнения инъекций. Они должны назначаться исключительно врачом. 

Длительность применения антибактериальных средств

Родители часто задают вопросы: «Сколько дней ставят антибиотик детям? Какой лучший антибиотик для детей? Что давать ребенку при приеме антибиотиков?». В большинстве случаев достаточно 5-7 дней применения. Существуют исключения, при которых длительность применения может возрастать до 10 – 28 дней. На второй вопрос однозначно ответить нельзя. У каждого лекарственного средства существуют свои показания и противопоказания, поэтому использование того или иного препарата зависит от ситуации (возраста, диагноза, сопутствующей патологии и др.). На третий вопрос многие доктора ответят одинаково: « Пробиотики». Пробиотик позволит восстановить нормальную микрофлору кишечника, которая подверглась влиянию антибактериального средства. Как правило, они назначаются курсом от 2 недель до 1 месяца.

Вы всегда можете проконсультироваться с врачом, если вас интересуют какие-либо вопросы касательно лечения.

Согласно Евразийским рекомендациям, с целью преодоления антибиотикоустойчивости эксперты подчеркивают необходимость обращать внимание пациентов на строгое соблюдение режима применения лекарственного средства. Необходимо использовать оптимальные лекарственные формы антибиотиков с высокой биодоступностью, в частности, диспергируемые таблетки Солютаб, что согласуется с современной позицией ВОЗ и UNICEF. Преимущества диспергируемых таблеток Солютаб:

• Полностью всасываются в кишечнике. Вследствие этого эффект равен внутривенному эффекту.
• Создают высокую концентрацию в очаге инфекции.
• Лучшая переносимость.
• Хорошие органолептические свойства.
• Возможность растворять таблетки, что позволяет использовать данную лекарственную форму у детей.
• Для проглатывания требуется минимальное количество жидкости. 
• Имеют преимущество перед суспензией – исключаются ошибки в приготовлении.

Диспергируемые таблетки, рекомендуемые ВОЗ и UNICEF:

• Флемоксин Солютаб
• Флемоклав Солютаб
• Супракс Солютаб
• Вильпрофен Солютаб
• Юнидокс Солютаб

Родителям детей стоит помнить, что незавершенный курс предписанного лечения антибиотиком приводит к формированию устойчивости бактерий и длительного нахождения микроба в организме.

Осложнения применения антибиотиков

Во время применения антибиотиков существует риск развития нежелательных реакций. К таким осложнениям относятся:

• Гепатотоксичность – повреждение печени. Чаще всего отмечается при приеме моксифлоксацина, макролидов, клавуланата.
• Кардиотоксичность – повреждение сердца. Такая реакция может отмечаться при применении фторхинолонов, азитромицина, кларитромицина.
• Нейротоксичность – повреждение нервной системы. Отмечается у фторхинолонов.
• Аллергия. Характерна для пенициллинов, цефалоспоринов.

По факту, чем шире спектр противомикробной активности, тем выше риск развития нежелательных реакций.

Выбор антибиотика у ребенка

Ранее мы рассмотрели основные заболевания верхних и нижних дыхательных путей, при которых могут применяться противомикробные средства. Сейчас разберем основные препараты, которые могут использоваться при той или иной патологии, а также укажем необходимую дозировку лекарственного средства.

Не принимайте антибиотики без назначения врача.

Не используйте препараты самостоятельно! Препараты и дозировки приведены ниже исключительно в ознакомительных целях и не эквивалентны лечению, назначаемому врачом.

Острый средний отит

Препаратом выбора является амоксициллин 40-90 мг/кг/сут в 3 приема. Длительность терапии 10 дней, у детей < 5лет, 5-7 дней у детей >5 лет. Препаратом второй линии является амоксициллин/клавуланат. Препаратом третьей линией является джозамицин.

Острый риносинусит

Аналогично применению антибактериальных средств при остром среднем отите.

Острый тонзиллит

Препаратом выбора является амоксициллин 45-60 мг/кг в 3 приема, Феноксиметилпенициллин вн 25-50 мг/кг 3-4 раза в сутки. Препаратом второй линии является цефиксим. Препаратом третьей линией является джозамицин. Длительность терапии 10 дней.

Внебольничная пневмония

Терапия выбора – амоксициллин вн 45-90 мг/кг/сут в 3 приема. Препаратом второй линии является амоксициллин/клавуланат, цефуроксим в/м, цефтриаксон в/м. Препаратом третьей линией является джозамицин 40-50 мг/кг/сут в 2 приема.

Антибиотики являются незаменимыми препаратами в борьбе с бактериальной инфекцией. Назначение данных лекарственных средств должно производиться исключительно по медицинским показаниям. Очень важно придерживаться предписанному режиму применения антибактериального средства. Не занимайтесь самолечением. При возникновении признаков инфекции обращайтесь к педиатру, который поможет установить диагноз, причину заболевания, а также назначить адекватное лечение.

антибиотиков — NHS

Антибиотики используются для лечения или профилактики некоторых видов бактериальных инфекций. Они работают, убивая бактерии или предотвращая их распространение. Но они работают не на все.

Многие легкие бактериальные инфекции проходят сами по себе без использования антибиотиков.

Антибиотики не действуют при вирусных инфекциях, таких как простуда и грипп, а также при большинстве случаев кашля и боли в горле.

Антибиотики больше не используются для лечения:

• инфекции грудной клетки
• инфекции уха у детей
• боли в горле

Что касается антибиотиков, посоветуйтесь с врачом, нужны они вам или нет.Устойчивость к антибиотикам — большая проблема: прием антибиотиков, когда они вам не нужны, может означать, что они не будут работать на вас в будущем.

Когда необходимы антибиотики

Антибиотики могут использоваться для лечения бактериальных инфекций, которые:

• вряд ли вылечятся без антибиотиков
• могут заразить других
• может потребоваться слишком много времени, чтобы вылечить без лечения
• несут риск более серьезного осложнения

Людям с высоким риском заражения также могут назначать антибиотики в качестве меры предосторожности, известной как антибиотикопрофилактика.

Узнайте больше о том, когда используются антибиотики и почему они обычно не используются для лечения инфекций.

Как принимать антибиотики?

Принимайте антибиотики в соответствии с указаниями на упаковке или в информационном буклете для пациента, который прилагается к лекарству, или в соответствии с указаниями вашего терапевта или фармацевта.

Антибиотики могут быть в виде:

• таблеток, капсул или жидкости, которую вы пьете — их можно использовать для лечения большинства типов инфекций тела легкой и средней степени тяжести
• кремы, лосьоны, спреи и капли — они часто используются для лечения кожных инфекций, глазных или ушных инфекций
• инъекций — их можно вводить в виде инъекций или капельно непосредственно в кровь или мышцу, и они используются при более серьезных инфекциях

Отсутствие дозы антибиотиков

Если вы забудьте принять дозу своих антибиотиков, примите эту дозу, как только вспомните, а затем продолжайте прием антибиотиков в обычном режиме.

Но если пришло время для следующей дозы, пропустите пропущенную дозу и продолжайте свой обычный график дозирования. Не принимайте двойную дозу, чтобы восполнить пропущенную.

Случайный прием дополнительной дозы

Существует повышенный риск побочных эффектов, если вы примете 2 дозы ближе друг к другу, чем рекомендуется.

Случайный прием 1 дополнительной дозы антибиотика вряд ли нанесет вам серьезный вред.

Но это увеличит ваши шансы получить побочные эффекты, такие как боль в животе, диарея, чувство или тошнота.

Если вы случайно приняли более 1 дополнительной дозы антибиотика, обеспокоены или у вас возникнут серьезные побочные эффекты, как можно скорее обратитесь к своему терапевту или позвоните в NHS 111.

Побочные эффекты антибиотиков

Как и любое лекарство, антибиотики могут вызывать побочные эффекты. Большинство антибиотиков не вызывают проблем при правильном применении, а серьезные побочные эффекты возникают редко.

Общие побочные эффекты включают:

• тошнота
• плохое самочувствие
• вздутие живота и несварение
• диарея

У некоторых людей может быть аллергическая реакция на антибиотики, особенно на пенициллин и цефалоспорины.В очень редких случаях это может привести к серьезной аллергической реакции (анафилаксии), требующей неотложной медицинской помощи.

Подробнее о побочных эффектах антибиотиков.

Соображения и взаимодействия

Некоторые антибиотики не подходят людям с определенными медицинскими проблемами, а также беременным или кормящим женщинам. Принимайте только прописанные вам антибиотики — никогда не «одалживайте» их у друга или члена семьи.

Некоторые антибиотики плохо сочетаются с другими лекарствами, такими как противозачаточные таблетки и алкоголь.

Внимательно прочтите информационную брошюру, прилагаемую к вашему лекарству, и обсудите любые проблемы со своим фармацевтом или терапевтом.

Подробнее о:

Типы антибиотиков

Существуют сотни различных типов антибиотиков, но большинство из них можно разделить на 6 групп.

• Пенициллины (такие как пенициллин и амоксициллин) — широко используются для лечения различных инфекций, включая кожные, грудные инфекции и инфекции мочевыводящих путей
• Цефалоспорины (например, цефалексин) — используются для лечения широкого спектра инфекций, но некоторые из них также эффективны для лечения более серьезных инфекций, таких как сепсис и менингит
• Аминогликозиды (такие как гентамицин и тобрамицин) — как правило, используются только в больнице для лечения очень серьезных заболеваний, таких как сепсис, поскольку они может вызвать серьезные побочные эффекты, включая потерю слуха и повреждение почек; их обычно вводят в виде инъекций, но можно вводить в виде капель при некоторых инфекциях уха или глаз
• Тетрациклины (например, тетрациклин и доксициклин) — могут использоваться для лечения широкого спектра инфекций, но обычно используются для лечения акне и кожное заболевание, называемое розацеа
• Макролиды (например, эритромицин и кларитромицин) — могут быть особенно полезны для лечения инфекций легких и грудной клетки, или в качестве альтернативы для людей с аллергией на пенициллин, или для лечения устойчивых к пенициллину штаммов бактерии
• Фторхинолоны (такие как ципрофлоксацин и левофлоксацин) — это антибиотики широкого спектра действия, которые когда-то использовались для лечения широкого спектра инфекций, особенно респираторных и мочевыводящих путей.Эти антибиотики больше не используются в плановом порядке из-за риска серьезных побочных эффектов

Последняя проверка страницы: 23 мая 2019 г.
Срок следующего рассмотрения: 23 мая 2022 г.

Антибиотиков — Побочные эффекты — NHS

Наиболее частые побочные эффекты антибиотиков влияют на пищеварительную систему. Это случается примерно у 1 из 10 человек.

Побочные эффекты антибиотиков, влияющие на пищеварительную систему, включают:

• рвота
• тошнота (ощущение, что вас может рвать)
• диарея
• вздутие живота и несварение желудка
• боль в животе
• потеря аппетита

Эти стороны эффекты обычно мягкие и должны пройти после завершения курса лечения.

Если у вас появятся какие-либо дополнительные побочные эффекты, обратитесь за советом к своему терапевту или лечащему врачу.

Аллергические реакции на антибиотики

Примерно 1 из 15 человек имеет аллергическую реакцию на антибиотики, особенно на пенициллин и цефалоспорины. В большинстве случаев аллергическая реакция бывает легкой или средней степени тяжести и может принимать следующие формы:

• приподнятая зудящая кожная сыпь (крапивница или крапивница)
• кашель
• свистящее дыхание
• сжатие в горле, которое может вызвать дыхание трудности

Эти легкие и умеренные аллергические реакции обычно успешно излечиваются приемом антигистаминных препаратов.

Но если вы обеспокоены или ваши симптомы не улучшаются после лечения, обратитесь за советом к своему терапевту. Если вы не можете связаться со своим терапевтом, позвоните в NHS 111.

В редких случаях антибиотик может вызвать тяжелую и потенциально опасную для жизни аллергическую реакцию, известную как анафилаксия.

Начальные симптомы анафилаксии часто такие же, как и при легкой аллергической реакции. К ним относятся:

• чувство головокружения или обморока
• затруднения дыхания, такие как частое, поверхностное дыхание
• хрипы
• учащенное сердцебиение
• липкая кожа
• спутанность сознания и беспокойство
• коллапс или потеря сознания

Может быть другие симптомы аллергии, включая зуд, приподнятую сыпь (крапивницу), ощущение или тошноту, отек (ангионевротический отек) или боль в животе.

Анафилаксия — это неотложная медицинская помощь, которая может быть опасной для жизни. Немедленно наберите 999 и попросите скорую помощь, если вы думаете, что вы или кто-то из окружающих страдает анафилаксией.

Тетрациклины и светочувствительность

Тетрациклины могут сделать вашу кожу чувствительной к солнечному свету и искусственным источникам света, таким как солнечные лампы и солярии.

Избегайте длительного воздействия яркого света при приеме этих лекарств.

Фторхинолоны

Сильные боли

В очень редких случаях фторхинолоновые антибиотики могут вызывать инвалидизирующие, длительные или необратимые побочные эффекты, поражающие суставы, мышцы и нервную систему.

Немедленно прекратите прием фторхинолонов и обратитесь к терапевту, если у вас возникнет серьезный побочный эффект, в том числе:

• боль в сухожилиях, мышцах или суставах — обычно в коленях, локтях или плечах
• покалывание, онемение или иглы

Проблемы с сердцем

Фторхинолоновые антибиотики могут вызывать серьезные побочные эффекты у людей, которые подвержены риску сердечных клапанов.

Немедленно прекратите прием фторхинолонов и обратитесь к терапевту, если у вас возник серьезный побочный эффект, в том числе:

• опухшие лодыжки, ступни и ноги (отек)
• новое учащенное сердцебиение (сердцебиение, которое внезапно стало более заметным)
• внезапная одышка дыхания

Сообщение о побочных эффектах

Схема желтой карточки позволяет вам сообщать о предполагаемых побочных эффектах от любого типа лекарства, которое вы принимаете.

Он находится в ведении службы по контролю за безопасностью лекарств, которая называется Агентством по регулированию лекарственных средств и товаров медицинского назначения (MHRA).

Последняя проверка страницы: 23 мая 2019 г.
Срок следующего рассмотрения: 23 мая 2022 г.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
  Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
  браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
  Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
  Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
  браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
  Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Использование антибиотиков, вводимых в воду свиньям в эпоху после ПФД

Основное использование водных препаратов для свиней и управление ими.

С момента вступления в силу Директивы о ветеринарных кормах (VFD) 1 января 2017 года животноводы вносят изменения, необходимые для использования большинства антибиотиков при доставке с кормом или водой (инъекционные препараты не затрагиваются).Включенные в эти изменения, распространители кормов теперь должны иметь действующий VFD, выписанный ветеринаром, выписывающим рецепты, для приготовления кормов с антибиотиками. Это требует дополнительных документов, которые в некоторых случаях могут задержать реакцию производителя на вспышку заболевания. По мере строительства новых животноводческих помещений, особенно в свиноводстве, многие производители включают в свои системы водоснабжения медикаменты. Эта технология, при использовании для доставки антибиотиков, позволяет обойтись без стадии приготовления комбикормов и может способствовать быстрой массовой обработке стада во время вспышки вирусного или бактериального заболевания.Некоторые антибиотики, обычно применяемые для свиней, можно вводить с водой (таблица 1).

Есть несколько вещей, которые следует учитывать при принятии решения об использовании водных лекарств.В этой статье мы описываем некоторые из наиболее важных преимуществ и недостатков лечения через водную систему. Мы также даем несколько полезных советов по внедрению и обслуживанию системы водных лекарств.

Преимущества и недостатки водной доставки антибиотиков

Наиболее важные преимущества доставки воды антибиотиками по сравнению с введением путем инъекции или с кормом связаны с удобством / простотой введения (экономия времени и труда), временем отклика и тем фактом, что доставка воды не вызывает стресса (требуется без ограничений, без игл и без повреждения / раздражения тканей в месте инъекции).Для введения антибиотиков через воду во весь хлев, полный свиней, обычно требуется всего несколько минут времени одного человека, чтобы добавить соответствующее количество растворимого порошка или суспендированного состава в дозатор (обычно используемый на крупных объектах, построенных недавно) или в верхний резервуар. система (часто используется в небольших хозяйствах). Это экономит труд, но также может значительно сэкономить время, когда альтернативой является инъекция отдельных животных по всему коровнику. Несмотря на то, что требуются ветеринарные взаимоотношения с клиентом и пациентом (VCPR) и рецепт на лекарство, доставка воды обычно осуществляется в соответствии с внутренними / внутренними стандартными операционными процедурами (SOP), которые исключают этап получения лекарственного материала с комбикормового завода.Это может сэкономить важное время в случае быстро распространяющейся вспышки. Таким образом, использование водорастворимых лекарств может стабилизировать или даже предотвратить вспышки заболеваний. Примеры могут включать быстрое введение пенициллина всем свиньям в стойле, когда респираторное заболевание свиней (SRD) обнаружено у нескольких свиней, и использование линкомицина или тиамулина для предотвращения дизентерии свиней в стаде.

Поскольку свиньи часто отказываются от корма очень рано после заражения респираторным или желудочно-кишечным заболеванием, эффективность кормовых препаратов может быть снижена.Свиньи редко прекращают пить воду даже в разгар серьезной инфекции, поэтому введение антибиотика с водой может обойти эту проблему. Доставка воды также может использоваться для импульсных схем приема лекарств, когда это необходимо; это можно использовать как часть стратегии по сокращению использования антибиотиков. Кроме того, антибиотики, смешанные с кормом, иногда плохо связываются с молекулами кальция, фосфора и натрия, присутствующими в корме, и это может снизить их эффективность; эти проблемы встречаются реже и, как правило, менее серьезны в случае доставки воды.

Обработка и введение инъекционных антибиотиков может вызвать стресс у свиней (Dantzer and Mormede, 1983), который может усугубить и без того ослабленную иммунную систему у больных свиней. Кроме того, в зависимости от используемого лекарства время химиотерапевтического ответа может быть медленнее при введении в мышцу шеи по сравнению с простым питьем водорастворимых лекарств (Yan and Gilbert, 2004).

Последним преимуществом доставки воды является то, что сама система после установки может использоваться для доставки других полезных растворенных веществ, включая электролиты, пробиотики и подкислители (часто используемые для борьбы с чистками после отъема, связанными с E.coli).

Есть также несколько потенциальных недостатков, которые следует учитывать при введении водорастворимых лекарств, в дополнение к добавленной стоимости оборудования. Поскольку при использовании этого метода все свиньи в загоне в основном «лечатся», он может быть более дорогостоящим, если значительная часть свиней будет здорова и не нуждается в лечении или не получит от нее никакой пользы. Также существует значительный риск потерять дорогостоящие лекарства в воде, поскольку свиньи, как правило, «играют» с поилками. Кроме того, вкусовые качества и качество воды могут повлиять на характер применяемого лекарства, а высокий уровень кальция в воде, как сообщается, снижает эффективность некоторых препаратов тетрациклинового ряда (Kemmerer, 2008).При введении водных лекарств необходимо внимательно следить за легкостью и течением по водопроводу; скорость подачи воды может значительно варьироваться в зависимости от местоположения в сарае (Brooks and Carpenter, 1990). Кроме того, водопроводы необходимо тщательно очищать после их использования для доставки лекарств в соответствии с действующими руководящими принципами FDA, разработанными для ограничения остатков лекарств у сельскохозяйственных животных (Система безопасности кормов для животных и см. Rozeboom, 2018).

Советы по уходу и обслуживанию

Прежде чем принять решение об установке системы водного лечения, производитель должен также рассмотреть необходимое управление; почему, сколько времени и как часто эта система будет требовать внимания.Ниже приведены два коротких списка, идеи и задачи; один для обслуживания водопроводов, а другой для управления продуктами, поступающими в системы полива:

Техническое обслуживание водопровода:

• Быстрый и простой способ проверить расход воды — это использовать мерный стакан и определить время, которое потребуется для наполнения стакана воды для ручного источника поилки (см. Таблицу ниже).
• При использовании водных медикаментов настоятельно рекомендуется очищать водопроводные линии после каждого приема лекарства.
• Большинство лекарств приводят к тому, что вода становится блеклой или даже совсем другой. Обратите внимание на то, чтобы пропустить чистую воду по линиям, чтобы изменения цвета, связанные с приемом лекарств, больше не были заметны.
• Фильтры обычно используются для предотвращения накопления железа, хлора, пероксида и биопленки (которые могут обеспечить защищенную среду для патогенов, которые отрицательно влияют на здоровье и продуктивность свиней).
• Фильтры необходимо регулярно проверять; ежемесячно для племенного стада и на каждом этапе откорма свиней.
• Если вода, поступающая в сарай, считается «жесткой», может потребоваться периодическое использование кислотного средства для удаления накипи для очистки водопроводов, поскольку сама по себе фильтрация не может эффективно контролировать накопление накипи.

Источник: Национальный совет по свиноводству, Руководство по уходу за свиньями (издание 2003 г.), Brumm 2010 «Водные системы для свиней».

Источник: Национальный совет по свиноводству, Руководство по оценке площадок PQA PLUS (издание 2015 г.)

Управление продуктами

• Проконсультируйтесь с ветеринаром, чтобы убедиться в соблюдении рекомендаций по ЧРП при получении рецептов на антибиотики, вводимые водой. Имейте под рукой СОП, которая хорошо понятна и соблюдается всем персоналом фермы.
• В случае сомнений проконсультируйтесь с ветеринаром, чтобы подтвердить диагноз заболевания и, в идеале, чувствительность бактериального патогена к антибиотикам. Эта информация может гарантировать, что будет использован лучший из доступных антибиотиков.
• Свиньи обычно сбрасывают воду, пытаясь охладиться в самые жаркие дни; потерю лекарств можно ограничить пульсирующим введением лекарств в воду в более прохладное время дня.
• Чашечные поилки могут значительно снизить потери воды (и лекарств) по сравнению с поилками из сосков.
• Перед применением убедитесь, что препарат полностью растворен в воде.
• Избегайте проблем с остатками лекарств, строго соблюдая инструкции, указанные на этикетках лекарств, дополнительные инструкции, данные вам ветеринаром.
• Убедитесь, что в ваших поилках поддерживается скорость потока, соответствующая размеру животных (Brumm, 2010).
• Поддерживайте вашу систему водоснабжения, следуя рекомендованным процедурам тестирования и очистки.

Заключение

В целом, водные препараты могут быть эффективным средством лечения и профилактики заболеваний в стаде свиней.Благодаря личному опыту управления коровником от отъема до конца, водорастворимые препараты снизили затраты на рабочую силу и стресс свиней, а также эффективно снизили уровень смертности от SRD и других заболеваний. Системы водного лечения могут работать хорошо при правильном управлении и обслуживании.

Цитаты

Шульц, Ли Л. и Кристофер Дж. Радемахер. «Руководящие указания 209 и 213 Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов и директивы о ветеринарных кормах, касающиеся использования антибиотиков в животноводстве: обзор подготовки и ожидаемого воздействия в свиноводстве.» Журнал здоровья и производства свиней 25,5 (2017): 247-255.

Тейлор, Грэм и др. «Водное лекарство для свиней». The Pig Site , 5 июня 2006 г., www.thepigsite.com/articles/1623/water-medication-for-pigs/.

«Групповое лечение — управление здоровьем свиней и лечение болезней свиней на ThePigSite.com». The Pig Site , www.thepigsite.com/pighealth/article/86/group-treatment/.

Вы нашли эту статью полезной?

Расскажите, пожалуйста, почему

Представлять на рассмотрение

Распределение лекарств — Лекарства — Справочник Merck Версия для потребителей

Распределение лекарственного средства относится к перемещению лекарственного средства в кровь и различные ткани тела (например, жировые, мышечные и мозговые ткани) и из них, а также к относительным пропорциям лекарства в тканях.

После того, как лекарство попадает в кровоток (см. Абсорбция лекарственного средства), оно быстро циркулирует в организме. Среднее время циркуляции крови — 1 минута. По мере рециркуляции крови лекарство перемещается из кровотока в ткани организма.

После всасывания большинство лекарств не распределяются по организму равномерно. Лекарства, растворяющиеся в воде (водорастворимые препараты), такие как антигипертензивный препарат атенолол, как правило, остаются в крови и жидкости, окружающей клетки (интерстициальное пространство).Лекарства, растворяющиеся в жире (жирорастворимые препараты), такие как успокаивающее средство клоразепат, имеют тенденцию концентрироваться в жировых тканях. Другие лекарства концентрируются в основном только в одной небольшой части тела (например, йод концентрируется в основном в щитовидной железе), потому что ткани там имеют особое притяжение (сродство) и способность удерживать это лекарство.

Лекарства проникают в разные ткани с разной скоростью, в зависимости от способности лекарства проникать через мембраны. Например, антибиотик рифампицин, лекарство с высокой растворимостью в жирах, быстро проникает в мозг, а антибиотик пенициллин, растворимое в воде лекарство, — нет.Как правило, жирорастворимые препараты могут проникать через клеточные мембраны быстрее, чем водорастворимые. Для некоторых лекарств транспортные механизмы помогают перемещаться в ткани или из них.

Некоторые лекарства покидают кровоток очень медленно, потому что они прочно связываются с белками, циркулирующими в крови. Другие быстро покидают кровоток и попадают в другие ткани, потому что они менее тесно связаны с белками крови. Некоторые или практически все молекулы лекарства в крови могут быть связаны с белками крови.Связанная с белком часть обычно неактивна. По мере того как несвязанное лекарство распределяется по тканям и его уровень в кровотоке снижается, белки крови постепенно высвобождают связанное с ними лекарство. Таким образом, связанное лекарство в кровотоке может действовать как резервуар для лекарства.

Некоторые лекарства накапливаются в определенных тканях (например, дигоксин накапливается в сердце и скелетных мышцах), которые также могут действовать как резервуары дополнительного лекарства. Эти ткани медленно высвобождают лекарство в кровоток, предотвращая быстрое снижение уровня лекарства в крови и тем самым продлевая действие лекарства.Некоторые лекарства, например те, которые накапливаются в жировых тканях, покидают ткани настолько медленно, что циркулируют в кровотоке в течение нескольких дней после того, как человек перестал принимать лекарство.

Распространение лекарства также может варьироваться от человека к человеку. Например, люди с ожирением могут хранить большое количество жирорастворимых лекарств, тогда как очень худые люди могут хранить относительно мало. Пожилые люди, даже худые, могут накапливать большое количество жирорастворимых лекарств, поскольку доля жира в организме увеличивается с возрастом.

Изготовление водорастворимого куркумина для усиления действия обычных противомикробных препаратов путем индукции апоптозных явлений среди устойчивых к лекарствам бактерий

С помощью УФ-видимой спектрометрии было подтверждено резкое повышение водной растворимости куркумина, связанного с галактозой.Вкратце, 5 мг sCur перемешивали на вортексе с 1 мл воды MilliQ в микроцентрифужной пробирке для приготовления исходного раствора. Для сравнения, нативный куркумин (5 мг) также перемешивали на вортексе с 1 мл воды MilliQ в микроцентрифужной пробирке. Затем оба образца центрифугировали при 13000 об / мин в течение 5 минут, чтобы удалить нерастворенные части, если таковые имеются. Затем 100 мкл sCur добавляли к 900 мкл воды MilliQ и тщательно перемешивали. Был задокументирован профиль поглощения разбавленного sCur и нативного куркумина.

Биологические исследования

Штаммы бактерий и условия культивирования

Первоначально эффекты наблюдались на выбранных контрольных штаммах бактерий, а именно на Staphylococcus aureus (ATCC 29,213), Staphylococcus epidermidis (ATCC 35,984), KCCebsonia pneumoniae ), Escherichia coli (ATCC 25 922) и Pseudomonas aeruginosa (ATCC 25 619).Однако в дальнейшем эксперименты были расширены на клинические изоляты с множественной лекарственной устойчивостью: Klebsiella pneumoniae (лабораторный код: 10,894 / 2019), метициллин-чувствительный Staphylococcus aureus (лабораторный код: 2862/2019, MSSA), метициллин-устойчивый Staphylococcus aureus (MRSA, лабораторный код: 2859/2019), Escherichia coli (лабораторный код: 507/2019) и Pseudomonas aeruginosa (лабораторный код: 2412/2019). Настоящее исследование было одобрено институциональным этическим комитетом Института медицинских наук Индусского университета Банараса (Dean / 2018 / EC / 594).Идентификация бактерий была основана на обычных бактериологических методах, таких как морфология колоний, окрашивание по Граму и различные биохимические тесты, описанные ранее ³⁹ . В настоящем исследовании мы определили множественную лекарственную устойчивость как абсолютную устойчивость по крайней мере к пяти различным классам лекарств. Тестирование изолятов на чувствительность к антибиотикам проводилось модифицированным методом Кирби-Бауэра в соответствии с рекомендациями Института клинических и лабораторных стандартов 2019 ⁴⁰ .Мы использовали 14 дисков с антибиотиками, а именно ампициллин (10 мкг), амикацин (30 мкг), амоксициллин / клавуланат (20/10 мкг), левофлоксацин (5 мкг), цефалексин (30 мкг), цефуроксим (30 мкг), гентамицин (120 мкг). ), Ципрофлоксацин (5 мкг), цефепим (30 мкг), ко-тримоксазол (23,75 / 1,25 мкг), пиперациллин и тазобактам (100/10 мкг), эртапенем (10 мкг), меропенем (10 мкг), имипенем (10 мкг) ).

Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК)

Минимальную ингибирующую концентрацию sCur определяли методом микроразведения в бульоне, как описано ранее с небольшими модификациями ²⁴ .

Вкратце, Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa в аэробном бульоне выращивали в 10 мл BHI водного бульона. Бактериальную культуру (500 мкл) затем разбавляли до 1,5 мл свежего бульона BHI. Для исследования использовали маточный раствор sCur (1024 мкг / мл). Исходный раствор разбавляли серией двукратных разведений в диапазоне от 0,5 до 512 мкг / мл в стерильном бульоне BHI в лунках для микротитрования.Затем каждую лунку 96-луночного микротитрационного планшета инокулировали 190 мкл стандартизированной клеточной суспензии (10 ⁵ КОЕ / мл) и инкубировали при 37 ° C в течение следующих 18 ч вместе с 20 мкл суспензии sCur. МИК определяли как самую низкую концентрацию sCur, при которой не наблюдалось явного роста. Положительные контроли содержали либо ципрофлоксацин, либо меропенем (для грамположительных и грамотрицательных соответственно), в то время как стерильный бульон служил отрицательным контролем, и все эксперименты проводили в трех повторностях.

Определение активности антибиотикопленки

Анализ антибиотикопленки проводили с использованием полуколичественного анализа CV в 96-луночном планшете для культуры ткани, описанном ранее ^6,41 . Вкратце, ночные культуры Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa были выращены в бульоне Luria Bertani, в то время как Staphylococcus aureus и Staphylococcus distrmidis были выращены со свежим стафилококком и Staphylococcus brothrmidis бульон.180 мкл каждой разбавленной бактериальной суспензии (0,5 McFarland’s) разливали в 96-луночный планшет для культивирования тканей из полистирола с плоским дном и в каждую лунку добавляли 20 мкл раствора sCur (100 мкг / мл). Лунки без sCur использовали в качестве отрицательного контроля, в то время как лунки с положительным контролем содержали гибридные квантовые точки куркумина и молибдена. Планшеты инкубировали при 37 ° C без встряхивания в течение 48 часов для исследования его способности ингибировать биопленку. Ингибирование биопленки количественно оценивали с помощью анализа кристаллического фиолетового (CV) как процентное снижение содержания в ней биомассы, как описано ранее.

$$ \% \, \, Reduction = \ frac {{\ left ({Среднее \, \, поглощение \, \, of \, \, \, \, контроль — Среднее \, \, поглощение \, \, из \, \, \, \, тест \, \, образец} \ right)}} {{\ left ({Среднее \, \, поглощение \, \, of \, \, \, \, control} \ right)}} \ times 100 $$

Синергетическая антибактериальная активность растворимого куркумина в сочетании с антибиотиками

Мы также исследовали синергизм растворимого куркумина в сочетании с ципрофлоксацином, ванкомицином и меропенемом, используя классический метод титрования в шахматную доску по с использованием 96-луночного полипропиленового микротитрационного планшета.Серийные разведения этих антибиотиков смешивали в бульоне Мюллера-Хинтона с поправкой на катионы. Посевной материал получали из колоний, выращенных в течение ночи на MHA. Конечная концентрация бактерий после инокуляции составляла 1,5 × 10 ⁸ КОЕ / мл. МИК определяли после 24 ч инкубации при 37 ° C. МИК определяли как самую низкую концентрацию sCur отдельно или в комбинации с ципрофлоксацином, ванкомицином и меропенемом, заметно подавляющим рост бактерий.

Анализ кривой роста бактерий

Мы спектрофотометрически контролировали влияние sCur на скорость роста соответствующих бактериальных изолятов как в присутствии, так и в отсутствие лекарств, как описано ранее ^19,42 .Вкратце, выращенным в течение ночи бактериальным клеткам позволяли расти в свежем бульоне BHI до их ранней экспоненциальной фазы. После получения бульон, содержащий бактерии, инокулировали в планшет для тканевых культур с начальной оптической плотностью при λ _max 600 нм ~ 0,01. Затем изменение оптической плотности каждой лунки отслеживали через каждые 15 мин в течение 4,5 ч в обеих ситуациях. Мы определили скорость роста по наклону линейной части кривой роста (R ² , ≥ 0,98), определенной как минимум для 5 точек данных полулогарифмического графика оптической плотности (ln [OD600]) v / s время инкубации (в часах).

Количественная оценка синергизма с использованием модели блаженства

Лекарственный синергизм был дополнительно рассчитан с использованием модели независимости блаженства, описанной ранее, с использованием указанной ниже формулы:

$$ S = \ left ({{\ raise0.7ex \ hbox {$ {F xo } $} \! \ mathord {\ left / {\ vphantom {{F xo} {F oo}}} \ right. \ kern- \ nulldelimiterspace} \! \ lower0.7ex \ hbox {$ {F oo} $} }} \ right) \ left ({{\ raise0.7ex \ hbox {$ {F yo} $} \! \ mathord {\ left / {\ vphantom {{F yo} {F oo}}}} \ right. \ kern- \ nulldelimiterspace} \! \ lower0.7ex \ hbox {$ {F oo} $}}} \ right) — \ left ({{\ raise0.7ex \ hbox {$ {F xy} $} \! \ Mathord {\ left / {\ vphantom {{F xy} {F oo}}} \ right. \ Kern- \ nulldelimiterspace} \! \ Lower0.7ex \ hbox {$ {F oo} $}}} \ right) $$

, где F _xy относится к скорости роста в присутствии комбинации тестируемых соединений в концентрации X для sCur и Y для ванкомицина ⁴³ . Аналогично, F _xo и F _yo относятся к скорости роста в присутствии отдельных тестируемых соединений, например sCur и другого антибиотика в концентрации X и Y соответственно.F ₀₀ относится к скорости роста в отсутствие тестируемых соединений. S соответствует степени синергии, параметру, который определяет синергетическое взаимодействие для положительных значений и антагонистическое взаимодействие для отрицательных. Скорость роста в различные моменты времени определяют путем вычисления наклона анализируемой кривой роста в течение 4,5 ч, как описано выше.

Конфокальная лазерная сканирующая микроскопическая оценка синергетической антибактериальной активности растворимого куркумина и ванкомицина

Для конфокального анализа синергетических эффектов sCur мы увеличили K.pneumoniae в слайдах с камерами, как описано ранее с модификациями ⁴² . Вкратце, мы выращивали MRSA в течение ночи, а затем разводили его 1: 500 в свежем бульоне BHI, чтобы довести его оптическую плотность до 0,2 при λ _max 600 нм. Затем пятьдесят микролитров этой разбавленной суспензии помещали на 8-луночное предметное стекло с плоским дном, содержащее 450 мкл бульона BHI с добавлением 4% глюкозы, и выращивали статически в течение 72 часов при 37 ° C. За этим следовало зависящее от времени лечение sCur 20 мкг / мл и субингибирующая концентрация ванкомицина (4 мкг / мл).Перед окрашиванием мы осторожно постукивали по стеклу с камерами, чтобы удалить остаточный бульон, и трижды промывали его фосфатным буфером (pH 7,5) для удаления планктонных клеток. Мы зафиксировали биопленку 4% (об. / Об.) Параформальдегидом в течение 30 мин. 10 мкл восстановленного PI (10 мкг / мл) наносили непосредственно на верхнюю часть биопленок.

Инвертированный конфокальный лазерный сканирующий микроскоп Zeiss LSM 510 (Carl Zeiss, Йена, Германия) использовался для обнаружения зеленой и красной флуоресценции красителей. Иодид пропидия возбуждали лазером HeNe2 530 нм, и флуоресценцию испускания регистрировали с помощью фильтра 620 нм.Изображения были получены с помощью масляного объектива Plan-Neofluar 40X / 1.3 с шагом z 2,0 мкм или 20-кратного объектива с шагом z 5,0 мкм.

Механическое понимание

Изучение изменений в динамике мембраны

Мы использовали ранее описанный метод ¹⁹ . Клинические изоляты с множественной лекарственной устойчивостью Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa обрабатывались комбинацией МИК для sCur 968 и комбинации концентрации sCur в ванкоме 968, Klebsiella pneumoniae ).Обработанные клетки инкубировали в течение 120 мин при встряхивании (100 об / мин) при 37 ° C с последующим сбором. Гранулы повторно суспендировали и повторно гранулировали. Фиксировали осадок 0,4% параформальдегидом с последующим ресуспендированием в PBS. Позже мы инкубировали повторно суспендированные клетки с 0,5 мМ 1,6-дифенил-1,3,5-гексатриена (DPH) при 37 ° C в течение 60 мин, осаждали и трижды промывали PBS. Интенсивность флуоресценции контролировали спектрофотометрически, используя Synergy h2 Hybrid Multi-Mode Reader, при 350 нм (возбуждение) и 425 нм (эмиссия).Кроме того, процентное содержание бактериальных клеток, демонстрирующих флуоресцентный ответ, измеряли с помощью проточной цитометрии (C6 BD Accuri, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

Анализ деполяризации мембраны

Чувствительный к мембранному потенциалу краситель DiSC ₃ -5 использовали для измерения деполяризации плазматической мембраны в бактериальных мембранах, как описано ранее с модификациями ⁴⁴ . Изоляты культивировали в бульоне BHI в течение ночи с последующим разбавлением для доведения абсорбции до 0.05 при λ _max 600. После этого добавляли 50 мкл sCur с концентрацией MIC, ванкомицин и комбинацию в течение 2 часов при 37 ° C. Затем его инкубировали в течение 20 минут с 1 мкМ DiSC ₃ -5. Отрицательный контроль был без какого-либо лекарственного средства, тогда как полоса бактерий, обработанных нативным куркумином, служила положительным контролем. Флуоресценцию измеряли с использованием гибридного многорежимного считывателя Synergy h2 с возбуждением на 622 нм и испусканием на 670 нм. Кроме того, процент бактериальных клеток, демонстрирующих флуоресценцию, измеряли с помощью проточной цитометрии (C6 BD Accuri, Becton – Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния, США).

Анализ 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцеиндиацетата (DCFH-DA) на продукцию ROS

Продукция эндогенных активных форм кислорода (ROS) в бактериях после воздействия sCur, ванкомицина и их комбинации в течение 48 часов контролировалась потоком цитометрия с использованием 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцеиндиацетата (DCFH-DA) в качестве маркера ROS, описанного ранее ⁶ . После воздействия sCur, ванкомицина и комбинации в течение 2, 4 и 8 часов бактериальные клетки осаждали, трижды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS, pH ~ 7.2), а затем плотность клеток доводили до 10 ⁷ / мл путем суспендирования клеток в PBS. Затем ресуспендированные клетки инкубировали в течение 30 мин с 5 мкМ DCFH-DA с последующим анализом продукции ROS на цитометре BD Accuri C6 Flow. Сбор данных выполнялся с помощью программного обеспечения BD Accuri C6 на основе сигналов светорассеяния и флуоресценции, возникающих в результате лазерного излучения мощностью 20 мВт на длине волны 488 нм. Все измерения производились логарифмически. Анализ выполняли при низкой частоте отбора проб (14 мкл мин ^-1 ).Всего для каждой выборки было учтено 10 ⁶ событий.

Измерения свободных радикалов гидроксида ОН in vitro

^•

Флуоресцентный репортерный краситель 3 ‘- (п-гидроксифенил) флуоресцеин (HPF) использовали для обнаружения свободных радикалов гидроксида, как описано ранее ⁴³ . Ночные культуры разбавляли 1: 250 25 мл бульона BHI в колбах на 250 мл и инкубировали при 37 ° C при встряхивании (200 об / мин). Клетки выращивали до тех пор, пока они не достигли OD600 ~ 0.3. Образец объемом пятьсот микролитров был взят из колб и перенесен в 8-луночный планшет для обработки. После 1 ч обработки sCur и ванкомицином 200 мкл образца собирали и осаждали центрифугированием при 10000 об / мин. Супернатант заменяли фосфатно-солевым буфером с добавлением 5 мМ HPF при инкубации в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут и повторно осаждали центрифугированием при 10000 об / мин. Супернатант удаляли и заменяли 1 × PBS для флуориметрических измерений.

H

₂ O ₂ анализ продукции

Производство H ₂ O ₂ было оценено с помощью метода, описанного ранее ⁴³ . Вкратце, бактериальные клетки выращивали так, чтобы поглощение соответствовало 0,4 при 600 нм в среде LB, и бактериальные клетки обрабатывали 8 мкг / мл ванкомицина и 8 мкг / мл sCur в течение 60 мин. Клетки собирали центрифугированием при 6000 об / мин в течение 5 мин и трижды тщательно промывали PBS с последующей обработкой ультразвуком в течение 10 с.Всего 50 мкл образцов инкубировали с 50 мкМ реагента Amplex Red, 0,1 ед. / Мл HRP в 50 мМ натрий-фосфатном буфере (pH 7,4) в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте с последующим измерением оптической плотности при 560 нм.

Обнаружение железа Колориметрический анализ Ferene-S

Высвобождение связанного с белком железа в лизате бактериальных клеток измеряли с помощью анализа Ferene-S, описанного ранее ⁴³ . Лизат получали путем выращивания сначала 150 мл клеток до OD ₆₀₀ , равного 0.7. Затем клетки лизировали ультразвуком в буфере 20 мМ Трис / HCl pH ~ 7,2. Образцы центрифугировали и собирали супернатанты, содержащие лизаты клеток. Лизаты обрабатывали либо нагреванием (90 ° C в течение 20 мин), либо sCur, ванкомицином и их комбинацией. К каждому образцу добавляли 10 мМ Ferene-S, и затем образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем измеряли поглощение при 593 нм с помощью гибридного многорежимного считывателя Synergy h2.

Двойное окрашивание аннексином V / ИП

Для оценки воздействия фосфатидилсерина (ФС) мы использовали набор для определения апоптоза аннексина V – FITC (Invitrogen, США).Для этого бактериальные изоляты МЛУ индивидуально обрабатывали sCur, ванкомицином и их комбинацией и выращивали при встряхивании (120 об / мин) в течение 2 ч при 37 ° C. Клетки осаждали (500 об / мин в течение 15 мин) и ресуспендировали в PBS. Мы добавляли 100 мкл буфера для связывания аннексина V, 5 мкл аннексина V-FITC и 5 мкл PI к суспензиям клеток, а затем смеси инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин. После инкубации клетки осаждали и затем ресуспендировали в 400 мкл буфера для связывания аннексина V и анализировали с использованием проточного цитометра C6 BD Accuri (Becton – Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния, США).

Оценка цитотоксичности in vitro

КТ sCur и MoS ₂ далее использовали для сравнительной оценки токсичности. Перед экспериментом MoS ₂ КТ были диспергированы ультразвуком в течение 15 мин при входной мощности 750 Вт, частоте 10 кГц и интенсивности 30 Вт / см ² при соотношении импульсов вкл / выкл 50/10 ( с / с), в то время как sCur перемешивали на вортексе.

Клеточная культура

Клетки HCT116 размножали в среде Игла, модифицированной Дульбекко, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мг / мл стрептомицина в 5% CO. ₂ увлажненной атмосфере при 37 ° C в CO ₂ инкубатор.Клетки подвергали воздействию sCur и MoS ₂ QD в течение 24 часов. Исходный раствор sCur 5 мг / мл и MoS ₂ QD были приготовлены, хранились в виде небольших аликвот при 4 ° C и разбавлены в два раза в другой дозе в диапазоне от 2 до 2048 мкг / мл в среде Игла, модифицированной Дульбекко. . Кроме того, комбинацию sCur и ванкомицина также исследовали на профили токсичности, как обсуждалось выше.

Анализ пролиферации клеток

Анализ сульфородамина B (SRB) выполняли, как описано ранее ⁴⁵ .Пролиферирующие клетки HCT116 высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 5 × 10 ³ клеток на лунку и оставляли для прилипания в течение ночи. Спустя 24 часа клетки инкубировали в течение 48 часов с диапазоном концентраций sCur и MoS ₂ квантовых точек (2–2048 мкг / мл). Клетки фиксировали 50% (мас. / Об.) TCA и окрашивали 0,4% (мас. / Об.) Сульфородамина B (SRB) в течение 30 мин перед промывкой 1% (об. / Об.) Уксусной кислотой. SRB солюбилизировали 10 мМ Трис, pH ~ 10,5, оптическую плотность считывали при 510 нм, и рост клеток выражали как процент (%) роста необработанных клеток.

Анализ лактатдегидрогеназы

Сравнительная цитотоксичность sCur и MoS ₂ квантовых точки оценивали с использованием клеток HCT116 путем измерения активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ), как описано ранее с модификациями ^19,46 . Два отдельных класса тестируемых соединений оценивали в диапазоне концентраций 32, 64, 128, 256, 512, 1024 и 2048 мкг / мл. Вкратце, обработанные в течение 12 часов клетки центрифугировали при 400 g в течение 5 минут и собирали среду для роста. Бульон и реагент LDH инкубировали в соотношении 2: 1 в течение 30 минут с последующим измерением оптической плотности при 500 нм.В качестве контроля использовали клетки, обработанные 2% Тритоном X. Степень цитотоксичности в процентах (%) рассчитывалась следующим образом:

$$ \ frac {{\ left ({Среднее \, \, поглощение \, \, из \, \, Обработанных \, \, клеток — Поглощение \, \, из \, \, Среда — Поглощение \, \, из \, \, Ячейка \, \ и \, \, Среда} \ right)}} {{\ left ({Поглощение \, \, of \, \, Тритон \, \, X \, \, обработанный \, \, Cell — Absorbance \, \, of \, \, Cell \, \, and \, \, Medium} \ right)}} \ times 100 $ $

Оценка цитотоксичности in vivo

Этические руководящие принципы, касающиеся методов использования животных, строго соблюдались при уходе и использовании крыс линии Charles Foster, которые были одобрены Институциональным комитетом по этике животных (IAEC), Индусский университет Банараса, Индия (письмо Этического комитета № 2017 / CAEC / 720).

Животное

Мы следовали ранее описанному методу для оценки цитотоксичности in vivo с использованием крыс линии Charles foster. Мы поддерживали тридцать шесть крыс линии Charles Foster (самцы, 100–120 г) при 25 ° C по стандартному режиму 12 ч: 12-часовой цикл свет-темнота и кормили стандартной гранульной диетой. Перед началом эксперимента животные были акклиматизированы к условиям эксперимента в течение 1 недели.

После акклиматизации мы случайным образом разделили крыс на шесть групп, так что в каждой группе было по шесть крыс.Одна из групп (Группа I) была выбрана в качестве отрицательного контроля (группа с водой MiliQ), в то время как другая составляла положительный контроль (2048 мкг / мл MoS ₂ QD, Группа II), а остальные четыре группы (Группы III – VI). ) были выбраны как экспериментальные группы, которым вводили 256, 512, 1024, 2048 мкг / мл sCur соответственно.

После первого перорального приема в течение первых четырех часов были сделаны общие наблюдения, такие как изменения массы тела, активности и внешнего вида. Всех подопытных крыс умерщвляли для сбора цельной крови для гематологических и биохимических анализов сыворотки.Печень, почки и селезенку вырезали в асептических условиях и взвешивали для гистологических и биохимических исследований. Гомогенат ткани использовали для биохимических оценок глюкозы, аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), креатинина, мочевины, перекисного окисления липидов, СОД и каталазы (подробные сведения о методе см. В дополнительной информации 3). Мы также вручную оценили SOD и каталазу в сыворотке. Также были проанализированы параметры крови (см. Дополнительную информацию 3).

Гистопатологическое исследование

Иссеченные ткани (печень, почки, селезенка) промывали охлажденным физиологическим раствором (0.9% NaCl) и 20 мМ ЭДТА, а затем сразу фиксировали в 10% формалине в течение 72 часов. Затем ткани хранились в 70% этаноле, залиты парафином, нарезаны кубиками толщиной 0,5 мкм с последующим закреплением и окрашиванием гематоксилином и эозином (H&E) для гистопатологического исследования. Было подготовлено минимум пять слайдов на образец (см. Дополнительную информацию 3).

Статистический анализ

Эксперименты проводили в трех экземплярах, а результаты усредняли и выражали как средние значения с соответствующими стандартными отклонениями (SD).Статистическая значимость была проанализирована с помощью двустороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с применением апостериорного критерия Даннета.