Снежана с одной или двумя н: «Снежанна» или «Снежана» как пишется? Есть 1 правило!

By: admin Date: 07.06.2021 Categories: Разное

Содержание

Как правильно пишется имя Снежана или Снежанна?

Имя Снежана пишется с одной Н, потому что это имя не является производным от другого женского имени Жанна, в которой традиционно пишутся сдвоенные согласные. Происхождение имени Снежана скорее всего идет от существительного Снег-Снежный.

Хотя, мне встречались и обладательницы имени Снежанна, и тут видимо главным оказывается еще и желание родителей.

В других славянских языках это имя также часто встречается и нигде нет официальной формы этого имени с удвоенными согласными Н, зато бывают красивые формы этого имени вроде польской Снежки или сербской Снежны.

Если возникает трудность, как пишется: quot;Снежанаquot; или quot;Снежаннаquot;, нужно помнить, что правильным вариантом будет quot;Снежанаquot; — с одной буквой quot;нquot;. Написание имени Снежана можно проверить в словарях — с двумя quot;нquot; там не встречается.

Наверно близкое по звучанию имя Жанна, где две буквы Н, сказывается на написании имени Снежана у тех, кто не знает, как оно правильно пишется. Обычно это имя встречается с одной буквой Н, а не с двумя — СНЕЖАНА. Обычно потому, что как как бы ни писалось это имя правильно, родители могут дать своему ребенку любое имя, как Снежана, так и Снежанна. Если уж записали Снежанной, то придется писать имя только так.

Славянское имя Снежана, на мой взгляд, по смыслу достаточно прозрачное. Им называют ту, которая является белой как снег. Пишется оно, как видите, с одной буквой н. По крайней мере, ни в одном словаре-перечне женских имен я не видела иного написания.

Иное дело древнееврейское имя Жанна, что значит quot;Богом милованнаяquot;.

На самом деле, зачастую правильности имени просто нет. Я это к тому, что родители могут назвать ребенка как Снежана, так и СнежаНна. Правильно то, что написано в паспорте.

Но чаще люди называет детей Снежана.

Добрый день.В настоящее время чаще встречается это имя с одной гласной буквой quot;нquot;, т.е. Снежана.

Но иногда можно встретить и второй вариант написания имени, Снежанна. И в принципе он будет правильным, если указали его при рождение ребенка.

значение и происхождение, характеристика имени и влияние на судьбу / Mama66.ru

Снежана – красивое и редкое женское имя. В России нечасто можно встретить девушку с этим именем. Оно больше распространено на Украине, в Сербии и Болгарии. Характер и влияние имени на судьбу во многом зависят от даты рождения его обладательницы.

Многие задаются вопросом, как правильно пишется имя Снежана, с одной или двумя буквами Н? Примечательно, но оба варианта имеют право быть, и ни один из них не считается ошибочным. Но чаще при написании используют одну букву Н.

Происхождение, история имени

Происхождение имени Снежана имеет древнеславянские корни. По одной из версий оно появилось в честь всем известной Снегурочки, внучки Деда Мороза. По другой – с сербского языка имя Снежана переводится как Белоснежка. Поэтому вполне вероятно, что женское имя Снежана произошло благодаря сказочной героине.

Значение

Что обозначает имя Снежана? Существует несколько версий: «снег»‎, «снежная»‎, «белокурая»‎, «холодная»‎.

Буквенное значение имени Снежана:

С – ярко выраженные лидерские качества, упрямство, непредсказуемость.
Н – трудолюбие и сильная воля.
Е – коммуникабельность, умение располагать к себе окружающих.
Ж – скромность и одновременно импульсивность, способность всегда добиваться цели.
А – активность – как духовная, так и физическая.

Судьба

Обладательницы имени Снежана ранимые и чувственные натуры. Болезненно переносят критику в свой адрес. Часто не могут справиться со своими эмоциями. Неуравновешенны. Нуждается в постоянном внимании и заботе.

Маленькая Снежана человечек тонкой душевной организации. Родителям нужно помнить, что Снежка болезненно воспринимает любые замечания.

Лучше не подвергать девочку лишним потрясениям. Любое наказание должно быть обосновано. Малышка должна четко понимать, за что ее ругают. В противном случае она может замкнуться в себе, что неблагоприятно скажется на формировании характера. Также для малышки с именем Снежана характерны частые перепады настроения.

Вообще, у родителей мало поводов ругать или наказывать Снежану. С ранних лет она на подсознательном уровне чувствует, что хорошо, а что плохо и понимает, какие поступки могут огорчить близких. Снежана крайне ответственный ребенок. Девочка всегда внимательно слушает воспитателей, учителей и других взрослых.

Ей важно быть в числе тех детей, кого постоянно хвалят. Поэтому и с учебой у девочки с именем Снежана практически не возникает проблем. Усидчивый, ответственный ребенок, которому любой школьный предмет дается легко, при условии, что он интересен.

Здоровье у маленькой Снежаны хорошее, болеет она редко. Но есть одно слабое место – пищеварительная система. Поэтому родителям Снежана стоит следить за ее питанием.

Чем взрослее становится Снежанка, тем больше она нуждается в общении, особенно со сверстниками. Одиночество способно довести ее до депрессии. А вот в кругу друзей она может свернуть горы. Снежана стремится приносить всем и всегда пользу. Любит, когда с ней советуются и делятся тайнами.

Здоровая конкуренция разжигает в Снежане азарт и стремление доказать всем, что она лучшая. Но для этого она не пойдет по головам. Компанию для общения старается выбирать по интересам. Как правила, в окружение Снежаны входят позитивные люди.

Взрослая Снежана добрая, общительная и отзывчивая женщина. Прекрасная гостеприимная хозяйка. Обожает путешествовать. Туризм можно смело назвать ее настоящей страстью.

Девушки с этим именем Снежана обладают волевым характером. Это целеустремленные личности. Нередко ставят перед собой амбициозные цели и успешно их добиваются.

Снежана старается выбирать сферу деятельности так, чтобы она приносила удовольствие, но при этом не забывает и о материальной выгоде. Ее можно смело назвать трудоголиком. Женщина не любит сидеть на месте, постоянно чем-то занята. Из Снежан получаются прекрасные экономисты, научные деятели, инженеры, стилисты, косметологи.

С годами у Снежаны могут появиться проблемы со здоровьем. В первую очередь это касается нервной системы и психики. Риск возникновения депрессий увеличивается.

С юности у обладательниц имени Снежана сложно складываются взаимоотношения с противоположным полом. Зачастую ожидания девушки в отношении поклонника расходятся с действительностью. Кроме того, Снежана редко делится переживаниями, что усугубляет ситуацию на личном фронте.

Замуж выходит по любви. Ее избранником чаще всего становится взрослый мужчина, который в состоянии не только обеспечить женщину всем необходимым, но и дать ей отцовскую заботу и понимание. Снежана любит детей, но с рождением своих малышей не торопится. Из обладательниц этот имени получаются отличные хранительницы домашнего очага. Прекрасно готовят, но делают это с неохотой.

Характер

Характер Снежаны в зависимости от даты ее знака зодиака:

Овен – веселая и общительная девушка. Любит и ценит своих друзей. Снежана-овен не может усидеть на месте, она постоянно движется. Непредсказуемая личность. Жажда новых приключений толкает ее на необдуманные поступки.
Телец – отличается наивностью, часто ошибается в людях. Доверчива. Из ошибок не делает выводов. Постоянно наступает на одни и те же грабли. Жизнь Снежаны-тельца скалывается сложно, но при этом в любви ей везет.
Близнецы – стильная и красивая, знающая себе цену. Умело пользуется мужчинами. По жизни чаще руководствуется эмоциями. Снежана-близнецы человек настроения. Корыстна, способна на предательства и обман.
Рак – искренняя, но наивная. Постоянно строит замки из песка и витает в облаках. Скромна и нерешительна. Всегда ищет поддержки у окружающих. Ей, как воздух, необходимо одобрение со стороны.
Лев – открытая и честная. Отличается прямолинейностью, которая часто играет с ней злую шутку. Не переносит даже незначительную критику. Всегда отстаивает свою точку зрения, даже если неправа. Личная жизнь складывается сложно, так как мужчинам тяжело выдержать нрав Снежаны-львицы.
Дева – обладает вспыльчивым характером. Крайне принципиальна. Практически никогда не идет на компромисс. Часто совершает ошибки, но считает, что все должны ее прощать. Домочадцам приходится сложно с Снежаной-девой.
Весы – самая мечтательная из всех Снежан. Доверчива, поэтому часто разочаровывается в людях. Добрая, быстро забывает обиды. Идеальная жена.
Скорпион – своенравная, вспыльчивая, не переносит критики. Тяжело сходится с людьми, друзей мало. Мстительна. Лучше со Снежаной-скорпоном не ссориться, она очень злопамятна.
Стрелец – разносторонняя личность. Хватается за все и сразу. Редко доводит начатое до конца.
Козерог – ранимая, но всячески пытается это скрыть. Даже незначительные замечания в свой адрес воспринимает болезненно. В каждом мужчине ищет рыцаря, который сможет ее защитить, но найти такого непросто.
Водолей – врожденное обаяние помогает найти общий язык с окружающими. Не переносит конфликтных ситуаций, старается их избегать. Всегда идет на компромисс.
Рыбы – по жизни Снежаны-рыбы настоящие романтики. Они мечтают об идеальной любви, настоящей дружбе. Их главный минус в идеализации окружающих. Часто это приводит к разочарованиям и сердечным травмам. Не способны на обман и предательство. Принципиальны.

Именины

Именины Снежана не празднует, так как этого имени нет в святцах.

Цвет имени

Цвет имени Снежана – белый, серебристый. Белый цвет символ чистоты и новизны. Люди с таким цветом целомудренны и религиозны. Всегда и на все имеют свою точку зрения. Целеустремленны. Отличаются врожденной интеллигентностью. Деньги для них не главное в жизни. Отзывчивы, с большой охотой помогают людям как материально, так и морально.

Цветок имени

Цветок имени Снежана – лилия. Он является символом невинности. Девушки с цветком имени лилия отличаются скромностью и духовностью. Коммуникабельны, всегда в центре внимания. Обладают хорошим чувством юмора.

Церковное имя, святцы

В православной и католической вере данного имени нет, поэтому обряд крещения происходит под другим именем.

Перевод имени, на разных языках

Имя Снежана в переводе на другие языки:

английский – Snezhanna;
сербский – Snežana;
болгарский – Снежина;
украинский – Снiжана;
хорватский – Snježana.

Полное имя, сокращенное и ласковое

Полное имя Снежана имеет следующие формы:

Снежанка;
Снежка;
Снежа;
Снежок;
Нежка.

К каким именам подходит отчество

С женским именем Снежана хорошо сочетаются следующие отчества:

Леонидовна;
Алексеевна;
Ильинична;
Валерьевна;
Вячеславовна.

Совместимость имен

Идеальными спутниками для Снежаны станут мужчины, носящие следующие имена:

Андрей. В паре будет много общих интересов, поэтому бытовые трудности преодолеваются легко. В семье будет одновременно присутствовать как любовь, так и дружеские отношения. Подробнее об имени Андрей →
Владимир. В союзе на первое место выходить страсть и страх потерять друг друга. Снежана романтичная натура и Владимир сможет предоставить супруге максимум романтики. Именно обладатель этого мужского имени сможет снять постоянное душевное напряжение девушки.
Георгий. Идеальный брак, в котором присутствуют любовь, дружба, уважение и взаимопонимание. Ссоры могут возникать, только когда молодые люди начнут делить пальму первенства. Оба хотят быть главными. Но если они сумеют договориться, то проживут вместе долго и счастливо. Подробнее об имени Георгий →
Евгений. Отношения крепки и бескорыстны. Оба партнера отличаются спокойствием и уверенностью друг в друге. Их интимная жизнь очень темпераментна. Подробнее об имени Евгений →
Роман. К вопросу создания семьи оба подходят ответственно. В браке относятся с уважением и заботой к партнеру. Идут на компромисс, что позволяет жить долгие годы в гармонии. Подробнее об имени Роман →
Эдуард. У этих двоих практически 100 % совместимость. У них много общего. Поэтому пары есть все шансы прожить вместе до глубокой старости.

Склонение имени

Как склоняется имя Снежана по падежам:

в именительном – Снежана;
родительном – Снежаны;
дательном – Снежане;
винительном – Снежану;
творительном – Снежаной;
предложном – Снежане.

Известные люди с именем Снежана

Знаменитые женщины с этим именем:

Снежана Егорова – украинская телеведущая.
Снежана Малович – премьер-министр Сербии.
Снежана Перич – каратистка.
Снежана Берич – певица из Сербии
Снежана Пайкич – сербская спортсменка в легкой атлетике.

Тайной имени Снежана можно назвать ее ранимость. С возрастом обладательница этого имени пытается тщательно скрывать это качество. И надо сказать у нее это отлично получается. В любом возрасте болезненно переносит критику. Хорошая жена и мать. Но на первом месте у нее не семья, а работа. Снежана настоящий трудоголик, который ставит перед собой цели и успешно добивается их.

Фото: kaknazvat.com, depositphotos.com

Полезное видео про значение имени Снежана

Медицинская редакция:
Эксперты сайта

Автор

Автор портала Mama66.ru

Администрация сайта не осуществляет деятельность в сфере медицинских услуг.
Консультации и рекомендации носят информационный характер и не являются полноценной медицинской помощью.
Любая медицинская помощь осуществляется только в специализированных медицинских учреждениях.
При любых недомоганиях обратитесь к врачу.

Русские имена на английском языке

Знаете ли вы, как будет звучать ваше имя по-английски? А как правильно его написать? Несмотря на то, что в англоязычных странах много сложных и непривычных нам имен, которые мы не всегда можем разобрать с первого раза, британцам и американцам тоже не всегда просто понять и произнести русские имена.

Из этой статьи вы узнаете, как пишется по-английски Александра, Анастасия, Андрей, Евгений, Дарья и другие русские имена, а также, как правильно представится другому человеку при знакомстве и как заполнять документы без ошибок.

Некоторые имена универсальны и имеют свои аналоги во всем мире. Например, Александр — это Алекс (Alex), Елизавета — Элизабет (Elizabeth), Мария — Мэри (Mary), Юлия — Джулия (Julia) и так далее.

Правила транслитерации

При переводе имен собственных и названий на русском языке стоит воспользоваться общепринятой транслитерацией. Это побуквенная передача слова буквами другого языка. Вот так выглядит алфавит на кириллице и аналоги его звучания на английском языке:

А — A

Б — B

В — V

Г — G

Д — D

Е — E, YE

Ё — E, YO

Ж — ZH

З — Z

И — I

Й — Y

К — K

Л — L

М — M

Н — N

О — O

П — P

Р — R

С — S

Т — T

У — U

Ф — F

Х — KH

Ц — TS

Ч — CH

Ш — SH

Щ — SHCH

Ъ — «’» (либо опускается)

Ы — Y

Ь — «‘» (либо опускается)

Э — E

Ю — YU

Я — YA, IA

Если с транслитерацией отдельных букв и звуков все более или менее понятно, то с сочетанием букв может быть сложнее. Очень часто возникает проблема с русскими окончаниями имен собственных. Ниже вы найдете правильные варианты транслитерации:

«-ай» — «-ai»

«-ая» — «-aya»

«-ий» — «-y(iy)»

«-ей» — «-ei»

«-ия» — «-ia»

«-ой» — «-oy(i)»

«-ый» — «-yi»

Еще несколько важных моментов:

Русский звук «х» часто усиливается и передается именно как «kh», потому что в английском языке «h» часто опускается при произношении

Сочетание букв «дж» передается при транслитерации несколькими вариантами: j, dj или dzh.

Сочетание «кс» лучше передать буквами «ks» вместо «x», чтобы имя звучало более правильно.

Обычно апостроф в транслитерации используется чтобы подчеркнуть мягкость согласного звука, но, как правило, в официальных документах он используется редко.

Давайте разберем популярные русские имена. Знаете ли вы, как написать по-английски Александр? Здесь варианта может быть два: Aleksandr или Alexander. Второй более приближен к американскому варианту имени и сокращается как Alex. Кстати, имя Алексей по-английски написать можно как Alex в том числе. Но полный вариант этого имени при правильной транслитерации — это Aleksey или Alexey.

Имя Андрей на английском языке будет писаться как Andrey или Andrei. Иностранный аналог этого имени — Andrew (Эндрю). Обратите внимание, что как пишется Андрей по-английски, так и произносится. Не забывайте сверяться с правилами транслитерации при переводе. У имени Юрий перевод на английский будет Yuriy. Но часто встречаются и другие варианты транслитерации: Yuri или Yury.

Переходим к более сложному: как будет имя Евгений по-английски? Правильный ответ — Yevgeny или Yevgeniy. Кстати, это имя тоже имеет свой аналог в английском языке — Eugene (Юджин). У женского варианта этого имени, Евгения, перевод на английский будет допустим в нескольких вариантах: Yevgenia, Yevgeniya или Evgenia.

Каверзный вопрос: как пишется Наталья на английском языке? Дело в том, что даже в самом русском языке есть два варианта написания этого имени: Наталия и Наталья. Так что по-английски варианты имени будут следующими: Natalya, Natalia или Nataliya. С этим именем, кстати, связан забавный стереотип: за границей имя «Наташа» уже стало нарицательным для всех красивых русских девушек. Так что как написать по-английски Наташа тоже надо знать: Natasha.

Одно из известных русских имен — это Екатерина. На английском языке оно будет звучать как Yekaterina или Ekaterina. Распространенный англоязычный вариант этого имени — Кейт или Кэтрин. Что касается других женских имен: как пишется имя Анастасия на английском? Очень просто — Anastasia или Anastasiya. А вот сокращенный вариант, то есть имя Настя на английском будет писаться как Nastya.

В целом, сокращенные имена гораздо проще как произносить, так и писать. Например, по-английски Маша будет звучать как Masha или Mary. Юля на английском мы напишем как Yulya, и в сокращенном варианте это имя не сильно отличается от полного — Юлия (Yuliya).

Ксюша по-английски будет Ksyusha, а полный вариант имени Ксения — Kseniya.

Как вы переведете имена, в которых есть мягкий знак? Например, как пишется по-английски Татьяна? Если вы внимательно читали правила транслитерации, то знаете, что при обычном письме мягкий знак может обозначаться одиночным апострофом, но в документах и именах собственных он обычно просто опускается. Так что полный вариант имени Таня по-английски пишется как Tatyana или Tatiana. Что касается Даши, то кратко оно будет звучать как Dasha, а вот по-английски Дарья в полноценном варианте имени будет писаться как Darya.

Что касается такого сложного имени, как Людмила, на английском оно будет писаться как Lyudmila. А вот сокращенный вариант, Люда, по-английски будет Lyuda.

Мы уже разобрали достаточно много простых и сложных имен. Парочку вопросов напоследок: как пишется по-английски Вероника? Правильный ответ — Veronika. Это имя созвучно с другим красивым женским именем, Виктория, которое для англичан не является чем-то чужим: так звали одну из самых известных королев Великобритании. Наиболее правильный вариант транслитерации этого имени — Victoria.

Ниже приведем примеры, как правильно пишутся другие русские имена на английском языке.

Мужские имена:

Анатолий — Anatoliy

Антон — Anton

Аркадий — Arkadiy

Артур — Artur

Борис — Boris

Вадим — Vadim

Валентин — Valentin

Валерий — Valeriy

Виктор — Viktor

Виталий — Vitaliy

Владимир — Vladimir

Владислав — Vladislav

Вячеслав — Vyacheslav

Геннадий — Gennadiy

Георгий — Georgiy

Денис — Denis

Дмитрий — Dmitriy

Егор — Egor

Иван — Ivan

Игорь — Igor

Илья — Ilya

Кирилл — Kirill

Константин — Konstantin

Леонид — Leonid

Максим — Maksim

Михаил — Mikhail

Никита — Nikita

Николай — Nikolai

Олег — Oleg

Павел — Pavel

Петр — Pyotr

Роман — Roman

Руслан — Ruslan

Сергей — Sergey

Степан — Stepan

Тимофей — Timofey

Федор — Fedor

Ян — Yan

Женские имена:

Алена — Alena

Алина — Alina

Алла — Alla

Ангелина — Angelina

Анжела — Anzhela

Анна — Anna

Валентина — Valentina

Вера — Vera

Галина — Galina

Диана — Diana

Елена — Elena

Елизавета — Elizaveta

Зоя — Zoya

Инна — Inna

Ирина — Irina

Кира — Kira

Кристина — Kristina

Лариса — Larisa

Маргарита — Margarita

Нина — Nina

Оксана — Oksana

Олеся — Olesya

Ольга — Olga

Полина — Polina

Регина — Regina

Светлана — Svetlana

Снежана — Snezhana

София — Sofia

Тамара — Tamara

Яна — Yana

Кстати, одни и те же русские имена могут иметь разное написание на английском в зависимости от организации, выдавшей документ. Так происходит из-за того, что в России не все соблюдают правила международной транслитерации, и это не совсем правильно, так как может возникнуть путаница при покупке авиабилетов или заполнении документов.

Вспомните, как написаны ваше имя и фамилия в загранпаспорте. Наверняка, вы обратили внимание, что в нем не указано ваше отчество. Это потому, что такого понятия, как «отчество» в английском языке нет, а вот двойные фамилии и имена встречаются часто. Но иногда нам все же нужно заполнить свое полное ФИО на английском языке или представиться коллегам по бизнесу. В таком случае, лучше называть сначала имя, потом отчество, а затем уже — фамилию (например: Ivan Alekseevich Ivanov).

При заполнении документов в графе First name указывается имя, в графе Last name или Second name — фамилия.

Вместо First name может быть указано given name / forename / Christian name — это все обозначает имя, которое дается человеку при рождении.

Мы уже упоминали о том, что у многих иностранцев нет отчества, но есть второе имя. Оно указывается в документах как Middle name. Если у вас его нет, то эту графу стоит оставлять пустой. Строка с фамилией еще может быть помечена как surname или family name.

Nickname означает укороченную или сокращенную форму имени, или, что чаще, просто прозвище. Отчество в английском языке переводится как patronymic, оно же — родовое имя. Фамилия девушки до замужества будет называться maiden name, а после — married name.

Еще раз хочется обратить ваше внимание на такую важную деталь, как правильное указание собственного имени, особенно в документах и резюме. Не нужно искажать свое имя на английский манер в официальных бумагах. Если при знакомстве Елена может представиться как Helen, а Мария — как Mary, то при заполнении документов лучше писать согласно правилам международной транслитерации: Elena и Maria.

И, напоследок, несколько полезных фраз на тему имени человека в английском языке:

Представиться кому-то очень просто: «Hello, my name is Anton» (Здравствуйте, меня зовут Антон).

Спросить как правильно пишется чье-то имя можно при помощи фразы «Could you spell your name, please?» или «How do you spell your first name?». Насчет фамилии аналогичный вопрос: How do you spell your last name? (Как пишется ваша фамилия?).

Если вы хотите узнать, как пишется полное имя человека, задайте следующий вопрос: What is the full name for Josh? (Какое полное имя для Джош?).

А если в слове несколько повторяющихся букв и вы не уверены в правильном написании — вы можете задать вопрос такого типа: Is your name spelled with one L or double L? (Ваше имя пишется с одной Л или с двумя?).

Надеемся, что теперь вы знаете, как правильно написать ваше имя на английском языке и не ошибетесь при заполнении документов. Успехов!

«Анестезиологом, как мне кажется, рождаются» — Зооинформ

Беседовал Евгений Назаренко
Фото Екатерины Кривякиной

Вероятно, в скором времени вполне можно будет говорить о рождении интернет-мема «счастливый анестезиолог», за которым закономерно должен будет последовать «счастливый онколог», «счастливый герпетолог» и т. д. — да и просто «счастливый ветврач». «Счастливый анестезиолог» Снежана Атанасова на сегодняшний день широко известна российским ветврачам благодаря своему профессионализму, энтузиазму и таланту обучать других. На XXV Московском конгрессе она читала лекции дважды, а после второй лекции ещё и ответила на вопросы «Современной ветеринарной медицины». В общем, расписание было достаточно насыщенным.

— Снежана, скажите, пожалуйста, с какого года вы занимаетесь анестезиологией?

— С 2003 года. Клиника «Биоконтроль». Туда я пришла в качестве студента-стажёра, потом работала летом в должности операционной сестры и через полгода уже перешла в отделение анестезиологии ассистентом. Работала много и постоянно. Позже, после окончания учёбы в университете, недолго проработав как врач, я «сгорела» от усталости и тяжёлых пациентов, попала в аварию на машине и на некоторое время вообще бросила работу в клинике; и только в 2011–2012 году вернулась и вновь стала заниматься анестезиологией более активно. В перерыве с 2007-го по 2011 год у меня была небольшая частная практика, я консультировала на дому своих немногочисленных пациентов, затем вернулась в клинику в качестве врача общей практики и примерно через полгода поняла, что хочу вновь погрузиться в анестезиологию; с 2012 года очень активно навёрстываю упущенное.

— То есть фактически лет пять.

— Активно — да. Хотя общий стаж — лет 15. Но даже в промежутке с 2007-го по 2011 год я постоянно училась. Вообще, анестезиологом, как мне кажется, рождаются.

— А лекции когда начали читать?

— С 2014 года. Тогда я начала преподавать, и была прочитана первая моя лекция. Пётр Ершов (директор ИВЦ МВА и сети клиник «Свой Доктор») сначала пригласил меня в «Свой доктор» вести курсы анестезиологии, и уже позже я согласилась выйти туда на работу в качестве руководителя отделения реанимации и интенсивной терапии.

— Получается, достаточно небольшой период, но за это время у вас сложилась репутация одного из ведущих специалистов в анестезиологии и одного из самых популярных лекторов. Благодаря чему так произошло?

— (Смеётся.) Благодаря тому, что я умею делать четыре вещи: печь кексы, парковаться параллельно, любить и давать наркоз. Это всё, что я умею делать. Я очень люблю свою профессию и не представляю себя в другом качестве. Я никогда не оперировала, мне это не нравится. Я перфекционист; очень упрямая, если я чего-то хочу, то добиваюсь желаемого. Возможно, на меня повлияли родители ещё в детстве. Может быть, это синдром отличника, но мне всегда кажется, что если я что-то делаю, то я должна делать это хорошо. В институте училась также. Никогда не хотела красный диплом, в первом семестре училась с тройками — нарочно. Но так как мне надо было всё знать, получилось наоборот.

— Каким в итоге вышел диплом?

— Красным. Так вот, в работе также. Если ты работаешь анестезиологом, значит надо всё знать. И в личной жизни…

Я вернулась в ветеринарию как раз после сложного периода. Погиб очень близкий мне человек, с кем я планировала связать свою жизнь, и мне нужно было что-то менять, нужно было куда-то деть свою любовь, всё, что есть внутри. И всё это перешло на работу. В определённый момент я сломала себя: я была жёстче, эгоистичнее, наглее, но решила, что хочу быть мягкой, доброй, отзывчивой, всем помогать, учить, учиться. И теперь всё идёт по накатанной, уже не сбавить обороты, даже если хочется. Надо двигаться постоянно дальше и дальше.

— Недавно вы заявили в своём блоге, что пускаетесь «в свободное плавание». Можно поподробнее об этом?

— Эта мысль витала у меня очень давно. Я была на стажировке в Англии в 2014 году у одного из ведущих анестезиологов Европы Джона Крекнела, ездила стажироваться в области анестезии львов. И тогда я заметила, что у него так и называется «фирма»: Jonathan Cracknell Anesthesiology Services. Он главный врач очень большого сафари-парка, но, помимо этого, работает со многими хирургами, с различными специалистами по всему миру. Работает не просто для того, чтобы зарабатывать достаточно: он выбирает, где ему интересно работать, где он более эффективен. Я же какое-то время работала руководителем. Не знаю, насколько это моё. Те пять лет с 2007-го по 2012 год, пока я не работала в ветеринарии, я проработала в двух крупных американских компаниях — Procter & Gamble и 3M, в отделах продаж и маркетинга. Это было сознательное решение, пройден очень непростой отбор, много вложено в работу, было движение в карьере вверх. И там меня чуть-чуть научили управлению, переговорам, развили лидерские качества. Всё это я смогла применять уже позже в качестве руководителя в клинике. Однако в определённый момент я поняла, что мне надо снова быть врачом и работать в «поле». Позже я осознала возможность некой «свободы». И сейчас, когда я не работаю ни на кого, а просто сотрудничаю, никто не чувствует ревности. У руководителя клиники, например, больше не возникает ревность, когда мне нужно куда-то уехать. Так или иначе, в какой-то момент мне показалось, что моя фамилия уже, наверное, может на меня поработать. Название моего проекта «Atanasova Anesthesiology Assistance» тоже очень символичным оказалось. Не просто хорошо звучит и выглядит… В моей фамилии, как бы это ни выглядело странно и загадочно, изначально уже заложены первые буквы проекта: At-An-As. Сейчас я уже работаю с несколькими хирургами в разных клиниках, работаю со сложными пациентами основательнее. Мне это подходит; сложно разбрасываться в день на десять пациентов, мне надо взять одного и с ним провести время с утра и до вечера. И по характеру мне больше подходит такой режим. Я успокоилась, не трачу время на бумажки, на собрания, да и здоровье не позволяет уже работать гиперактивно… Если уже и возьмусь руководить, то либо чем-то своим, либо проектом совсем другого формата.

— Мне кажется, гиперактивность из вас всё равно «плещет»…

Да, но она сейчас более соответствует моему внутреннему личному графику. Я могу поспать подольше или, наоборот, поработать допоздна, взять выходной, уехать куда-то с лекциями, уехать помочь кому-то в другой город, в другую страну. И у меня такой характер ещё с детства: мне постоянно нужно менять род деятельности, чтобы быть постоянно бодрой, постоянно заинтересованной. Поэтому сидеть на одном месте и работать рутинно «два через два» я не могу. Мне становится скучно, я решаю, что нужно бросить всё, поменять всё… А так я постоянно что-то меняю, постоянно нахожусь в тонусе.

— По поводу подхода. У Акунина в «Аристономии» главный герой — анестезиолог — утверждает, что добиться при анестезии наилучших результатов можно, единственно изучив не только физическое, но и психологическое состояние пациента. Не знаю, происходит ли так на самом деле у медиков, но в любом случае с животными сложнее практиковать подобное. Есть ли у вас индивидуальный подход к пациенту, ведёте ли вы их?

— Да, веду. Получается так, что с собаками сложнее, но с кошками прекрасный контакт. Взаимосвязь врача и пациента должна быть независимо от того, медики мы или ветеринарные врачи. Может быть, это мною придумано, но иногда я вижу пациента так, словно он «прозрачен». Тогда я начинаю опасаться предстоящего наркоза, срабатывает «чутьё» анестезиолога, появляется предчувствие, что что-то пойдёт не так. Я всегда должна посмотреть животному в глаза, я должна с ним договориться, должна пообещать, что всё пойдёт хорошо. Иногда у меня складывается ощущение, что я могу с ним поговорить. На это, конечно, нужно время. У меня был сложный момент: я работала с Сергеем Александровичем Ягниковым, это была очень интересная работа с выдающимся хирургом, но она проходила по принципу «положил — прооперировал». Через пару месяцев я поняла, что не могу так работать, потому что не понимаю, что происходит, и начинаю совершать ошибки, поскольку не всё знаю о пациенте, не поймала с ним контакт, не поняла его темперамент, а это всё, как мне кажется, влияет на наркоз. Поэтому у меня бывает максимум два пациента в день, а желательно, чтобы был вообще один. Я беру его, и дальше «от и до»: подготовила, его прооперировали, я пробыла с ним в послеоперационном периоде, он «проснулся», я увидела, что он стабилен, и тогда закончила работу с ним и передала коллегам.

— Как такой индивидуальный подход влияет на выживаемость?

— Я не знаю статистики, но по личному ощущению качество работы и результат улучшаются во много раз. Такой подход — это гарантия того, что я проконтролирую полностью всё, что могу. Есть что-то, что не поддаётся контролю. Нулевого риска не бывает, не мы всё определяем, но такой подход гарантирует: всё, за что я отвечаю, будет сделано на лучшем уровне. Я не отвлекусь, ничего не упущу, не потеряю связь с пациентом, который чаще всего крайне сложный.

— Вы продолжаете учиться? Как этот процесс проходит в настоящий момент?

— Я за последние полгода меньше работала, чем раньше, мне нужно было несколько передохнуть, и я очень много времени проводила дома. В итоге за последние полгода я выросла по знаниям, как за предыдущие пять лет. Нам всегда не хватает времени. Но обучение — это обязательно. Я каждый день читаю: вечером допоздна, а иногда засиживаюсь и до утра. Вся моя жизнь, как бы я ни хотела уйти от этого, завязана на анестезиологии. И мне это очень интересно. Я вообще очень любознательная, каждый день «копаю», и мне всё время мало.

— Недавно вы как слушатель участвовали в медицинской конференции…

— Да, это всё благодаря Институту хирургии им. А. В. Вишневского. Я лично знакома и могу сказать, что даже дружу с большими хирургами и анестезиологами оттуда. В определённый момент я поняла, что мне мало брать знания только из ветеринарной анестезиологии. Она, к сожалению, достаточно «плоская» по сравнению с медицинской, вторая — глубже. И, так как мне хочется понимать её так же, как это делают хорошие медики, я начала активно интересоваться предметом. У нас уже есть даже и проекты, совместные с медицинскими хирургами. С Институтом нейрохирургии им. Бурденко мы сотрудничаем уже несколько лет, помогая им проводить уникальный обучающий курс для российских детских нейрохирургов. Это большая ответственность и честь. Так и должно быть. Мы обязаны сотрудничать. Я очень надеюсь, что с Институтом хирургии им. А. В. Вишневского тоже получится плодотворная совместная работа. Мне очень интересно то, что они делают. Поэтому я стараюсь ходить на медицинские конференции, на мастер-классы, бывать в операционной и наблюдать за работой высочайшего класса. А потом привносить очень многое в свою практику и улучшать качество анестезии своих пациентов.

— Вы очень цените своих коллег и работу в команде. Бывает так, что приходится работать с человеком, с которым работать некомфортно по какой-то причине?

— Я вообще очень дружелюбный человек. У меня редко бывает отсутствие контакта. С детства так. Ещё в школе и институте все, например, делились на две группы, я дружила и с теми, и с другими. Причём это создавало кучу проблем. Мне. Но я ценю дружбу с каждым, поэтому не могу оказаться от неё. Скажу так: есть люди, с которыми я просто работаю, а есть те, с которыми я получаю удовольствие от работы. Конечно, были и те, с кем мне было работать сложно. Но либо нас разводила судьба, либо мы приноравливались друг к другу. А в целом я с огромным удовольствием работаю с людьми — может, потому, что сейчас могу выбирать команду. Иногда бывает так, что сложно работать в большой группе, но с каждым в отдельности — нормально. Если же в коллективе что-то не складывается, то стараемся перестраиваться, ищем варианты.

— Специальные методы «перестраивания» есть?

— У меня нет, просто садимся вместе, честно говорим друг другу, что что-то у нас не так. Тренингов не проводим. Нужно притираться, всем нужно меняться. У меня не было ни с кем критичной несовместимости. Чаще всего я, наоборот, ко всем очень хорошо отношусь.

—По моим ощущениям и воспоминаниям, 10 лет назад в России, можно сказать, не было ветеринарной анестезиологии. Как этот процесс развивался и развивается сейчас?

— Когда я пришла в «Биоконтроль» в 2003 году, там работали старший анестезиолог Надежда Григорьевна Козловская, мой преподаватель, ещё четыре анестезиолога. Благодаря Надежде Григорьевне и Владимиру Никифоровичу Митину это была единственная клиника, в которой служили очень профессиональные врачи этой специализации. Я удостоилась огромной чести там учиться. Трудиться рядом с такими людьми. Тогда это всё уже работало активно, это всё же не 1995 год, но всё равно в целом было очень непросто. Потом на какой-то момент я ушла, а когда вернулась в 2012 году, то поняла, что всё уже обстоит гораздо лучше. Сейчас всё ещё лучше. Надеюсь, я тоже на это как-то повлияла, повлиял мой пример человека, радостного и счастливого в своей профессии. Я не рутинный анестезиолог, я прихожу на работу, и у меня столько всего интересного, — и так можно работать! Я всем говорю, что это очень «широкая» специальность, очень обширная, и я надеюсь, что таких «счастливых анестезиологов» будет больше. За последнюю пару лет я вижу очень хороший скачок.

— У нас же в вузах до сих пор не преподают анестезиологию?

— Преподают, по-моему, в Ростове или Краснодаре. Сейчас я надеюсь, что мы сможем сделать что-то в РУДН, моей alma mater. Я там начинаю вести постдипломное образование и очень рассчитываю, что смогу когда-то преподавать и студентам. В Московской ветеринарной академии полноценного курса анестезиологии пока нет.

— Как вы видите будущее российской ветеринарной анестезиологии?

— (Смеётся.) Счастливое будущее, очень! С опиоидами, с хорошим обучением, в соответствии с хорошими европейскими и американскими стандартами.

— Когда?

— Я думаю, что лет через десять мы к этому должны прийти.

— В масштабах всей страны?

— Нет, думаю, в масштабах крупных городов. А в масштабах всей страны мы за этот срок придём, думаю, к тому уровню, какой сейчас есть в Москве и Санкт-Петербурге. Хороший средний уровень, когда пациенты не погибают, когда они контролируемы, имеют хорошую выживаемость благодаря наркозу. 10 лет — это даже много, на мой взгляд. Можно и за пять всё сделать. Особенно если все будут так же влюблены в работу, как я. Поймут, что можно быть счастливым в рамках анестезиологической работы. Я на работу хожу, как на праздник, как в детский сад мы все когда-то ходили…

— Детский сад далеко не все любят…

— Да, тоже верно… Тем не менее — я работаю с удовольствием, для меня это не каторга, не пытка, просто хорошее профессиональное времяпровождение.

— Вам комфортнее читать лекции перед живой аудиторией или в форме вебинаров?

— Перед живой, причём тогда, когда аудитория реагирует. Очень сложно читать, когда я не поймала чей-то взгляд.

— Сегодня реагировали?

— Нет. Сегодня как-то маловато. Но я всё-таки поймала два-три взгляда людей, для них я и читала. Может после вчерашнего отдыха людям было тяжело… Но мне нужно действительно понимать, что люди хотят слышать то, что я хочу им сказать. Это очень важно. С вебинарами я научилась по-другому: я рассказываю и представляю себе этих людей; заранее смотрю, кто меня будет слушать, представляю их лица… Но мне больше нравится читать «вживую». Хотя я на публике даже стишок не смогу рассказать, я очень стеснительная во всём, что не касается анестезиологии. Когда я рассказываю о своём деле, я меняюсь абсолютно.

— Вы много пишете в Facebook. Это потребность внимания, быть в центре, что-то ещё?

— Это потребность творчески выражаться. Я не умею ни рисовать, ни писать музыку, ни петь, ни танцевать и никак не могу проявить своё внутреннее желание что-то отдать. А так как во мне моя любовь долго копилась, мне её надо отдавать; и ближе всего оказалось написание текста. Наверное, книжку надо уже писать какую-то…

— Какое могло бы у неё быть название?

— Что-то вроде «Двенадцати месяцев» — с привязкой к сезонам. Я вообще веду дневники с самого детства, у меня их стопка. Просто сейчас всё это переросло в онлайн-формат, хотя личный дневник всё равно веду. Есть те эмоции, которые я никому не могу передать, только бумаге. И лет через десять сяду, прочитаю, улыбнусь…

— А может быть так, что «всё в печку»?

— Запросто. Я очень люблю «всё в печку», ничего не коллекционирую, ничего не собираю, кроме посадочных талонов.

— Зачем?

— Как напоминание, где была. Больше ничего. Посадочные талоны и фотографии. У меня был вопрос самой себе: почему я часто делаю селфи? Так вот — это чтобы запомнить свою эмоцию в данный момент, только ради этого. Чтобы потом посмотреть и вспомнить, что там-то я была счастлива по такой-то причине. Не для того чтобы себя показать, а чтобы запомнить это ощущение. А «в печку» — запросто. У меня туда уходит 90% вещей: одежда, книги ненужные, ничего не храню. У меня дома нет полок, нет шкафов, всё по минимуму.

— Есть ли вопрос, на который хотелось бы ответить, но я не спросил?

— О чём бы хотелось сказать?.. Я только недавно поняла, что я хочу семью и детей. Уже пора… И сейчас чётко ощущаю, что я даже на некоторое время готова любимую анестезиологию променять на пару-тройку сыновей (смеётся). Вот я это наконец-то и сказала…

— Но не насовсем?

— Нет, я была бы не я, если бы не работала. Ни моей семье, ни моим детям не будет интересно, если я только буду печь им кексы. Это моя энергия: мои счастливые пациенты, контакт с владельцами. Я люблю с ними общаться, мне нравится, когда они счастливы, нравится им помогать, потому что мне мои родители в своё время сказали, как это важно — помогать. Они приходят растерянными, и только я могу им что-то объяснить, поддержать. Но на какое-то время уйти надо. Я уже поняла, что я могу «пропасть», потом вернуться и всё наверстать; думаю, так и будет.

— Ваша сегодняшняя презентация заканчивалась картинкой с писающим котиком. У «Машины времени» есть альбом, который украшает примерно такая же картинка. На вопрос — что это означает? — Андрей Макаревич как-то ответил, что рисунок символизирует некое высвобождение от творческого груза, который копился внутри. Что означает картинка в вашем случае?

— (Смеётся. ) Эта презентация была связана с почечной недостаточностью, и есть фраза, которую я оценила, только испытав почечную недостаточность на себе: «моча — радость врача». На самом деле, хорошо писающий пациент — для меня абсолютное счастье. Но «освобождение от груза» — это, конечно же, в точку!

СВМ № 3/2017

Оценить материал

Нравится

Нравится
Поздравляю
Сочувствую
Возмутительно
Смешно
Задумался
Нет слов

Как пишется имя снежанна?

Постараемся разобрать правописание каждого из этих слов.

Снежана

СНЕЖАНА или СНЕЖАННА. Происхождение имени относят с скандинавским странам, хотя некоторые специалисты считают его славянским. В переводе — «снежная». Наиболее распространенный вариант написания — СНЕЖАНА (то есть с одной -Н-). Иногда возможно употребление двойной -НН-. Это тот редкий случай, когда для 100% уверенности, нужно заглянуть в паспорт конкретного человека.

Геннадий

Геннадиевич или Геннадьевич. Отчества, производные от имени Геннадий, всегда пишутся с двумя -НН-. Ваша грамотность не нарушится при использовании обоих вариантов написания — ГЕННАДИЕВИЧ и ГЕННАДЬЕВИЧ, поскольку они оба являются верными. Если вы сомневаетесь, как обратиться к конкретному человеку на письме, лучше уточните этот вопрос (эта информация также понятна из паспорта).

Анастасия

Анастасие или Анастасии.Правильным вариантом является АНАСТАСИИ. Чтобы убедиться в этом, просклоняем слово (Анастасия, Анастасии, Анастасии, Анастасию, Анастасией/Анастасиею, Анастасии). Как видите, варианта АНАСТАСИЕ не встречается ни в одном из падежей.

В русском языке встречается много «трудных» моментов при написании имен, и каждый такой случай требует индивидуального подхода.

Толкование имени

Имя Снежа является символом надежности. Человек всегда точно знает, что нужно делать именно сейчас. Такие люди пользуются заслуженным авторитетом даже в юном возрасте.

Со временем эта особенность личности обретает четкую направленность под влиянием обстоятельств жизни. Избранный род деятельности становится областью приложения возможностей именно в качестве человека, на которого всегда можно положиться. Иногда на сохранение этого статуса уходят все физические и нравственные силы.

Производные формы имени Снежа

Проиcхождение

славянские

Значение

снежная

Подходящие цвета

Тёмно-зелёный Коричневый

Счастливые числа

4, 22, 6, 7

Планета

Сатурн,Меркурий

Металл

Уран,Олово

Знак зодиака

♍ Дева

День недели

Среда 3738

Место в рейтинге
Популярных имен

Даты именин

Камни-талисманы имени

Аметрин, Красный Железняк, Данбурит, Изумруд, Стекло, Лунный Камень, Пемза, Прозрачный Кварц, Черный Сапфир, Белый Сапфир, Желтый Сапфир, Серебро, Содалит, Стромболит, Тигровый Глаз, Черный Турмалин, Цирконий Узнать больше об имени Снежа

Внешний облик

Вы можете проявлять неразборчивость при формировании собственного имиджа. По большому счету Вам куда важнее качество и удобство одежды, нежели соответствие ее стиля моде сегодняшнего дня. Единственное правило, которого Вам, пожалуй, следует придерживаться – это следить за тем, чтобы Ваш костюм не разрушал впечатления о Вас, как о человеке, заслуживающем всяческого доверия. Ведь именно это впечатление Вы и должны производить.

Совместимость имени Снежа, проявление в любви

Снежа, самодостаточность делает Вас человеком, для которого любовь не является «предметом первой необходимости». Вы крайне разборчивы в любых связях, будь то дружба или более близкие взаимоотношения. И в том, и в другом случае партнер должен соответствовать Вашим критериям идеала абсолютно, иначе Вы легко без него обойдетесь. Но если Вы все же находите человека, подходящего под установленную Вами «планку», то отдаетесь чувству полностью, самозабвенно и безоглядно, что может стать приятной неожиданностью для партнера, введенного в заблуждение Вашей внешней закрытостью и отчужденностью.

Лучшие имена для брака, какое мужское имя лучше всего подходит имени Снежа

Максим
Дмитрий
Егор
Алексей
Федор
Глеб
Тимур
Евгений
Петр
Руслан
Виктор
Олег
Вячеслав
Елисей

Мотивация

Вы – человек «закрытый». Все стремления и желания сосредоточены на собственной личности. Поэтому, принимая любое решение, Вы склонны выбирать то, что в наибольшей степени будет способствовать именно Вашему росту и совершенствованию. И каждый такой выбор увеличивает дистанцию между Вами и окружающим миром.

Со временем эта «скорлупа» становится все толще, а возможность «выйти наружу» – все более нереальной. Но даже самая прочная оболочка может в один прекрасный день не выдержать внешнего давления, лопнуть. И тогда, невзирая на все Ваши выдающиеся способности, Вы окажетесь беззащитны, как только что вылупившийся птенец.

Ни интеллект, ни теоретические знания, сколь бы значительными они ни были, не смогут заменить умения общаться с людьми, навыка «взаимопроникновения», без которого жизнь – невозможна.

Постарайтесь научиться рассматривать свои индивидуальные качества не как товар, который можно «продать», а как инструмент для работы в команде. Самоуважение, конечно, «дорогого стоит», но и расположение окружающих – не безделица.

Характеристика имени Снежа

Вы хороший семьянин; вам нравятся простые удовольствия: общение с близкими, вкусная пища, уют в доме; вы также любите животных. Часто снисходительны к объектам своего обожания.

Чтобы стать гибче и быстрее реагировать на перемены, вам стоит почаще выступать публично, участвовать в различных спортивных мероприятиях и общаться с людьми, которые способны быстро думать и быстро действовать.

Ваше число – добросовестное и фундаментально-серьезное. Чтобы нормально работать, планировать действия и просто быть уверенной в своих силах, вам необходимо иметь четкие жизненные принципы и представления о добре и зле.

Вашим друзьям и коллегам придется привыкнуть к вашей особенности доходить до всего «своим путем» и вести долгие переговоры. Иначе положительный результат не будет достигнут.

Красноярск | КРАСИВОЕ И НЕОБЫЧНОЕ ИМЯ ДЛЯ ДЕВОЧКИ

Есть такая детская загадка: «Тебе дано, а люди им пользуются». Конечно же, это имя. Всегда приятно, когда при знакомстве люди обращают внимание на твоё красивое редкое имя. Особенно это касается девочек и женщин.

Красота имени – понятие субъективное, поэтому публикуем большой список необычных женских имён, чтобы было из чего выбрать.

Патриотическое имя. Есть у нас в стране несколько девочек с именем Россия, одна живёт в Нижнем Тагиле (родилась в День Независимости), а вторая – в городе Павловске Воронежской области. Собственно говоря, а почему бы и нет? Ведь есть же имя Руслана: слово «Россия» как раз происходит от древнегреческого слова ????? (Русь). Похожие недавно придуманные имена (не факт, что ими кто-то назван): Россина, Россияна, Россана, Русина, Росина и Росиль.

Необычные имена в разумных пределах. К этой категории можно отнести имена Тамара, Ева, Злата, Дарина, Антонина, Виталина, Милана, Лидия, Влада, Лика, Аделина, Алиса. С красивыми именами Юлианна и Марианна в будущем могут быть ошибки в документах, так как их можно написать с одной или двумя «н». То же самое касается имени Снежана или Снежанна.

Красивые имена латинского происхождения – Северина, Мелия, Венера, Виолетта, Юстина (Устина), Климентина или Клементина. С греческого Климентина переводится как «виноградная лоза», а с латинского – «милостивая». Среди греков и римлян также было популярно имя Стефанида или Степанида (означает «венок»). Уменьшительные формы – Степанидка, Стёпа, Стеня, Стенюша, Стеха, Стефани, Стеша и Стефи.

От греческого имени Александр («защитник») в русском языке появились женские имена Александра, Олександра, Лександра, Ляксандра. Сейчас многих девочек называют именем Алексия (сокращённо Алекса, Лекса). Под влиянием французского языка были заимствованы производные формы Александрин, Александрина, Александрия, Сандра и Сандрина. Кстати, Сандрина – итальянская уменьшительная форма имени Сандра.

Чудеса перевода. Имя Лира с греческого дословно переводится как «черепаха». Дело в том, что первые лиры (музыкальные инструменты) делали из черепахового панциря. Имя Лира дают в значении «музыкальная, с чудесным голосом». Красивое имя Индира с индийского переводится как «луна». В древнеиндийской мифологии это богиня урагана, молнии и войны, царица богов. Женское имя Дебора имеет древнееврейские корни и означает «пчела». В США это имя признано одним из самых распространённых и популярных.

Славянские имена. Красиво звучат такие славянские имена, как Велена, Мирила, Сияна, Зарина, Вишеслава, Багряна, Чеслава, Радмила, Томила, Славена, Любомира. Бела и Белана означают «белая». Нежана происходит от слова «нежная». Имя Купава означает «кувшинка, водяная лилия».

Славянское имя Веяна происходит от старославянского «вея» – «ветвь, прут», дословно – «веточка». Ивлина, Ивелина и Ивета, вероятно, произошли от названия дерева ива; Ясена, Ясеня, Ясения – от названия дерева ясень. А имя Есения, между прочим, имеет арабское, а не славянское происхождение и означает «жасмин», «красивая».

Цветочные имена. Можно поразиться, сколько славянских имён есть с корнем «цвет»: Цветая, Цветомила, Цветина, Цветана, Цветия, Цветомира, Цветелина, Цветимира, Цветимила, Цветослава, Цветислава, Цветодара, Цветалина, Цветозара.

По названию цветка, естественно, появилось красивое имя Роза. От него произошли имена Розария, Розалия, Роземари, Розана. А Розалинда – старое немецкое имя, близкая форма имени Родлинда, оно образовано двумя словами: hruom – «слава, честь» и linta – «липовый цвет».

Имя Рузанна, по некоторым данным, означает «прекрасный цветок», другие значения – «данная Богом» и «мудрая женщина». На него похоже имя Розанна, это итальянская форма имени Роксана. Имя Роксана, в свою очередь, заимствовано из персидского языка, происходит от слова «светлый, яркий, блестящий».

Список красивых женских имён можно продолжать до бесконечности. Чтобы выбрать «то самое», рассматривайте имя в сочетании с отчеством и фамилией. Будет нелепо звучать, например, «Эммануэль Егоровна», «Аорика Фёдоровна» и «Стелла Никитишна». Или «Доброслава Ашотовна», «Услада Аббасовна» и Смеяна Зигмундовна».

Не забудьте посмотреть значение и происхождение выбранного вами имени. Есть мнение, что ребёнка с необычным именем ожидает необычная судьба.

Данный материал опубликован на сайте BezFormata 11 января 2019 года,
ниже указана дата, когда материал был опубликован на сайте первоисточника!

Ma name is Snezhana n I’m proud of it.: die_laute — LiveJournal

: Пряня Трамбле (die_laute) wrote,
2008-07-08 16:10:00 Пряня Трамбле
die_laute
2008-07-08 16:10:00

вчера ночью мне в голову пришла очередная мысль: написать обо мне о моем имени. потому что я его очень люблю и не променяла бы ни на какое другое хоть и палевное оно).
Снежаной 20 с небольшим лет назад меня решил назвать папа *он у нас оч большой оригинал)))*
ну, если брать официоз и все такое, то имя «Снежана» с болгарского переводится как «снежная» или «снегурочка», что вполне логично кстате. но, не думаю, что папа об этом знал))). если учитывать тот факт, что день рождение у меня 2 января, то тоже прокатит как оправдание))).
В детстве я свое имя считала достаточно странным, потому что многие дети мне постоянно говорили, что никогда не встречали такого имени раньше и «ты будешь у меня первой знакомой Снежаной». Слышу я это до сих пор кстате.
Из-за такой уверенности, что мое имя очень оригинальное, я жутко бесилась, когда его произносили применительно не ко мне, а к какой-нибудь другой девочке. я искренне недоумевала, почему ее зовут так же, как меня?
…
Следующий пункт, по которому я откровенно офигеваю — это Почему меня называют Оксаной-Анжелой? где, мля, родственная связь? я не вижу!!!
про то, что многие люди упорно продолжают считать, что Снежана — это производное от Жанна… извините, но не сходить ли вам купить мозги?
Обычно умираю я после вопроса «А Снежана пишется с одной «н» или с двумя?». я понимаю, что после всех вышеизложенных фактов и так понятно, что этот вопрос задают 60% людей, а остальные 40% молча пишут с двумя буквами «н»… но, мля… велика вероятность, что, как минимум, я на вас наору или подумаю что-нибудь очень непечатное))).
…
В начальной и средней школе я была очень драчливым ребенком узнала не меньше 15 вариаций моего имени. дети вообще злые существа по натуре своей и над таким длинным словом как «Снежана» еще и имеющим явную направленность ко всему снежному, поглумились вдоволь. и они искренне считали, что могут меня этим обидеть))). странные они были канешн).
Беспалевным это имя не назовешь… в 90% случаев тебя очень хорошо запоминают. даже когда тебе этого совершенно не хочется. и вроде могут в лицо не запомнить, но когда говоришь «Снежана», все сразу такие «ааааа, это ТА Снежана…». и прям ащщщщ, так некомфортно становится, потому что сраду начинаешь судорожно думать «Мля, что же там такого уже наговорили?!»
…
В Омерике мое имя легко и успешно трансформировалось в Snowflake *Снежинка*. ибо не по силам было омереканчегам выговорить столь сложное для их языка сочетание звуков. они вполне удовлетворяkись моим объяснением, что «Снежинка» — это перевод моего настоящего имени. дальше в дебри этимоологии мы не углублялись.
Моим русским именем меня называли только пара друзей, которые до этого несколько месяцев терзали мой слух неправильным произношением и коверканьем звуков. остальным это так и не удалось).
…
И вообще, я неочень люблю разного рода интерпретации, потому что большая часть взрывает мой мозг.
Только одна моя подруга называет меня по фамилии, ибо всем остальным надоедает произносить слово из 11 букв))).
Моя крестная и ее дочка могут называть меня «Снежуля». в исполнении всех остальных это звучит ругательно).
Моя тетя меня называет «Снежочек». все остальные могут пользоваться этим уменьшительно-ласкательным только когда надо подлизаться.
Я предпочитаю простое Снежок *это для тех, кому даже 7 букв произнести лень))* или Снежана *можно Снежана-пижама))*…
Вот собственно и всё))). а вы что хотели?)
.

майское обострение
Я помню, когда мне было 17 лет, а Насте — 19, она как раз собиралась уезжать в Америку. Я тогда совсем не понимала, почему она туда так хотела и…
5 вещей и явлений, за которые я не люблю Америку
Продолжая тематику постов про Америку. Всё ниже написанное — сугубо мое личное мнение, как вы понимаете. Продукты питания Тут следует поставить…
Пять историй пяти квартир
Сварила я себе кофе и решила рассказать вам про то, как часто и почему я меняла съемные квартиры в Америке. Сразу предупрежу: всего их было 5.…

Photo

Hint http://pics.livejournal.com/igrick/pic/000r1edq

Как правильно писать имя Снежана или Снежанна?

Как правильно писать имя Снежана или Снежана?

Имя Снежана пишется с одним H, потому что это имя не образовано от другого женского имени Жанна, в котором традиционно пишутся двойные согласные. Происхождение имени Снежана, скорее всего, происходит от существительного Снежный-Снежный.
Хотя, встречал владельцев по фамилии Снежанн, и тут видимо главное еще и желание родителей.
В других славянских языках это имя также часто встречается, и нигде нет официальной формы этого имени с удвоенными согласными H, но есть красивые формы этого имени, такие как польская Snezka или сербская Snezha.
Если возникает затруднение, как написано: quot; Снежанакот; или quot; Снежанаquot ;, нужно помнить, что правильным вариантом будет quot; Снежанакот; — одной буквой quot; нquot ;. Правописание имени Снежана можно проверить в словарях — с помощью двух цитат; nquot; там не встречается.
Вероятно, похожее звучание имени Жанна, где есть две буквы Н, влияет на написание имени Снежана для тех, кто не знает, как оно пишется правильно. Обычно это имя встречается с одной буквой Н, а не с двумя — СНЕЖАНА. Обычно, потому что как бы правильно ни было написано имя, родители могут дать своему ребенку любое имя, как Снежана, так и Снежанна. Если вы уже записали Снежанну, то вам придется писать имя именно так.
Славянское имя Снежана , на мой взгляд, значение достаточно прозрачное. Они называют тот, который белый как снег. Написано, как видите, одной буквой n. По крайней мере, ни в одном словаре-списке женских имен я не встречал другого написания.
Другое дело — еврейское имя Жанна, что означает «quot; Боже милостивый ».
На самом деле часто правильности названия просто нет. То есть родители могут назвать ребенка и Снежаной, и Снежанной.То, что написано в паспорте, правильно.
Но чаще всего зовут детей Снежаны.
Добрый день. Это имя теперь чаще встречается с одной гласной. quot; nquot; , т.е. Снежана.
Но иногда встречается второе написание имени Снежанн. И в принципе будет правильно, если будет указано при рождении ребенка.

Компромисс между ликвидностью и прибыльностью: эмпирическое исследование фармацевтического сектора в Республике Северная Македония

Ключевые слова:

Коэффициент текущей ликвидности, коэффициент быстрой ликвидности, коэффициент денежной наличности, рентабельность активов, рентабельность собственного капитала, фармацевтические компании

Индуцированное искривлением изгнание пучков актомиозина во время цитокинетического сокращения кольца

[Примечание редакции: ответы автора на первый раунд рецензирования приводятся ниже.]

Рецензент № 1:

[…]

1) Хотя авторы действительно демонстрируют это явление в самых разных контекстах, включая два разных вида Schizosaccharomyces, разные метки, интактные клетки, сферопласты, клеточные призраки, при просмотре этих изображений поразительно, что это не наблюдалось ранее во всех обширная работа по цитокинезу S. pombe, особенно потому, что исследователи в последние годы довольно часто визуализируют цитокинез на лицо. В самом деле, анонимные просмотры с похожей / идентичной меткой (Rlc1), похоже, не демонстрируют этого поведения изгнания (PMID 25355954).Кроме того, некоторые, но не все эксперименты, описанные в этой статье, были выполнены с LifeAct, который может вызвать скручивание нитей. Чтобы гарантировать, что этот феномен является общим, устойчивым и присущим сократительному кольцу, было бы важно визуализировать доказательства этого поведения в интактных клетках. Лучше всего исправить LifeAct-GFP, Rlc1-GFP и немеченые клетки как S. pombe, так и S. japonicus и окрашивать их фаллоидином. Было бы критически важно обнаружить эти экструдированные филаменты в клетках, которые не экспрессируют флуоресцентный белок (выполнение эксперимента с FP позволит авторам оценить, что эти пучки могут быть сохранены и помечены).

Мы согласны с рецензентом 1 в том, что изгнание связки, о котором мы сообщаем здесь, не было очевидным в лабораторной статье Фреда Чанга (Zhou et al: PMID 25355954). Однако недавно (пока наша статья находилась на рассмотрении / пересмотре) аналогичное явление изгнания было замечено в клетках S. pombe в статье группы Дэниела Ривелина (Wollrab et al: PMID 27363521), хотя они не характеризовали это изгнание связки. явление. Скорее они сосредоточились на другом аспекте динамики актомиозинового кольца.

Как было предложено рецензентом 1, мы выполнили фиксацию формальдегидом немаркированных клеток и сферопластов дикого типа, а также клеток и сферопластов дикого типа, экспрессирующих LifeAct-GFP или Rlc1p-GFP, в обоих S. japonicus и S. pombe (чтобы гарантировать, что связанные с кольцом пучки, наблюдаемые в нашем исследовании, не были артефактом LifeAct-GFP или Rlc1p-GFP). После окрашивания структур актина конъюгированным с родамином фаллоидином в этих фиксированных образцах мы смогли наблюдать пучки актина, связанные с сокращающимися кольцами актомиозина, в том числе в немаркированных клетках дикого типа.Мы включили эти изображения в Рисунок 1 — дополнение к рисунку 1A и 1B. Этот эксперимент четко установил, что пучки, изгнанные во время сокращения кольца, не были артефактом использования ненативных флуоресцентных маркеров, таких как LifeAct-GFP или Rlc1p-GFP.

Рецензент № 2:

[…]

Хотя модель, предложенная авторами, интригует и может расширить наше понимание механизма замыкания сократительного кольца, в ее нынешней форме рукопись не поддерживает многие утверждения авторов и требует значительных исправлений и улучшений, прежде чем подходит для публикации в eLife.

Как правило, большая часть данных плохо аннотирована на рисунке, в легенде рисунка, в тексте или во всех трех местах. Некоторые данные также противоречат выводам авторов или не имеют количественной оценки, подтверждающей выводы. Ниже приводится список комментариев в хронологическом порядке. Я не могу предсказать, будет ли редакция пригодна для публикации, пока эти пункты не будут рассмотрены.

Благодарим рецензента 2 за подробные комментарии.Мы тщательно просмотрели и повторно аннотировали рисунки, а также переписали / расширили легенды к рисункам, основной текст, а также Материалы и методы. Мы считаем, что эти изменения улучшат ясность и точность представления.

1) Многие графики, представленные в этой рукописи, содержат обозначение оси относительной интенсивности (AU) без какого-либо упоминания того, к чему нормализована интенсивность. Обычно, когда относительные значения показаны на графике, один из представленных наборов данных имеет среднее значение 1 и, таким образом, указывает на то, что это контрольная точка.Это не относится ни к одному из графиков (неполный список затронутых рисунков: Рисунок 1 — дополнение к рисунку 1C, Рисунок 1 — приложение к рисунку 1F, Рисунок 3C, Рисунок 3D). Обозначения цифр, в общем, нуждаются в улучшении. «B.r. and s.r.» не являются подходящими сокращениями — написание «большой и маленький» было бы адекватным и гораздо менее обременительным для читателя. Изображенный белок всегда должен быть частью записи изображения. Полосы спектра должны быть помечены на рисунке.

Мы благодарим рецензента 2 за указание неправильной метки оси.К сожалению, мы ошиблись в выборе неправильной терминологии. Рецензент прав в том, что это не относительные единицы, а грубая интенсивность флуоресценции описанных белков. Мы заменили все неправильные метки оси, указав идентичность измеренного белка (например, интенсивность актина). Все микрофотографии помечены отображаемым белком, а полосы спектра / калибровки также включены в микрофотографии в текущей рукописи. Сокращения «б.р. и с.р. » были заменены словами «большие и малые», как предлагалось.

2) Данные, представленные на верхней и нижней панелях рисунка 1 — дополнение к рисунку 1D, не соответствуют друг другу. Нижняя панель показывает резкое снижение флуоресценции в кольце с течением времени, в то время как уровни кольцевой флуоресценции в верхней части, кажется, меняются очень мало. Верхняя серия насыщена? Какой из них представляет правильно отображенную кольцевую динамику?

Несоответствие верхней и нижней панелей на предыдущем рисунке 1 — добавление к рисунку 1D было связано с неудачной и ошибочной заменой панели, исправленной с помощью отбеливателя, на панель без исправлений (мы создали обе версии во время подготовки рукописи).Теперь мы показываем соответствующие микрофотографии с поправкой на отбеливатель на верхней и нижней панелях, которые демонстрируют феномен изгнания пачки даже лучше, чем в исходной рукописи (показанной на Рисунке 1 — добавление к рисунку 1F в измененной рукописи).

3) В чем разница между рис. 1 — дополнением к рисунку 1С и 1F? 1C показывает 3-кратное уменьшение интенсивности флуоресценции, в то время как интенсивности на Рисунке 1 — дополнении к рисунку 1F практически не отличаются. (Как общий актин определяется и отличается от актина в кольце на рисунке 1 — рисунок в приложении 1?) Фактически, утверждение, что существует значительная разница между маленькими и большими кольцами в 1F, в лучшем случае неубедительно, поскольку разница минимальна и может хорошо объясняется несколькими внешними данными.

Предыдущий рисунок 1 — приложение к рисунку 1С показало интенсивность актина, присутствующего в кольце (исключая связанные с кольцом актиновые связки) в анализе. Предыдущий рисунок 1 — приложение к рисунку 1F показывает объединенную интенсивность актина (общий актин) из колец и связанных пучков. Обратите внимание, что Рисунок 1 — дополнение к рисунку 1C и 1F теперь является Рисунок 1 — приложение к рисунку 1H и 1I в текущей рукописи.

Для измерения суммарной интенсивности флуоресценции актина проницаемые сферопласты окрашивали CF633-фаллоидином для мечения структур актина.Общий актин был измерен путем рисования квадрата, покрывающего актомиозиновое кольцо и связанные с ним пучки как интересующую область, тогда как связанный с кольцом актин был измерен путем рисования линии по окружности кольца без включения связанных с кольцом пучков в качестве области -представляет интерес. Эти подробности приведены в соответствующих пояснениях к рисунку.

На предыдущем рисунке 1 — добавлении к рисунку 1F мы не заявляли о каких-либо различиях между общим актином в большом и маленьком кольцах. Скорее, основываясь на представленной статистике, мы утверждали, что они были сопоставимой интенсивности (как рефери соглашается с его / ее собственным анализом).Приносим свои извинения за то, что это было запутанно описано. Сейчас это явно переписано.

4) Следующий вывод не подтверждается представленными данными: «Cdc8p, белок IQGAP Rng2p и белок F-BAR Cdc15p также присутствовали в связках актина, связанных с сокращающимися кольцами (Рисунок 1 — рисунок в приложении 1G), что позволяет предположить, что связки, связанные с сокращением актомиозиновых колец, означают разборку всего кольца как единого целого «. Все, что показано, это то, что комплекты содержат эти компоненты.Неясно, были ли они частью разборного кольца или просто связаны с нитями после изгнания. В том же направлении авторы наблюдают двунаправленное движение миозина в изгнанных пучках. Наблюдается ли такое поведение на ринге? Если нет, разве это не означает, что эти волокна структурно отличаются от волокон в кольце?

Мы выполнили покадровую микроскопию, чтобы задокументировать динамику двух цитокинетических кольцевых белков: GFP-Rng2p и Cdc15p-GFP (на рисунке 2B), в дополнение к Rlc1p-GFP, который был представлен в исходной заявке.В соответствии с нашим первоначальным описанием из отдельных изображений, эти белки, как было установлено, связаны с изгнанным / изгнанным пучком в сжимающихся кольцах с использованием покадровой микроскопии (представлено в исправленной рукописи, рис. 2В). Несмотря на это, мы смягчили утверждение (по причинам, описанным в ответе на № 7 ниже), что «пучки, связанные с сокращением актомиозиновых колец, означают разборку всего кольца как единого целого», заявив, что несколько белков цитокинетического кольца связаны с изгнанием / изгнанием пучков в живых клетках и обсуждали это в рукописи (Результаты и обсуждение, десятый абзац).

Мы удалили данные, показывающие двунаправленные движения Rlc1p-GFP на исключенных связках, поскольку, по нашему мнению, они менее важны для нашего исследования, описывающего изгнание пучков. Отчасти это также связано с предложением редакции удалить данные, не являющиеся центральными в нашей рукописи. Тем не менее, мы смогли обнаружить кластеры, движущиеся по кольцу, хотя этот момент был лучше описан в недавней статье Дэниела Ривелина и его коллег, которая была опубликована (Woolrab et al; PMID 27363521), когда наша статья находилась на рассмотрении / пересмотре.

5) Двухфазный характер скорости замыкания кольца представляется незначительным и плохо обоснованным наблюдением, поскольку вполне возможно, что изгнание начинается раньше, но волокна короткие и поэтому не обнаруживаются. На мой взгляд, действительно интересным наблюдением является взаимосвязь между периметром кольца и длиной пучка. Похоже, что в фазе 2 существует довольно хорошая корреляция, предполагающая, что изгнание является компенсирующим механизмом для уменьшения размера кольца.Однако количественная оценка этого на Рисунке 1F сбивает с толку и противоречит. Какие единицы на графиках? Похоже, что общая длина пучков больше периметра кольца (максимальное значение 58 против 28), но T.I. + периметр меньше одного периметра? Кроме того, двухфазное поведение интенсивности кольца (постоянная в фазе 1, убывающая в фазе 2) дополнительно подтвердило бы эту двухфазную концепцию.

Мы удалили описание поведения двухфазного сжатия кольца в текущей рукописи, чтобы упростить и сосредоточить внимание на главном моменте, заключающемся в том, что разборка кольца происходит в значительной степени за счет выталкивания пучка.Графики были обновлены с использованием соответствующих единиц (рис. 2E). Мы показываем отдельные графики на рисунке 2E без вставок, чтобы точки данных были более четкими.

Спасибо Reviewer 2 за указание на запутанные точки данных, то есть общая длина пучка + периметр кольца в суженных кольцах меньше, чем начальный периметр кольца. Мы снова исследовали график и обнаружили, что верхний предел для оси Y (вставка графика 3 ^rd в нашей ранее представленной рукописи), к сожалению, был ошибочно установлен на более низкое значение, что устранило некоторые важные моменты.Мы исправили эту ошибку, и пересмотренный график полностью подтверждает сделанные нами выводы (рис. 3Ev).

6) Следующее утверждение не подтверждается представленными данными: «Эти эксперименты показали, что потеря функции тестируемых белков актомиозинового кольца не влияет на время или способность этих клеток изгонять пучки актомиозина во время сокращения кольца». Все, что показано, — это два изображения для каждого условия, показывающие, что маленькие кольца имеют пучки, но количественная оценка не предоставляется.Все, что можно сделать из этого, — это то, что ни один из этих белков не важен для образования этих пучков. А как насчет кинетики, количества пучков, длины или динамики? Учитывая количество избыточности в регуляции цитокинеза, неудивительно, если какое-либо одно возмущение не отменяет полностью формирование пучков, но рассматриваемый белок все еще может вносить вклад в формирование пучков и их динамику.

Мы удалили этот раздел, посвященный анализу мутантов, поскольку эти эксперименты относятся к S.pombe , тогда как подавляющее большинство исследований посвящено S. japonicus . Кроме того, как указывает рецензент, хотя наши данные наводят на мысль, они не являются окончательными, что требует генерации большого количества двойных и тройных мутантов в S. pombe и, что особенно важно, генерации многих одиночных мутантов у S. japonicus. , все из которых выходят за рамки данного исследования.

7) При создании клеточных призраков выясняется, что rlc1p-gfp больше не связан с пучками актина.Разве это не очевидно из представленного изображения или это означает, что миозин теряется из пучка?

Нам удалось обнаружить Rlc1p, Cdc15p, Rng2p и F-актин в изгнанных пучках в клетках и сферопластах, но только F-актин был четко обнаружен в изгнанных пучках в клеточных призраках. Хотя причины этого в настоящее время неясны, вполне вероятно, что кольцевые белки подвергаются постоянному обмену в вытесненных пучках актина (как они это делают в актомиозиновых кольцах) в клетках и сферопластах, в которых имеется постоянный запас молекулярно переполненного цитозоля, тогда как это происходит. недоступно в клетках призраков.Альтернативно, молекулярная скученность сама по себе может помочь удерживать кольцевые белки на актиновых связках, тогда как в отсутствие такой скученности кольцевые белки могут быть потеряны из актиновых пучков. Мы обсудили это в отредактированной рукописи («Результаты и обсуждение», одиннадцатый абзац).

8) Как измеряется общая интенсивность актина в экспериментах с призраками клеток? Просто сумма интенсивностей на кольце и нитях или общая флуоресценция во всем поле зрения? Я предполагаю, что Cdc8p — это средство управления загрузкой для вестерн-блотов, но это должно быть явно указано в тексте.Какова количественная оценка сравнения вестерн-блоттинга? Уровень супернатанта до гранул, контроль загрузки мономеров актина, филаментов? Похоже, что большая часть актина в препарате является мономерной, так что значительное уменьшение нитчатого актина не может быть легко обнаружено по изменениям мономерного актина.

Для измерения суммарной интенсивности флуоресценции актина у призраков клеток их окрашивали CF633-фаллоидином для мечения структур актина. Общую интенсивность актина измеряли путем рисования квадрата, покрывающего актомиозиновое кольцо и связанные с ним пучки в качестве интересующей области, тогда как связанный с кольцом актин измерялся путем рисования линии по окружности кольца без включения связанных с кольцом пучков в качестве интересующий регион.Эти подробности приведены в соответствующих пояснениях к рисунку.

Вестерн-блоттинг сравнивает актин и актин-ассоциированный белок (Cdc8p-тропомиозин) в супернатанте и осадке. Cdc8p не использовался в качестве контроля загрузки. Мы изменили обозначение оси на «фракция супернатанта». Эту фракцию рассчитывают путем деления интенсивности полос белка в дорожках надосадочной жидкости на суммарную интенсивность полос дорожек надосадочной жидкости и дорожек с осадком (фракция = интенсивность надосадочной жидкости / (интенсивность надосадочной жидкости + интенсивность осадка).Мы расширили описания количественной оценки интенсивности полос белка в разделе «Материалы и методы» текущей рукописи.

9) Авторы утверждают, что изгнание зависит от кривизны кольца в несжатых ячейках. Представленных данных недостаточно для подтверждения этого вывода. Все, что я вижу на рисунке 4A, — это картинка. Никаких количественных данных, за исключением произвольного значения 68% чего-либо, без объяснения того, что считается высокой кривизной. Фактически, на основании представленных данных было бы разумно сделать вывод, что высокая кривизна не является существенной для изгнания, поскольку большая часть волокон формируется в областях «низкой» кривизны (32%).Фактически, максимальное изгнание, по-видимому, происходит при промежуточных изгибах, а не при высокой кривизне, а небольшие кольца с высокой кривизной, по-видимому, имеют меньше случаев изгнания.

Данные, подтверждающие вывод о том, что изгнание зависит от кривизны кольца, были / представлены на рисунке 4A в исходной и исправленной рукописи. В репрезентативном фильме, показанном (n = 11) на фиг. 4A, удаленные пучки становятся видимыми с ~ 60-секундной временной точки, и с течением времени и увеличением кривизны количество удаленных пучков увеличивается.Мы обнаружили, что хотя кольца могут начинаться с кривизны (1 / радиус) даже меньше 0,4 мкм _-1 (соответствует диаметру кольца> 5 мкм в сферопластах), средняя кривизна, при которой пучки начинают выталкиваться, составляет ~ 1,1 мкм _-1 (соответствует диаметру кольца ~ 2 мкм). Учитывая, что изгнание пучка наблюдается только после значительного уменьшения диаметра кольца, мы полагаем, что наши данные решительно подтверждают точку зрения, что изгнанию пучка в несжатом кольце способствует увеличенная кривизна.Затем мы проверили эту гипотезу с помощью эксперимента по сжатию сферопластов.

Приносим свои извинения за запутанное описание рисунка 4 — дополнение к рисунку 1A. На этой панели мы видим частично сжатое кольцо в клетке-призраке. Кольца в клетках-призраках не подвергаются симметричному сжатию. Скорее они претерпевают нерегулярное сокращение с участками с острыми краями. На этом рисунке мы указывали, что даже внутри изогнутого и сжатого кольца в клетке-призраке ~ 68% актиновых пучков изгоняются из областей, где кольцо изогнуто.Другими словами, все кольцо имеет повышенную кривизну из-за частичного сжатия, но почти 68% кабелей находятся преимущественно в областях, в которых кольца изогнуты, что означает, что кольца имеют еще более увеличенную локальную кривизну. Мы не смогли выполнить анализ кривизны сжимающихся изолированных колец в клеточных призраках, потому что кольца не сжимаются на плоской плоскости x-y. Плохое разрешение по оси Z влияет на точность анализа кривизны. Мы приняли меры предосторожности, чтобы не переоценить это число, поэтому 68% — это консервативное значение этой количественной оценки.

Вместе, рисунок 4 и рисунок 4 — приложение к рисунку 1, устанавливают, что изгнанию пучка способствует увеличенная кривизна кольца даже в несжатых клетках.

10) Описание экспериментальных деталей в разделе «Материалы и методы» требует существенной доработки. Только один пример: «Если не указано иное, все изображения вращающихся дисков были показаны в виде двухмерных проекций максимальной / суммарной интенсивности». Который из них? Существует критическая разница между суммарным и максимальным прогнозом.Что авторы подразумевают под 2D-проекцией? Имеются в виду Z-проекция?

Мы полностью осознаем, что прогнозы максимальной и суммарной интенсивности сильно различаются. Приносим свои извинения за то, что не прояснили этот момент в оригинальной рукописи. Это было полностью исправлено в отредактированной рукописи. Мы четко указали, показывает ли изображение максимальную интенсивность или суммарную интенсивность, в разделе «Методы», который разъясняет панели, в которых использовалась максимальная интенсивность, и те, в которых использовалась суммарная интенсивность.Рефери прав в том, что мы используем Z-проекцию, чтобы показать двумерное изображение в плоскости X-Y. Теперь это исправлено на «проецирование по оси Z».

[Примечание редакции: ответы автора на повторную рецензию приводятся ниже.]

Авторы внесли значительные изменения в свою рукопись, в которой документируется, что во время цитокинеза пучки актина с ассоциированными с ним связывающими белками изгоняются из сжимающего сократительного кольца, особенно когда оно достигает малых диаметров.Авторы убедительно доказывают, что это обычное явление и что он представляет собой механизм, с помощью которого значительная часть актина удаляется из кольца.

Но есть некоторые проблемы, которые необходимо решить до принятия, как указано ниже:

Данные, представленные здесь, показывают, что когда кольцо сжимается с периметра от ~ 26 мкм до ~ 13 мкм, наблюдается относительно небольшое количество пучков, несмотря на то, что ~ половина f-актина теряется во время этого первого периода сжатия.Из этого открытия можно сделать три вывода. Во-первых, это указывает на то, что на ранних стадиях «классическая» разборка, вероятно, ответственна за потерю актина и ABPs. Во-вторых, если только ~ 1/3 актина не теряется в результате экструзии на этих ранних стадиях, значение 68% от общей потери колец при экструзии кажется довольно высоким (решение этой проблемы, по-видимому, состоит в том, что это значение рассчитывается для колец, которые имеют уже значительно суженное — кольцо диаметром 3,5 мкм не является типичным ранним кольцом, другие данные в рукописи указывают, что раннее кольцо имеет диаметр ~ 8 мкм).Таким образом, этот расчет несколько вводит в заблуждение. В-третьих, в рукописи следует обсудить, как эти два процесса могут работать вместе во время сужения кольца.

Мы внимательно прочитали этот комментарий и нашу рукопись и не понимаем, как рецензент пришел к тому, что ~ половина F-актина была потеряна в течение этого первого периода сжатия. Мы выбрали первые кольца диаметром ~ 3,5 мкм, поскольку в других экспериментах на рис. 2С мы наблюдали пучки только тогда, когда кольца достигали диаметра ~ 2.5 мкм. Поскольку цель эксперимента, предложенного рецензентом 1, состояла в том, чтобы оценить долю ассоциированного с кольцом актина, потерянного в результате изгнания пучка, начальный диаметр ~ 3,5 мкм казался хорошей отправной точкой. Поэтому мы не считаем, что представленные расчеты вводят в заблуждение. Что касается вопроса о том, теряется ли актин также посредством других «классических» путей разборки, это интересный и открытый вопрос. Дальнейший анализ с использованием более совершенных зондов для актинового цитоскелета будет необходим для полного рассмотрения этой возможности.

По предложению этого рецензента мы упомянули эти соображения в исправленной рукописи.

https://doi.org/10.7554/eLife.21383.017

Сконструированный флавопротеин как репортер для экспрессии и очистки белков

Abstract

В этой работе мы описываем полезность флавопротеиновых доменов света, кислорода или напряжения (LOV) из фототропинов растений в качестве репортера экспрессии и функции белков. В частности, мы использовали iLOV, улучшенный и более фотостабильный вариант LOV.Была сконструирована основанная на pET плазмида для экспрессии белка, кодирующая C-концевую метку iLOV-октахистидина (His8) и сайт узнавания расщепления протеазой HRV 3C. Десять различных белков с различными субклеточными локализацией были клонированы в плазмиду, создав гибридные метки iLOV-His8. Чтобы проверить экспрессию белка и то, как iLOV можно использовать в качестве репортера, белки были экспрессированы в трех разных клеточных линиях, в четырех разных средах для культивирования, при двух разных температурах. Чтобы установить, может ли присутствие тега iLOV влиять на функциональность, один из белков, EspG, был сверхэкспрессирован и очищен.EspG представляет собой «эффекторный» белок, обычно продуцируемый энтерогеморрагическими штаммами E. coli и «вводимый» в клетки-хозяева через T3SS. Мы протестировали функциональность слияния EspG-iLOV, выполнив функциональные исследования EspG в клетках-хозяевах млекопитающих. Когда EspG-iLOV был микроинъектирован в клетку-хозяин, аппарат Гольджи был полностью разрушен, как это ранее наблюдалось для EspG.

Образец цитирования: Gawthorne JA, Reddick LE, Akpunarlieva SN, Beckham KSH, Christie JM, Alto NM, et al.(2012) Выразите свою любовь: сконструированный флавопротеин как репортер для экспрессии и очистки белков. PLoS ONE 7 (12):
e52962.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0052962

Редактор: Роберт В. Соболь,
Университет Питтсбурга, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 05.10.2012; Одобрена: 26 ноября 2012 г .; Опубликован: 27 декабря 2012 г.

Авторские права: © 2012 Gawthorne et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Работа была поддержана грантом Исследовательского совета биотехнологии и биологических наук (BBSRC) для AJR и MG (BB / G011389 / 1) и BBSRC Tools and Development Fund (BB / H023518 / 1) для AJR и JMC. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Д-р Эндрю Дж. Роу является членом редакционной коллегии PLOS ONE. Это не влияет на соблюдение авторами всех политик PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Введение

Сверхэкспрессия рекомбинантных белков, будучи обычным явлением, все еще остается узким местом в биохимии и структурной биологии. Хотя многие белки легко сверхэкспрессируются в количествах, подходящих как для биохимических, так и для структурных исследований, часто требуется скрининг на оптимальные условия экспрессии для максимизации выхода.Возможность быстро определить, экспрессируется ли белок в определенных условиях, не полагаясь на более традиционные методы определения экспрессии белка, такие как вестерн-блоттинг целого клеточного лизата или частично очищенных белков, является большим подспорьем в исследованиях экспрессии с высокой пропускной способностью (HTP). . В этом отношении флуоресцентные маркеры, такие как зеленый флуоресцентный белок (GFP) и его производные, были использованы с большим успехом [1], [2], [3], [4].

Флуоресцентные белки обладают большим потенциалом в качестве эффективных и простых в использовании генетически кодируемых маркеров для экспрессии и очистки белков.Количество публикаций, в которых используются флуоресцентные белки для этой цели, неуклонно возрастает (см. Обзор [5]). Недавним примером является новый инфракрасный белок IFP и его использование в скрининге экспрессии HTP растительных и грибковых белков в Escherichia coli [6]. Хотя текущий диапазон флуоресцентных белков покрывает почти весь видимый спектр, GFP остается популярным выбором из-за времени созревания, яркости и фотостабильности [7]. Однако GFP подходит не для всех приложений из-за своего размера (27 кДа) и структуры (11-витой β-цилиндр) и зависимости от аэробной среды для флуоресценции.Более того, GFP не сворачивается правильно при нацеливании на периплазму E. coli сигнальным пептидом Sec-translocon [8]. Таким образом, существует значительный интерес к разработке альтернативных флуорофоров на основе белков, которые могут использоваться при более сложных требованиях к экспрессии HTP, таких как условия гипоксии.

Одним из альтернативных репортеров является флавопротеиновый домен, воспринимающий свет, кислород или напряжение (LOV), из растительных фототропинов, которые флуоресцируют в той же части спектра, что и GFP, при возбуждении синим светом [9].Флавиновый хромофор LOV-домена также придает ему желтый цвет, который можно удобно использовать для мониторинга очистки белка [10]. Стратегии молекулярной эволюции уже применялись для улучшения флуоресцентных свойств домена LOV и повышения его жизнеспособности как флуоресцентного репортера [11] — [12]. Флуоресцентные белки на основе LOV особенно полезны, поскольку их флуоресценция не зависит от присутствия кислорода [13], что облегчает их использование в анаэробной среде.Более того, для мониторинга флуоресценции LOV не требуется никаких вложений в специализированный микроскоп, поскольку его спектральные свойства перекрываются со свойствами GFP [11].

Здесь мы представляем использование iLOV-tag [11] [10] в качестве альтернативной экспрессии, сообщающей о флуорофоре, и описываем дизайн новой конструкции, кодирующей C-концевой iLOV-октахистидин (His ₈) -tag. Его небольшой размер (~ 11 кДа) делает метку iLOV-His ₈ идеальной для мониторинга сверхэкспрессии и очистки белка.Конструкция включает сайт узнавания расщепления протеазой HRV 3C, расположенный между представляющим интерес белком и меткой iLOV-His ₈, позволяющей удалить флуоресцентный домен.

Для тестирования конструкции было закодировано 10 различных белков с различным субклеточным расположением, слитых с тегом iLOV-His ₈ (Таблица 1). Белки экспрессировали в трех разных клеточных линиях, в четырех разных культуральных средах при двух разных температурах. Функциональность сайта расщепления была подтверждена сверхэкспрессией белка P3 (AdhE-D2-iLOV) с последующей очисткой и расщеплением с использованием меченной His протеазы HRV 3C.

Чтобы установить, может ли присутствие тега iLOV-His ₈ влиять на функциональность, белок P6 (EspG-iLOV) был сверхэкспрессирован и очищен. Мы протестировали слияние EspG-iLOV, повторив функциональные исследования EspG в клетках-хозяевах млекопитающих, как описано Seleyunin et al. , показавший нарушение работы аппарата Гольджи [14] — [15].

В этом исследовании мы демонстрируем использование iLOV как нового инструмента для измерения экспрессии белков с использованием HTP.Мы описываем использование iLOV-tag в качестве репортера для экспрессии белков и очистки белков, подтверждаем функциональность нашей конструкции и подробно описываем рабочий процесс для измерения экспрессии с помощью этой системы. Кроме того, мы тестируем функциональность, используя эффекторный белок, слитый с iLOV, и показываем, что эффектор активен после микроинъекции в эукариотические клетки.

Материалы и методы

Клонирование и конструирование

Чтобы обеспечить полный контроль над генетической последовательностью, ДНК 2.0 (http://www.dna20.com) был использован для синтеза плазмиды pET-iLOV-y haO , содержащей ген yhaO из Escherichia coli TUV-930, промотор T7, сайт протеазы C3 последовательность и область, кодирующая домен iLOV [11] [10]. Ген y haO фланкирован сайтами рестрикции Nco I, позволяющими вырезать ген и позволяющими клонирование в рамке считывания других представляющих интерес генов в линеаризованный вектор pET-iLOV. Использование генного синтеза также позволило оптимизировать кодоны гена iLOV для максимизации потенциальной экспрессии в E.coli .

Мишени были выбраны так, чтобы они представляли как можно более дисперсную группу прокариотических белков, представленных белками, обычно расположенными в цитозоле, внутренней мембране и периплазме. Кроме того, были включены белки, которые обычно секретируются через T3SS (таблица 1). Однако все растворимые белки были клонированы без их родственной сигнальной последовательности, чтобы усилить удерживание в цитозоле. Каждый ген амплифицировали с помощью полимеразы горячего старта KOD (Promega) с использованием праймеров, приведенных в таблице S1.Реакции очищали с использованием набора для очистки Qiagen PCR, расщепляли либо Nco I, либо Pci I (New England Biolabs) и снова очищали. Очищенные продукты ПЦР и очищенный линеаризованный вектор pET-iLOV лигировали в стандартных условиях. Лигированием трансформировали химически компетентные клетки Top10 (Invitrogen), и полученные плазмиды очищали с использованием мини-препаративного набора Qiagen. Новые конструкции были подтверждены ПЦР и секвенированием. Плазмиды, полученные в ходе исследования, подробно описаны в таблице S1.

Высокопроизводительный тест на экспрессию флуоресцентного белка

Выражение с высокой пропускной способностью было изменено на основе ранее опубликованных протоколов [16]. Вкратце, 10 белков были сверхэкспрессированы в 3 штаммах бактерий, экспрессирующих E. coli ; C41 (λDE3), BL21 (λDE3) pLysS и Rosetta (λDE3) pLysS. Каждый бактериальный штамм выращивали в 4 мл культур минимальных сред LB, TB, 2YT или M9 в дублированных 48-луночных блоках с глубокими лунками (DWB). Штаммы бактерий и среды были выбраны, поскольку они обычно используются в современных лабораториях [17].После индукции 1 мМ изопропил-β- D -тиогалактопиранозид (IPTG) один DWB был перемещен до 25 ° C, а другой поддерживали при 37 ° C. Каждый час отбирали 100 мкл образцов и измеряли OD ₆₀₀ и интенсивность флуоресценции (длины волн излучения и возбуждения 485 и 520 нм, соответственно) с использованием планшет-ридера FLUOstar OPTIMA, BMG Labtech. После инкубации в течение ночи клетки собирали центрифугированием при 3720, g, . Осадки клеток суспендировали в 300 мкл BugBuster (Novagen) и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут для лизиса.Из лизата 20 мкл образцов наносили на нитроцеллюлозную мембрану и выполняли дот-блоттинг с использованием конъюгата His-зонд HRP (Pierce) для обнаружения присутствия His ₈-метки.

Представление данных

Тепловые карты, представляющие данные экспериментов HTP, были созданы с использованием Microsoft Excel (2003 или более поздней версии, который поддерживает приложение Visual Basics). Данные были переданы из флюоресцентного ридера в формате электронной таблицы Excel, а строки и столбцы были организованы в соответствии с требованиями.Для удобства данные были нормализованы в диапазоне от 0 до 1. Интересующая область была выделена, и было выбрано представление «контур поверхности»; масштаб оси Z можно регулировать. Тепловая карта была завершена запуском макроса (Приложение S1) в модуле VBA в Excel.

Масштабирование экспрессии и очистки

Для дальнейшего тестирования конструкции и использования iLOV в качестве маркера для очистки два белка, P3 (AdhED2-iLOV) и P6 (EspG-iLOV), были сверхэкспрессированы в BL21 (λ.DE3) pLysS и выращивали в культурах LB 2 × 500 мл. Температура после индукции составляла 25 ° C. Белки очищали в соответствии с установленными протоколами очистки [18]. Ген espG из EHEC O157: H7 был клонирован с помощью ПЦР в рамке считывания в pEGFP-C2 (Clontech), как описано ранее [15]. Для бактериальной экспрессии использовали N-концевые делеции EspG из 41 аминокислоты. Экспрессию и очистку EspGΔ42 проводили, как описано в [15].

Расщепление и разделение метки His-iLOV

Тег iLOV-His ₈ расщепляли добавлением протеазы 3C вируса носорога человека (HRV) (1 мг протеазы на 50 мг слияния P3-iLOV) к белку и смесь подвергали диализу против 20 мМ Tris pH 7.6, 50 мМ NaC, 5 мМ DTT, при 4 ° C в течение ночи. На следующий день раствор добавляли к 1 мл гранул Ni-NTA, предварительно уравновешенных в буфере для диализа. Смесь шариков с белком инкубировали в течение 1 часа, и шарики собирали медленным центрифугированием при 1000 g в течение 5 минут. Бесцветный супернатант содержал интересующий расщепленный белок. Образцы до и после расщепления наносили на 10% -ный бис-трис-полиакриламидный гель для анализа SDS-PAGE.

Тестирование функциональности EspG при слиянии с iLOV

Клетки нормальной почки крысы (NRK) выращивали до ~ 50% слияния в DMEM, 10% FBS, 1% пенициллин / стрептомицин на покровных стеклах.Микроинъекцию EspG-iLOV (0,25 мг / мл ^-1) или EspGΔ42 (0,25 мг / мл ^-1) проводили, как описано ранее, с использованием Cascade Blue (1 мг / мл ^-1) в качестве следящего красителя [19]. Клетки культивировали в течение 45 минут после микроинъекции при 37 ° C, 5% CO ₂, а затем фиксировали 3,7% формальдегидом и проводили иммуногистохимию в соответствии с общепринятыми протоколами.

Результаты

Дизайн вектора экспрессии pET-iLOV

Плазмида pET-iLOV основана на установленной и широко используемой системе экспрессии pET, «золотом стандарте» для экспрессии белка in vivo в E.coli (рисунок 1). Представляющий интерес ген клонируется под контролем сильных сигналов транскрипции и трансляции бактериофага Т7, а индукция экспрессии через IPTG позволяет интересующему белку составлять> 50% общего клеточного белка за несколько часов. Промотор содержит фланкирующие сайты связывания палиндромного оператора lac, которые приводят к 10-кратному увеличению сродства к репрессору lac in vitro по сравнению с естественным промотором [20], а последовательность Шайна-Дальгарно оптимизирована для экспрессии в E.coli .

Экспрессия белков, меченных iLOV

Уровни экспрессии белков, меченных iLOV, отслеживали ежечасно, а окончательные показания снимали на следующий день, примерно через 16 часов после индукции. Показания OD ₆₀₀ показали, что клетки росли во всех условиях среды, с лучшим ростом в TB и 2YT (самая богатая среда) и наименьшим ростом в минимальной среде M9. Температура инкубации, по-видимому, оказывает специфический эффект на белок и клеточную линию, поскольку некоторые условия дают более высокие показания флуоресценции при 25 ° C (например,грамм. P6 и P7 в клетках C41 или pLysS), тогда как белки P1 – P3 дают более высокие показания флуоресценции при 37 ° C. Эти результаты предполагают, что температура, клеточная линия и среда являются параметрами, которые следует проверять при приближении к новому белку. Чтобы подчеркнуть успешную экспрессию белков, меченных iLOV, значения интенсивности флуоресценции в конечной точке представлены в виде тепловой карты (рис. 2). Большинство конструкций продуцировало флуоресцирующий белок по крайней мере в одном состоянии (8 из 10). Чтобы убедиться, что флуоресценция точно отражает экспрессию полноразмерного слитого белка, мы проанализировали P3 (AdhED2-iLOV) после индукции добавлением IPTG.Вестерн-блоттинг с использованием антитела против iLOV выявил полосу 56 кДа, соответствующую полноразмерному P3 (фиг. 3). При вестерн-блоттинге продуктов распада не наблюдалось. Флуоресценцию бактерий, экспрессирующих P3, также отслеживали и оценивали в соответствующие моменты времени, которые были взяты для вестерн-анализа. Это показало четкое производство флуоресценции после индукции и хорошую корреляцию с анализом вестерн-блоттинга (рис. 3). Из двух, которые не показали какой-либо флуоресценции, один — это P8 (Nleh2-iLOV), эффекторный белок, который переносится патогенными E.coli через T3SS и P4 (YhaO-iLOV), переносчик внутренней мембраны, с С-концом, расположенным в периплазме.

Рис. 2. Тепловая карта флуоресценции iLOV для 10 белков, проанализированных в этом исследовании.

Каждое слияние белок-iLOV культивировали в четырех разных средах (LB, TB, 2YT и M9), трех разных клеточных линиях (C41, pLysS, Rosetta) и при двух разных температурах (25 ° C и 37 ° C). Пиковую флуоресценцию определяли во время кривой роста. Данные флуоресценции нормализовали от абсолютных значений флуоресценции до шкалы от 0 до 1.Область интереса была выделена, и было выбрано представление «контур поверхности».

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0052962.g002

Рис. 3. Вестерн-блоттинг с использованием антитела против iLOV показывает экспрессию полноразмерного слитого белка AdhED2-iLOV («P3», A). .

Экспрессия слитого белка AdhED2-iLOV («P3») с течением времени соответствует флуоресценции (B). AdhED2-iLOV экспрессировался в клетках E. coli C41 и контролировался уровень флуоресценции.Стрелка указывает добавление 1 мМ IPTG для индукции экспрессии.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0052962.g003

Подтверждающие детали конструкции — расщепление протеазой C3

Чтобы подтвердить, что конструкция работает, как ожидалось, P3 (AdhED2-iLOV) экспрессировали в 500 мл культуры. Белок сверхэкспрессируется хорошо, давая примерно 3 мг, и элюируется из исходной никелевой колонки в виде единственной зеленой флуоресцентной фракции (рис. 4A – B). Правильная фракция была дополнительно подтверждена УФ-освещением, указывающим на присутствие AdhED2-iLOV, P3 (рис. 4C – D).ILOV-tag отщепляли добавлением His-меченной протеазы C3 HRV, и смесь анализировали с помощью SDS-PAGE. Молекулярная масса преобладающей полосы AdhED2 снизилась примерно на 16 кДа. Высвобожденная метка iLOV-His ₈ и меченная His протеаза C3 HRV визуализируются на дне геля SDS-PAGE (рис. 4E). Второй этап Ni-NTA может быть использован для удаления метки iLOV-His ₈ и протеазы C3 для дальнейшей очистки белка.

Рис. 4. Очистку AdhE-D2-iLOV (P3) легко проследить из-за характерного желто-зеленого цвета меченого белка iLOV (A).

Очищенный AdhE-D2 без домена iLOV бесцветен (B). Очищенный P3 показывает флуоресценцию в ультрафиолетовом свете (C). Очищенный AdhE-D2 без домена iLOV, рассматриваемый в ультрафиолетовом свете (D). Домен iLOV можно легко отщепить от очищенных белков с помощью протеазы C3 (E). Дорожка M: маркеры, дорожка 1: AdhE-D2-iLOV, указана стрелкой, дорожка 2: протеаза AdhE-D2, iLOV и 3C, указанная стрелками. Тег iLOV-His ₈ был отщеплен, а размер AdhE-D2 уменьшился примерно на 16 кДа.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0052962.g004

Подтверждение незначительного влияния тега iLOV на функцию белка

EspG представляет собой «эффекторный» белок, обычно продуцируемый энтерогеморрагическими штаммами E. coli и «вводимый» в клетки-хозяева через систему секреции типа 3 (T3SS). Эффекторы проявляют дискретную активность в процессах клетки-хозяина, причем EspG, как ранее было показано, воздействует на фактор ADP-рибозилирования (ARF), GTPases и p21-активируемые киназы (PAKs) в хозяине [14].Чтобы определить, влияет ли метка iLOV-His ₈ на функциональность белка, P6 (EspG-iLOV) был сверхэкспрессирован, очищен и микроинъектирован в культивируемые клетки млекопитающих. В предыдущих исследованиях использовался EspG Δ42 (делеция 42 N-концевых остатков), помеченный eGFP, чтобы показать, что EspG Δ42 эффективно нарушает поток эукариотического комплекса Гольджи, что оценивалось путем наблюдения за тубуловезикулярными остатками Гольджи (рис. 5, панели A – C). . Сходным образом, микроинъекция полноразмерного EspG-iLOV приводит к быстрому и устойчивому разрушению Golgi с фенотипом, почти идентичным ранее показанному (Figure 5, Panel D-F).Введение одного только каскадного синего красителя не повлияло на Гольджи каким-либо существенным образом (рис. 5, панель G – I).

Фигура 5. Микроинъекция EspGΔ42 дикого типа (A), EspG-iLOV (B) и буферного контроля (C) в культивируемые клетки NRK.

Визуализируется белок Гольджи GM130, каскадный синий инъекционный краситель и слияние, как указано в вертикальных столбцах. Масштабная шкала соответствует 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0052962.g005

Обсуждение

Здесь мы сообщаем об использовании домена iLOV в качестве улучшенного маркера для экспрессии и очистки белка и его полезности при разработке надежного скрининга HTP для широкого диапазона белков, экспрессируемых в E.coli . Использование флуоресцентной метки, в частности GFP, в качестве маркера экспрессии и очистки белка является распространенным и очень полезным инструментом для производства белка для использования в биофизических или биохимических исследованиях [1], [2], [3], [4] ]. Основное преимущество iLOV по сравнению с GFP для экспрессии и очистки белка заключается в том, что флуоресценция не зависит от аэробного состояния, что позволяет правильно сворачивать флуоресцентный маркер даже в отсутствие клеточного кислорода [13], а также значительно меньшая молекулярная масса, что позволяет проводить функциональные исследования. будет проведено с использованием очищенных белков с прикрепленным iLOV-тегом.В настоящее время изучается возможность использования очищенных белков, меченных iLOV, для определения субклеточной локализации с использованием соответствующих методов микроскопии.

8 из 10 слитых белков флуоресцируют в наших испытаниях экспрессии, и они включают широкий спектр белков с различными функциями, структурами и локализацией. Высокий уровень успешности тестируемых нами конструкций свидетельствует об устойчивой природе iLOV-tag как альтернативного генетически кодируемого маркера экспрессии.Тег iLOV, связанный с меткой His ₈ для простоты очистки, имеет яркую флуоресценцию, позволяющую отслеживать экспрессию с течением времени с использованием стандартного оборудования, в данном случае флуорометра. Было показано, что пиковая флуоресценция соответствует оптимальной экспрессии тестируемой конструкции, обеспечивая хорошую основу для проведения скрининга HTP для других представляющих интерес белков. Вектор, используемый в этом исследовании, содержит C-концевую метку iLOV, однако вектор может легко включать N-концевую метку, если этого требует интересующий белок.

Одним из двух образовавшихся нефлуоресцирующих слияний был Nleh2-iLOV, эффекторный белок, транслоцированный патогенной E.coli через T3SS и YhaO-iLOV, внутренний мембранный белок с периплазматическим С-концом. Западный анализ показал, что YhaO-iLOV чрезмерно экспрессируется в некоторых условиях (данные не показаны). Отсутствие флуоресценции в этой конструкции, вероятно, вызвано тем фактом, что YhaO-iLOV вставляется в мембрану через Sec-транслокон, который транспортирует развернутый белок либо в мембрану, либо через периплазму.При разворачивании iLOV высвобождается флавин, а при повторной укладке в периплазматическом пространстве флавин становится недоступным для захвата iLOV, что эффективно предотвращает флуоресценцию. В качестве альтернативы, сложенный iLOV не позволит YhaO-iLOV правильно вставиться в мембрану и, возможно, откладывается в тельцах включения в цитоплазме. В случае Nleh2-iLOV возможно, что белку требуется его родственный шаперон для правильной укладки или, альтернативно, он может проявлять правильную укладку только при «введении» в эукариотические клетки-хозяева.Остальные белки, которые флуоресцируют, включают белок внутренней мембраны, цитозольные белки, периплазматические белки и секретируемые эффекторные белки. Следует иметь в виду, что периплазматический и эффекторный белки лишены своей ведущей последовательности и поэтому остаются в цитозоле. Это обычная стратегия сверхэкспрессии белка.

Уровень успешности наших конструкций предполагает, что iLOV будет ценным тегом для самых разных систем. Тег iLOV-His ₈ слит с интересующим геном, разделенный последовательностью, кодирующей сайт расщепления протеазой 3C, что позволяет эффективно удалять генетически кодированные теги.Фракции, содержащие iLOV-tag, слитый с интересующим белком, выглядят ярко-желтыми, и их можно отслеживать визуально на протяжении всей очистки, что позволяет быстро идентифицировать фракции, содержащие белок, без необходимости проведения вестерн-анализа. Использование вектора на основе pET позволило использовать все отмеченные положительные особенности для системы экспрессии и очистки HTP и обеспечило тщательно протестированную основу для определения полезности и функциональности нового вектора (см. Обзор [21]).Способность жестко контролировать экспрессию желаемого белка — основная особенность системы pET, которую мы хотели использовать. Таким образом, этот новый вектор будет использоваться для экспрессии широкого спектра белков в различных условиях, чтобы обеспечить максимальный выход через предложенный здесь HTP-скрининг.

Наши результаты показывают, что метка iLOV-His ₈ может быть удалена из интересующего белка, оставляя целевой белок расщепленным и в последовательности, близкой к дикому типу (добавление PWGAGGLEVLFQ остается после того, как метка была расщеплена), для разделения от тега iLOV-His ₈ и протеазы с помощью вторичной колонки Ni-NTA.Чтобы определить возможное влияние тега iLOV-His ₈ на функциональность белка, EspG-iLOV и EspGΔ42 были сверхэкспрессированы и микроинъектированы в клетки NRK. Было показано, что гетерологически экспрессированный EspG Δ42, слитый либо с GFP, либо с GST, способен разрушать Гольджи. Это наблюдаемое разрушение органелл вызвано нацеливанием EspG на GTP-связанную форму ARF1 GTPase и последующим предотвращением естественного нуклеотидного цикла [15]. Наши результаты подтверждают эти выводы и подчеркивают, что добавление домена iLOV к EspG не влияет на активность EspG in vivo .Этот результат указывает на то, что очищенные слитые белки, меченные iLOV, из вектора pET-iLOV, описанного здесь, могут быть легко очищены, доставлены в клетки-мишени и, как можно ожидать, будут действовать аналогично белку дикого типа. Хотя флуоресценция EspG-iLOV не была на достаточном уровне для обнаружения после микроинъекции, вариант EspG-eGFP также не использовался в исследовании. Однако, как показывают недавние статьи [12], разработка iLOV как нового флуорофора только начинается, и новые, более яркие и более фотостабильные варианты могут быть легко включены в наш вектор pET-iLOV по мере их разработки и тщательного тестирования.

Используемый здесь iLOV-tag демонстрирует гомологию аминокислотной последовательности с недавно опубликованным miniSOG, плавким маркером для световой и электронной микроскопии [22]. Будет ли iLOV также производить синглетный кислород, как и miniSOG, еще не определено. Однако, поскольку многие ключевые активные центры перекрываются с iLOV, существует возможность визуализации как с помощью световой, так и электронной микроскопии (ЭМ). Следовательно, возможность корреляционной EM (CLEM) белков, связанных с iLOV-tag, либо экспрессированных in vivo , либо очищенных и микроинъектированных, делает HTP-скрининг привлекательным методом скрининга экспрессии представляющих интерес белков для этой цели.Потенциальные применения очищенных белков с меткой iLOV в визуальных экспериментах широки: от анализа сложных взаимодействий хозяин-патоген до дальнейшего понимания специфических функций эукариотических клеток, применимых к важным болезненным состояниям.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AJR MG JMC NMA. Проведены эксперименты: JAG LER SNA KSB. Проанализированы данные: LER MG AJR. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: JMC. Написал статью: JAG LER JMC MG AJR.

Список литературы

1.
Дейли Д.О., Рапп М., Грансет Э., Мелен К., Дрю Д. и др. (2005) Глобальный анализ топологии протеома внутренней мембраны Escherichia coli. Наука 308: 1321–1323.
2.
Drew D, Lerch M, Kunji E, Slotboom DJ, de Gier JW (2006) Оптимизация сверхэкспрессии и очистки мембранного белка с использованием слияния GFP. Nat Методы 3: 303–313.
3.
Newstead S, Kim H, von Heijne G, Iwata S, Drew D (2007) Оптимизация сверхэкспрессии и очистки белков мембран эукариот в Saccharomyces cerevisiae на основе высокопроизводительной флуоресцентной технологии.Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 104: 13936–13941.
4.
Габриэльсен М., Кронер Ф., Блэк И., Айзекс Н. В., Роу А. Дж. И др. (2011) Высокопроизводительная идентификация условий очистки приводит к предварительным условиям кристаллизации для трех белков внутренней мембраны. Молекулярная мембранная биология 28: 445–453.
5.
Vizcaino-Caston I, Wyre C, Overton TW (2012) Флуоресцентные белки в микробной биотехнологии — новые белки и новые приложения.Biotechnol Lett 34: 175–186.
6.
Dortay H, Akula UM, Westphal C, Sittig M, Mueller-Roeber B (2011) Высокопроизводительная экспрессия белка с использованием комбинации независимого от лигирования клонирования (LIC) и обнаружения инфракрасного флуоресцентного белка (IFP). PLoS One 6: e18900.
7.
Дэвидсон М.В., Кэмпбелл Р.Э. (2009) Конструированные флуоресцентные белки: инновации и приложения. Nat Методы 6: 713–717.
8.
Feilmeier BJ, Iseminger G, Schroeder D, Webber H, Phillips GJ (2000) Зеленый флуоресцентный белок функционирует как репортер локализации белка в Escherichia coli.Журнал бактериологии 182: 4068–4076.
9.
Кристи Дж. (2007) Фототропин Рецепторы синего света. Анну Рев Завод Биол 58.
10.
Christie JM, Gawthorne J, Young G, Fraser NJ, Roe AJ (2012) LOV to BLUF: вклад флавопротеинов в оптогенетический инструментарий. Мол завод 5: 533–544.
11.
Чапман С., Фолкнер С., Кайзерли Е., Гарсия-Мата С., Савенков Е. И. и др. (2008) Фотообратимый флуоресцентный белок iLOV превосходит GFP в качестве репортера вирусной инфекции растений.Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 105: 20038–20043.
12.
Кристи Дж. М., Хитоми К., Арваи А. С., Хартфилд К. А., Метлен М. и др. (2012) Структурная настройка флуоресцентного белка iLOV для улучшения фотостабильности. J Biol Chem 287: 22295–22304.
13.
Дреппер Т., Эггерт Т., Цирколоне Ф, Хек А., Краусс У. и др. (2007) Репортерные белки для флуоресценции in vivo без кислорода. Nat Biotechnol 25: 443–445.
14.Селюнин А.С., Альто Н.М. (2011) Активация PAK бактериальным эффектором типа III EspG выявляет альтернативные механизмы регуляции пути GTPase. Малые GTPases 2: 217–221.
15.
Селюнин А.С., Саттон С.Е., Вейгеле Б.А., Реддик Л.Е., Орчард Р.С. и др. (2011) Сборка сигнального комплекса GTPase-kinase с помощью бактериального каталитического каркаса. Природа 469: 107–111.
16.
Макласки К., Габриэльсен М., Кронер Ф., Блэк И., Когделл Р. Дж. И др. (2008) Протокол высокопроизводительных методов экспрессии и очистки белков внутренней мембраны.Mol Membr Biol 25: 599–608.
17.
Graslund S, Nordlund P, Weigelt J, Hallberg BM, Bray J, et al. (2008) Производство и очистка белков. Природные методы 5: 135–146.
18.
Габриэльсен М., Зеттерстром К.Э., Ван Д., Бекхэм К.С., Элофссон М. и др. (2010) Экспрессия, очистка, кристаллизация и первоначальный рентгеноструктурный анализ тиолпероксидазы из Yersinia pseudotuberculosis. Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 66: 1606–1609.
19.Реддик Л.Е., Альто Н.М. (2012) Корреляционная световая и электронная микроскопия (CLEM) как инструмент для визуализации микроинъектированных молекул и их эукариотических субклеточных мишеней. J Vis Exp e3650.
20.
Studier FW, Moffatt BA (1986) Использование РНК-полимеразы бактериофага T7 для управления селективной высокоуровневой экспрессией клонированных генов. J Mol Biol 189: 113–130.
21.
Соренсен HP, Мортенсен К.К. (2005) Передовые генетические стратегии экспрессии рекомбинантного белка в Escherichia coli.J Biotechnol 115: 113–128.
22.
Шу X, Лев-Рам В., Деринк Т.Дж., Ци Й., Рамко Е.Б. и др. (2011) Генетически закодированная метка для коррелированной световой и электронной микроскопии интактных клеток, тканей и организмов. PLoS Biol 9: e1001041.

Спасение рекомбинантного вируса Зика из инфекционного клона кДНК и его значение для разработки вакцины in vivo

1.
Фридрих М. Дж. ВОЗ отменяет глобальную чрезвычайную ситуацию, связанную с вирусом Зика. JAMA 317 , 246 (2017).
PubMed
PubMed Central
Google Scholar

2.
Куно, Г. и Чанг, Г.-Дж. J. Полноразмерное секвенирование и геномная характеристика вирусов Багаза, Кедугу и Зика. Arch. Вирусология 152 , 687–696 (2007).
CAS
Статья
Google Scholar

3.
Musso, D. & Gubler, D. J. Zika Virus. Clin. Microbiology Rev. 29 , 487–524 (2016).
CAS
Статья
Google Scholar

4.
Авила-Перес, Г., Ногалес, А., Мартин, В., Алмазан, Ф. и Мартинес-Собридо, Л. Обратные генетические подходы для создания рекомбинантного вируса Зика. Вирусы 10 (2018).

5.
Хасан, С. С., Севвана, М., Кун, Р. Дж. И Россманн, М. Г. Структурная биология вируса Зика и других флавивирусов. Nat. Struct. & Мол. Биол. 25 , 13–20 (2018).
CAS
Статья
Google Scholar

6.
Кумар А. и др. . Вирус Зика подавляет продукцию интерферона I типа и последующую передачу сигналов. EMBO Rep. 17 , 1766–1775 (2016).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

7.
Wu, Y. и др. . Вирус Зика уклоняется от опосредованного интерфероном противовирусного ответа за счет взаимодействия нескольких неструктурных белков in vitro . Cell Discov. 3 , 17006–17006 (2017).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

8.
Xia, H. et al. . Эволюционная мутация NS1 усиливает уклонение вируса Зика от индукции интерферона хозяином. Nat. Commun. 9 , 414 (2018).
ADS
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

9.
Lescar, J. et al. . Комплекс репликации вируса денге: от репликации РНК до белок-белковых взаимодействий и уклонения от врожденного иммунитета. Adv. Exp. Med. Биол. 1062 , 115–129 (2018).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

10.
Крауэр, Ф. и др. . Инфекция, вызванная вирусом Зика, как причина врожденных аномалий головного мозга и синдрома Гийена-Барре: систематический обзор. PLoS Med. 14 , e1002203 (2017).
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

11.
Пирсон Т. и Даймонд М. С. Возникновение вируса Зика и его новые клинические синдромы. Природа 560 , 573–581 (2018).
ADS
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

12.
Oehler, E. et al. . Инфекция, вызванная вирусом Зика, осложненная синдромом Гийена-Барре — отчет о случае, Французская Полинезия, декабрь 2013 г. Euro Surveill 19 (2014).

13.
do Rosario, M. S. et al. . Синдром Гийена-Барре после заражения вирусом Зика в Бразилии. Am. J. Trop.Med. Hyg. 95 , 1157–1160 (2016).
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

14.
Стассен, Л., Армитаж, К. В., ван дер Хайде, Д. Дж., Бигли, К. В. и Френтиу, Ф. Д. Вирус Зика в мужском репродуктивном тракте. Вирусы 10 , 198 (2018).
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

15.
Цецаркин К.А. и др. . Пути распространения вируса Зика в яичках и придатках яичка мышей с иммунодефицитом. Природа . Связь 9 , 5350 (2018).
CAS
Google Scholar

16.
Цао Б., Даймонд М. С. и Майсорекар И. У. Передача вируса Зика от матери к плоду: пути и сигналы заражения. J. Исследование интерферонов и цитокинов: Off. J. Int.Soc. Interferon Cytokine Res. 37 , 287–294 (2017).
CAS
Статья
Google Scholar

17.
Майнер, Дж. Дж. и др. . Инфекция вирусом Зика во время беременности у мышей вызывает повреждение плаценты и гибель плода. Ячейка 165 , 1081–1091 (2016).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

18.
Стобарт, К. и Мур, М. Л. Обратная генетика РНК-вируса и дизайн вакцины. Вирусы 6 , 2531–2550 (2014).
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

19.
Раканиелло В. Р. и Балтимор Д. Молекулярное клонирование кДНК полиовируса и определение полной нуклеотидной последовательности вирусного генома. Proc. Natl Acad. Sci. U S Am. 78 , 4887–4891 (1981).
ADS
CAS
Статья
Google Scholar

20.
Ногалес А. и Мартинес-Собридо Л. Подходы обратной генетики для разработки вакцин против гриппа. Внутр. J. Mol. Sci. 18 , 20 (2016).
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

21.
Обри, Ф., Нугайред, А., Гулд, Э. А. и де Ламбальери, X.Обратные генетические системы флавивирусов, методы конструирования и приложения: историческая перспектива. Антивирь. Res. 114 , 67–85 (2015).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

22.
Алмазан, Ф. и др. . Обратные генетические системы коронавируса: инфекционные клоны и репликоны. Virus Res. 189 , 262–270 (2014).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

23.
Мартинес-Собридо, Л., Ченг, Б. Ю. и де ла Торре, Дж. К. Подходы обратной генетики к борьбе с аренавирусом. Methods Mol. Биол. 1403 , 313–351 (2016).
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

24.
Ортис-Риано, Э., Ченг, Б. Ю., Карлос де ла Торре, Дж. И Мартинес-Собридо, Л. Обратная генетика аренавируса для разработки вакцины. J. Gen. вирусология 94 , 1175–1188 (2013).
CAS
Статья
Google Scholar

25.
Кригер, Н., Ломанн, В. и Бартеншлагер, Р. Повышение репликации РНК вируса гепатита С с помощью адаптивных мутаций в культуре клеток. J. Virology 75 , 4614–4624 (2001).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

26.
Pietschmann, T. et al. .Производство инфекционных вирусных частиц генотипа 1b в культуре клеток и нарушение репликации усиливающих мутаций. PLOS Pathog. 5 , e1000475 (2009).
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

27.
Маркес-Хурадо, С. и др. . Замена аланина на валин в остатке 175 белка NS2A вируса Зика влияет на синтез вирусной РНК и ослабляет вирус In vivo . Вирусы 10 (2018).
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

28.
Хэнли, К. А. Палец о двух концах: как эволюция может создать или разрушить живую ослабленную вирусную вакцину. Evolution (N. Y.) 4 , 635–643 (2011).
Google Scholar

29.
Авила-Перес, Г., Парк, Х.-Г., Ногалес, А., Алмазан, Ф.И Мартинес-Собридо, Л. Спасение рекомбинантного вируса Зика из клона кДНК бактериальной искусственной хромосомы. JoVE , e59537 (2019).

30.
Ávila-Pérez, G. et al. . Естественный полиморфизм вируса Зика NS2A, ответственный за вирулентность Sci Rep . В печати (2019).

31.
Dowall, S. D. et al. . Модель восприимчивых мышей к вирусной инфекции Зика. PLoS Negl. Троп. Дис. 10 , e0004658 (2016).
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

32.
Росси, С. Л. и др. . Характеристика новой мышиной модели для изучения вируса Зика. Am. J. Trop. Med. Hyg. 94 , 1362–1369 (2016).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

33.
Моррисон, Т. Э. и Даймонд, М.S. Модели вирусной инфекции Зика на животных, патогенез и иммунитет. Дж Вирол 91 (2017).

34.
Chen, H. et al. . Бакмиды «все в одном»: эффективная стратегия обратной генетики для вакцин против вируса гриппа А. J. Virology 88 , 10013–10025 (2014).
PubMed
Статья
CAS
PubMed Central
Google Scholar

35.
Kimble, J. B. et al. .Альтернативные события реассортировки, ведущие к трансмиссивным вирусам гриппа H9N1 в модели хорьков. J. Virol. 88 , 66–71 (2014).
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

36.
Энджел М., Кимбл Дж. Б., Пена, Л., Ван, Х. и Перес, Д. Р. Отбор in vivo реассортантов вируса гриппа h2N2 на модели хорька. J. Virol. 87 , 3277–3283 (2013).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

37.
Чумаков К. М., Пауэрс Л. Б., Нунан К. Э., Ронинсон И. Б. и Левенбук И. С. Корреляция между количеством вируса с измененной нуклеотидной последовательностью и тестом на обезьянах на приемлемость пероральной полиовирусной вакцины. Proc. Natl Acad. Sci. USA 88 , 199–203 (1991).
ADS
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

38.
Хименес-Гардено, Дж. М. и др. . Идентификация механизмов, вызывающих возврат к вирулентности при ослабленном SARS-CoV для разработки генетически стабильной вакцины. PLoS Pathog. 11 , e1005215 (2015).
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

39.
Незначительный, P. Полиовирус вакцинного происхождения (ПВВП): влияние на искоренение полиомиелита. Вакцина 27 , 2649–2652 (2009).
PubMed
Статья
Google Scholar

40.
Лауринг, А.С., Джонс, Дж. О. и Андино, Р. Рационализация разработки живых аттенуированных вирусных вакцин. Nat. Biotechnol. 28 , 573–579 (2010).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

41.
Burm, R., Collignon, L., Mesalam, A. A., Meuleman, P.Модели на животных для изучения вирусной инфекции гепатита С. Фронт. Иммунол. 9 , 1032 (2018).
PubMed
PubMed Central
Статья
CAS
Google Scholar

42.
Колыхалов А.А. и др. . Передача гепатита С при внутрипеченочной инокуляции транскрибированной РНК. Наука 277 , 570–574 (1997).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

43.
Янаги М., Перселл Р. Х., Эмерсон С. У. и Бух Дж. Транскрипты одного полноразмерного клона кДНК вируса гепатита С заразны при прямой трансфекции в печень шимпанзе. Proc. Natl Acad. Sci. 94 , 8738–8743 (1997).
ADS
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

44.
Блайт, К. Дж., Маккитинг, Дж. А., Маркотриджиано, Дж. И Райс, К.М. Эффективная репликация РНК вируса гепатита С генотипа 1a в культуре клеток. J. Virol. 77 , 3181–3190 (2003).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

45.
Гарг, Х., Мехметоглу-Гурбуз, Т. и Джоши, А. Последние достижения в области вакцин против вируса Зика. Вирусы 10 (2018).

46.
Торрези, Дж., Эберт, Дж. И Пеллегрини, М. Лицензированные и клинические испытания вакцин для профилактики лихорадки денге. Хум. Вакцин. Immunother. 13 , 1059–1072 (2017).
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

47.
Раух С., Ясны Э., Шмидт К. Э. и Петч Б. Новые технологии вакцин для борьбы со вспышками болезней. Фронт. иммунология 9 , 1963 (2018).
Артикул
CAS
Google Scholar

48.
Гурунатан С., Клинман Д. М. и Седер Р. А. ДНК-вакцины: иммунология, применение и оптимизация. Annu. Rev. Immunology 18 , 927–974 (2000).
CAS
Статья
Google Scholar

49.
Ли, Дж., Арун Кумар, С., Джан, Ю. Ю. и Бишоп, К. Дж. Разработка ДНК-вакцин против инфекционных заболеваний. Acta Biomaterialia 80 , 31–47 (2018).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

50.
Бланко-Лобо, П., Ногалес, А., Родригес, Л. и Мартинес-Собридо, Л. Новые подходы к разработке живых ослабленных вакцин против гриппа. Вирусы 11 , 190 (2019).
CAS
PubMed Central
Статья
Google Scholar

51.
Minor, P. D. Живые аттенуированные вакцины: исторические успехи и текущие проблемы. Вирусология 479-480 , 379–392 (2015).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

52.
Ван К., Бойзен К., Шизуя Х., Саймон М. И. и Худ Л. Полная нуклеотидная последовательность двух поколений вектора клонирования бактериальных искусственных хромосом. Biotechniques 23 , 992–994 (1997).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

53.
Комитет Национального исследовательского совета по обновлению Руководства по использованию лаборатории, A. Сборник национальных академий: отчеты, финансируемые Национальными институтами здравоохранения.в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (изд. th) (National Academies Press (США), Национальная академия наук, Вашингтон (округ Колумбия), 2011).

54.
Родригес, Л., Ногалес, А. и Мартинес-Собридо, Л. Исследования вируса гриппа А на мышиной модели инфекции. JoVE , e55898 (2017).

55.
Baker, S. F. et al. . Защита от летального гриппа с имитацией вируса. J. virology 87 , 8591–8605 (2013).
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google Scholar

56.
Park, J.-G. и др. . Сильное ингибирование репликации вируса Зика ауринтрикарбоновой кислотой. Фронт. Microbiol. 10 , 718–718 (2019).
PubMed
PubMed Central
Статья
Google Scholar

Пожилые люди связывают узел — не надо! | Новости

Два пожилых человека из Кэбот Хауса неофициально поженились во время имитации традиционной корейской свадебной церемонии в Каботе прошлой ночью на мероприятии, организованном Global Cultural Club, группой американцев корейского происхождения, посвященной распространению и распространению корейской культуры.

Кабот-резидент Репетитор Ха Ян Ли пригласил представителей группы из Лос-Анджелеса в Кембридж для участия в церемонии, на которой Снежана Б. Златинова ’07 и Людвиг «Мэтт» Отто ’07 — которые начали встречаться после встречи во время ориентации для первокурсников — были фальшивыми замужем.

«Мы действительно хотели продемонстрировать некоторые из великих качеств корейской культуры на небольшой теплой церемонии», — сказал Ян. «Особенно после инцидента с V-Tech мы подумали, что важно напомнить людям, что наша культура — это нечто большее.”

«Ха Ян — наш любимый наставник», — сказала Златинова. «Она просто спросила нас однажды в столовой несколько месяцев назад, будем ли мы это делать, и мы были счастливы».

Но она добавила, что церемония, возможно, не была полностью неофициальной.

«Нам сказали, что это имеет обязательную юридическую силу в Корее», — сказала Златинова. «Не думаю, что Мэтту это слишком нравится».

По словам президента Global Cultural Club Мэри Ли, церемония бракосочетания состояла из полной традиционной одежды и процедур, что нечасто встречается даже в современной Корее.

«Обычно бывает вестернизированная церемония без каких-либо традиционных частей», — сказал Ли через переводчика. «Чтобы выполнить это должным образом, требуются специальные знания и подготовка, поэтому это очень редко».

Сокращенная демонстрация, прошедшая вчера вечером, не только включала многие из этих элементов, но также демонстрировала корейский танец с барабанами и корейскую мастерскую по изготовлению бумаги.

Приблизительно 40 человек присутствовали в зале на ложной свадьбе, включая членов Бостонского корейского клуба и Бостонского корейского клуба для пожилых людей, двух местных организаций, принимавших у себя группу из Лос-Анджелеса.

«Как концентратор восточноазиатских исследований, вы привлекаете много внимания к Японии и Китаю, но Корея, как правило, получает вал», — сказала аспирантка Беверли Н. Фоулкс, которая учится в Высшей школе искусств и наук.

У других были более прагматические причины появиться.

«Розыгрыш», — признался Генри Дж. Фу ’08, показывая свой билет на розыгрыш iPod. После того, как часовая свадебная церемония и чайная церемония были воссозданы, а их культурные аспекты объяснены в переводе Ли, одному из зрителей в случайном порядке был вручен iPod shuffle.

Церемония завершилась в соответствии с корейской традицией, когда жених подбросил невесту на спине, пока они делали вид, что вступают в новую совместную жизнь.

«Главное, что нужно помнить, — это когда нужно кланяться, — сказал Отто. «Это было все, что нам нужно было узнать самостоятельно».

— С сотрудником отдела кадров Сиодбхра М. Паркин можно связаться по адресу [email protected].

Применение деревьев классификации и регрессии для моделирования выходной мощности лазера на парах бромида меди Академический исследовательский доклад по «Физическим наукам»

Hindawi Publishing Corporation «Математические проблемы в инженерии», том 2013, идентификатор статьи 654845, 10 стр. Http: // dx.doi.org/10.1155/2013/654845

Исследовательская статья

Применение деревьев классификации и регрессии для моделирования выходной мощности лазера на парах бромида меди

Ильичо Петков Илиев, 1 Десислава Стоянова, Войникова, 2 и Снежана Георгиева Гочева-Илиева2

1 Физический факультет, Технический университет Софии, Филиал Пловдив, улица Цанко Джусстабанова 25, 4000 Пловдив, Болгария

2 Кафедра прикладной математики и моделирования, Пловдивский университет, улица Царя Ассена 24, 4000 Пловдив, Болгария

Переписку следует направлять Ильичо Петкову Илиеву; iliev55 @ abv.bg Поступило 11 февраля 2013 г .; Принято к печати 20 апреля 2013 г. Академический редактор: Бинь Лю

Copyright © 2013 Ильичо Петков Илиев и др. Это статья в открытом доступе, распространяемая под лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

В этом исследовании изучаются имеющиеся экспериментальные данные для лазера на парах бромида меди (CuBr-лазер), излучающего в видимой области спектра на 2 длинах волн — 510.6 и 578,2 нм. Выходная мощность лазера оценивается на основе 10 независимых входных параметров. Метод CART используется для построения дерева двоичной регрессии решений относительно выходной мощности. В случае линейной модели было достигнуто приближение 98% и 99% для модели взаимодействий между предикторами до второго порядка с относительной ошибкой менее 5%. Результирующее дерево CART учитывает, какие входные количества влияют на формирование классификационных групп и каким образом.Это позволяет оценить, какие из них важны с инженерной точки зрения для разработки и эксплуатации рассматриваемого типа лазеров, тем самым способствуя созданию и совершенствованию лазерной техники.

1. Введение

Лазеры на парах металлов, включая лазеры на меди и галогенидах меди, давно признаны обладающими уникальными свойствами и возможностями, имеющими широкую область применения [1, 2]. Они известны как самые мощные источники в видимом диапазоне (516.6–578,2 нм) с когерентным излучением и высокой сходимостью луча, генерация с высокой частотой повторения и высокой средней выходной мощностью. Этот тип устройств по-прежнему является предметом исследований в области лазерных технологий с целью повышения производительности и инноваций. Основной аспект их разработки — увеличение средней выходной мощности лазера.

В данной статье исследуется лазер на парах бромида меди, который относится к классу лазеров на парах галогенида меди. Сохраняется интерес к дальнейшему улучшению выходных характеристик этого лазера и его приложений [1, 2].Наряду с инженерным проектированием на практике широко применяется математическое моделирование (аналитическое, численное, статистическое, имитационное или другие типы) лазерных устройств. Стандартное математическое моделирование включает системы дифференциального и интегрального

уравнений, оптимизации и других математических методов, описывающих систему и позволяющих вычислять решения для процессов, происходящих в исследуемой системе, а также выполнение моделирования.Здесь наиболее широко используются кинетические модели. Они описывают частицы и процессы, происходящие в рабочей среде лазера. Существует большое количество таких публикаций по лазерам на парах металлов, в том числе по лазерам на парах бромида меди [3-5]. Хотя кинетические модели описывают основные процессы в лазерной среде и взаимодействия между частицами с помощью сотен уравнений, их общий недостаток заключается в том, что они не могут обеспечить комплексную прямую оценку выходных характеристик, таких как средняя выходная мощность, эффективность лазера и обслуживание. жизнь.Более того, результаты кинетических моделей представлены в виде расчетных числовых данных, которые требуют дополнительной компьютерной обработки.

В связи с этим в течение последних нескольких лет на основе накопленных экспериментальных данных разрабатывались и применялись статистические модели. Модели представлены в виде явных статистических соотношений, зависимостей и классификаций базовых параметров лазера. Это дает возможность

Рис. 1. Структурная схема лазерной трубки лазера на парах бромида меди; 1 — резервуары с бромидом меди, 2 — теплоизоляция активного объема, 3 — медные электроды, 4 — внутренние кольца, 5 — зеркала.

Таблица 1: Технические параметры лазера на парах бромида меди [1,6].

Характеристика Описание

Длина волны излучения Рабочий режим Частота импульсов Средняя объемная плотность мощности Измеренная температура стены

Длина импульса Средняя выходная мощность Коэффициент полезного действия (КПД лазера) Общий срок службы Энергия импульса Температура активной среды Время запуска

Конструкционные элементы

оценивают силу и форму связи между параметрами лазера.Все это позволяет направить эксперимент в сторону увеличения выходных параметров лазера и сделать предварительную оценку результатов эксперимента по моделям. Традиционные параметрические модели лазеров на парах металлов были разработаны и проанализированы в [6-10]. Использовалась многомерная регрессия с анализом главных компонентов, иерархическим кластерным анализом, факторным анализом и другими статистическими методами. Нелинейная модель выходной мощности построена в [11]. Непараметрические модели были получены с использованием метода многомерных адаптивных регрессионных сплайнов (MARS) в [6,11].В недавней статье [12] модели описывают более 98% экспериментальных данных с относительной точностью, сравнимой с точностью измерений, что позволяет предсказать выходную мощность будущих лазеров.

В этой статье другой мощный метод непараметрического моделирования — CART (деревья классификации и регрессии) — применяется к имеющимся данным для лазера на парах бромида меди. Этот метод позволяет разделить все наблюдения из рассматриваемых независимых переменных (предикторов) в невзаимодействующие группы в виде двоичного дерева в соответствии со степенью влияния на зависимую переменную, в данном случае выходную мощность лазера.

Целью данного исследования является определение влияния 10 входных характеристик лазера (подаваемая электрическая мощность, геометрическая конструкция трубки, давление неона, температура резервуара и т. Д.).

о средней выходной мощности по имеющимся данным эксперимента. Впервые мощная непараметрическая техника CART, описанная в [13,14], применяется для лазеров на парах металлов. Решаются следующие основные задачи: (i) построение дерева регрессии оптимального решения; (ii) определение адекватных линейных моделей на основе этого дерева; (iii) построение дерева независимых переменных второй степени; (iv) использование моделей для оценки известных экспериментов; (v) применение моделей для предсказания экспериментов; (vi) проверка моделей; (vii) сравнение результатов с предыдущими параметрическими и непараметрическими моделями того же типа лазера.Полученные модели описывают более 98% данных и демонстрируют отличные прогностические качества. Они используются для руководства конструкцией и проектированием новых лазеров на парах бромида меди с повышенной выходной мощностью.

Результаты получены с помощью пакета программ CART [15].

2. Предмет расследования

Лазер на парах бромида меди представляет собой улучшенную версию лазера на парах чистой меди. Это самый мощный и эффективный лазер видимого спектра, демонстрирующий высокую когерентность и сходимость лазерного луча.Мы исследуем варианты этого лазера, изобретенного и разработанного в Лаборатории лазеров на парах металлов Института физики твердого тела Георгия Надякова Болгарской академии наук, София. Первые патенты, относящиеся к этому типу лазеров, — [16,17]. Лазер на парах бромида меди — один из 12 лазерных источников, которые имеют широкий спектр применения и коммерчески жизнеспособны [1, 2]. Разработка и совершенствование CuBr-лазеров рассматривается как фундаментальный шаг в исследовании медных лазеров в целом.

Лазеры на парах бромида меди представляют собой источники импульсного излучения в видимом спектре (400-720 нм), излучающего на двух длинах волн: зеленой, 510,6 нм, и желтой, 578,2 нм. Они считаются высокоимпульсными лазерами. Неон используется как буферный газ. Для повышения эффективности добавляется небольшое количество водорода. В отличие от высокотемпературного лазера на чистых парах меди, лазер на парах бромида меди является низкотемпературным, с температурой активной зоны около 500 ° C. Лазерная трубка изготовлена из кварцевого стекла без высокотемпературной керамики, в результате чего она значительно дешевле и проще в изготовлении.Разряд нагревается электрическим током (самонагревающийся лазер). Он выдает световые импульсы длительностью в десятки наносекунд. Его основные преимущества — короткий начальный период нагрева, стабильная генерация лазера, относительно длительный срок службы, высокие значения выходной мощности и эффективность лазера. Простая схема лазера представлена на рисунке 1.

Конкретные технические параметры исследованных лазеров на парах бромида меди приведены в таблице 1.

3. Описание данных

В этой статье учитываются следующие 10 независимых входных переменных (предикторов) и одна зависимая переменная (отклик) — выходная мощность лазера Pout (Вт).Независимый

510,6 и 578,2 нм Импульсно-периодические, самонагревающиеся 10-125 кГц 1,4-2 Вт / см3

500 ° С

20-50 нс 1-125Вт

> 1000 часов 6,9 мДж

500-550 ° С

10-15 мин

Кварцевая трубка, внешние электроды, резервуары с бромидом меди

Таблица 2: Описательная статистика экспериментальных данных CuBr-лазера.

Минимум Максимум Среднее Стандартное. отклонение асимметрия эксцесс

Статистика Статистика Статистика Статистика Статистика Станд. ошибка Статистика Станд. ошибка

D (мм) 15,00 58,00 46,59 10,072 -0,809 0,12 1,451 0,25

DR (мм) 4,50 58,00 34,83 18,31 0,265 0,12 -1,602 0,25

PIN (кВт) 1,00 5,00 2,10 1,27 1,065 0,12 -0,321 0,25

L (см) 30.00 200.00 106.59 70.70 0,478 0,12 -1,670 0,25

PL (кВт / см) 5,00 16,67 10,92 2,51 -0,467 0,12 0,183 0,25

Ph3 (торр) 0,00 0,80 0,36 0,25 -0,416 0,12 -1,430 0,25

PRF (кГц) 3,20 125,50 23,24 25,69 3,589 0,12 11,530 0,25

PNE (торр) 8,00 250,00 22,56 24,17 6,389 0,12 46,454 0,25

C (нФ) 0,33 4,00 1,33 0,61 2,313 0,12 6,233 0,25

TR (° C) 350,00 590,00 478,22 23.25 -1,673 0,12 7,332 0,25

Pout (Вт) 0,25 120,00 34,024 35,57 0,808 0,12 -0,862 0,25

Действительный N 387

переменных: D (мм) — внутренний диаметр лазерной трубки, DR (мм) — внутренний диаметр кольца (без колец, D = D £), L (см) — длина активной зоны (расстояние между электродами). ), PIN (кВт) — электрическая мощность, подводимая к разряду, PL = P / N / L / 2 (кВт / см) — электрическая мощность на единицу длины с 50% потерями, PRF (кГц) — частота следования электрических импульсов, PNE (торр) — давление буферного газа (неон), Ph3 (торр) — давление добавляемого газа (водород), C (нФ) — эквивалентная емкость конденсационной батареи, а TR (° C) — температура резервуаров бромида меди.

В исследовании используются значения этих переменных, взятые из n = 387 экспериментов, опубликованных в [18-25]. Следует отметить, что максимальная достигнутая выходная мощность составляет Pout = 120 Вт в эксперименте, в котором для входных параметров были измерены следующие значения, как указано ранее: (58, 58, 200, 5, 12,5, 0,6,17,5, 20, 1.3 и 490) [24].

Статистическая сводка по всему набору приведена в таблице 2.

Следует отметить, что переменные не имеют нормального распределения, что наблюдается по значениям асимметрии и эксцесса.То же самое верно и для многомерного распределения данных. По этой причине более подходящими являются непараметрические методы, которые не имеют требований к типу распределения данных как в целом, так и для подмножеств.

4. Краткое описание метода КОРЗИНЫ

Алгоритм метода CART, как указано в названии, решает проблему классификации и регрессии. Он был разработан в период с 1974 по 1984 год Брейманом и др. [13].

CART — это метод непараметрического дерева решений, который строит деревья классификации или регрессии в зависимости от того, является ли зависимая переменная категориальной или числовой.В нашем случае это дерево регрессии.

Алгоритм предназначен для построения дерева бинарных решений. Первоначальный набор наблюдений делится на группы в конечных узлах (листьях) дерева. Цель состоит в том, чтобы найти дерево, которое позволяет хорошо распределить

данных с наименьшей возможной относительной ошибкой предсказания. Каждая ветвь дерева заканчивается одним или двумя конечными узлами, и каждое наблюдение попадает ровно в один конечный узел, определенный уникальным набором правил.

Более конкретно, цель подхода дерева регрессии состоит в том, чтобы распределить данные в относительно однородных (с минимальным методом наименьших квадратов или минимальным стандартным отклонением) конечными узлами и получить среднее наблюдаемое значение в каждом узле в форме прогнозируемого значения. Построение дерева начинается с корневого узла, содержащего все наблюдения. На каждом шаге (на каждом работающем узле) применяется правило для разделения набора наблюдений внутри узла на два подмножества (два дочерних элемента) в соответствии с некоторым условием для независимой переменной (предиктора) Xk типа

Xfc 0 ;, (1)

, где 0j — пороговое значение.Если данное наблюдение от текущего узла удовлетворяет левому неравенству в (1), оно классифицируется в группу в разбиении левого дочернего узла, а если нет, оно переходит в разбиение правого дочернего узла. Таким образом, разделение по узлам повторяется несколько раз, пока не будет достигнут конечный узел. Общий критерий выбора переменной-предиктора в каждом узле и ее порогового значения — это минимум наименьших квадратов или минимальное стандартное отклонение от всех возможных предикторов и всех возможных пороговых значений, начиная с текущего узла и данных подмножества.Определение данного узла как конечного зависит от минимальной ошибки, достигаемой в соответствии с заданным критерием минимального количества наблюдений или каким-либо другим типом ограничения [26, 27]. Наблюдения, которые попадают в данный узел дерева, определяются серией правил типа (1), начиная с корня дерева.

Проверка обычно применяется при построении деревьев регрессии, поскольку они могут быть чувствительны к случайным ошибкам в данных. Это помогает уменьшить, «обрезая» исходное дерево, сохраняя его регрессионные характеристики и точность.В случае меньшего количества наблюдений и переменных рекомендуется использовать статистический метод перекрестной проверки с V-кратностью. Этот метод проверки в CART позволяет построить

2 0,1 сВ>

0 25 50 75100125150175200225250275 Количество узлов

ATM.2 ATM.50

— ATM.5 ATM_100

Банкомат 10 Банкомат 200

ATM.25

Рисунок 2: Диаграмма относительных ошибок в линейных моделях для различного минимального числа случаев (ATM) в оконечных узлах.

Количество узлов

Рисунок 3: Кривая относительных ошибок линейных моделей CART с 10 предикторами.

очень надежные модели, превосходящие стандартные регрессионные модели. В общем случае CART применяет правило разделения наименьших квадратов для построения максимального дерева и процедуру перекрестной проверки для выбора оптимального дерева.

В этом исследовании мы использовали стандартную 10-кратную перекрестную проверку, рекомендованную для небольших выборок.Данные были случайным образом разделены на 10 равных непересекающихся подгрупп, каждая из которых содержит примерно 10% набора данных. Дерево было построено с использованием 9/10 данных (обучающая выборка), а оставшаяся 1/10 (тестовая выборка) была использована для прогнозирования и определения уровня ошибки. Процесс построения дерева повторяется 10 раз, и за общую оценку принимается средняя ошибка 10 серий. Эта процедура обеспечивает точную оценку зависимой переменной и позволяет использовать дерево для классификации или регрессии другого набора данных.

Оценка y [T] для значения прогноза в конечном узле с номером r является средним значением всех измерений для зависимой переменной y, которые попадают в следующий узел:

= fk ‘yk 6 T- (2)

5. Linear CART Модель выходной мощности

Сначала мы построим и проанализируем линейную модель, то есть, где предикторами являются независимые переменные, участвующие только с их первой степенью, как описано в разделе 3.

Модель CART была построена для определения взаимосвязи между выходной мощностью лазера и 10 базисными входными переменными лазера. Минимальное количество наблюдений установлено на уровне 10 для родительских узлов и 5 для конечных узлов. Это было установлено с помощью специальной функции Battery ATOM программного обеспечения CART [15, 28]. Сравнительная диаграмма относительной погрешности моделей с заданным количеством оконечных узлов показана на рисунке 2. Видно, что минимум 2 и 5 случаев в оконечном узле дают почти одинаковую относительную ошибку меньше 2.5%.

Еще одна конкретная цель нашего исследования — построить дерево, которое классифицирует и предсказывает скважинные эксперименты с высокими значениями выходной мощности. По этой причине в дальнейшем мы сосредоточимся на узле, который содержит наибольшие значения выходной мощности Pout.

Чтобы указать дерево и его обратное сокращение, чтобы найти дерево с оптимальной небольшой относительной ошибкой для данных, мы применяем 10-кратную процедуру перекрестной проверки, описанную в разделе 4.

Установив минимальное количество наблюдений в конечных узлах, равное 5 и 10 для родительского узла, и установив критерий классификации / регрессии на наименьшие квадраты, можно найти оптимальное дерево регрессии. На практике существует подмножество деревьев, которые демонстрируют характеристики точности, статистически неотличимые от оптимального дерева. Все эти модели также являются кандидатами в оптимальные модели. Это называется «1 стандартной ошибкой» или правилом 1 SE для идентификации этих деревьев [28].В этом исследовании мы выберем дерево 1 SE, которое имеет ту же производительность, что и оптимальное дерево в поддереве с максимальной выходной мощностью, и имеет простейшую структуру с минимальным количеством конечных узлов.

Кривая относительных ошибок сгенерированных моделей, включая оптимальную модель с наименьшей ошибкой, показана на рисунке 3. Можно видеть, что это оптимальное дерево с 49 конечными узлами и 3,0% относительной ошибки. После изучения всех других моделей, следующих правилу 1 SE (отображается зеленым цветом), мы находим дерево с 27 конечными узлами с минимальным количеством конечных узлов и одинаковой производительностью в узлах горячей точки с максимальной выходной мощностью Pout.

Выбранная регрессионная модель CART с 27 конечными узлами составляет R2 = 98,1% выборки после 10-кратной процедуры перекрестной проверки. Относительная погрешность составляет 3,1%.

Подробная конкретная информация об узле горячей точки t = 22 показана на рисунке 4. Этот узел содержит наивысшие значения мощности со стандартным отклонением STD = 9,64 и локальной среднеквадратичной ошибкой RMS = 4,876. Значение, предсказанное регрессией с использованием формулы (2), является средним значением ответа

PÓut [22] = 113.333 Вт. (3)

Это приближение находится в пределах 6% относительной погрешности по отношению к максимуму эксперимента, а стандартное отклонение является относительно высоким, что не является достаточно удовлетворительным, поскольку оно сопоставимо, но все же остается высоким в отношении неизбежной ошибки эксперимента, которая считается 5-10%.

На рисунке 5 показаны все разделители, использованные для построения выбранного дерева с 27 конечными узлами. Для всех оконечных узлов соответствующие правила классификации локального разделения приведены в

120-100-80 —

3 60–

40-20 0 —

Узел 23 C <1.45 STD = 10,011 Ср. = 104,667

Вт = 21,00 N = 21

Узел 24 PIN <4,75 STD = 8,46,0 Среднее значение = 110,417 Вт = 12,00 N = 12

PIN> 4,75 _I_

Терминальный узел 22 STD = 9,638 Avg = 113,333 W = 6,00 N = 6

Терминал

Узел 23 STD = 5,963 Ср. = 97,000 Вт = 9,00 N = 9

O yV / Вт

<0> mcmcs / o

совм / о

coywm.

линейный R2 = 0,981

60 Pout (Вт)

PIN <4,75 _I_

Терминальный узел 21 STD = 5,766 Avg = 107,50 W = 6,00 N = 6

Рисунок 4: Специфические характеристики узлов с максимальными значениями выходной мощности Pout и конечного узла 22 горячей точки в линейной модели CART с 10 предикторами и 27 конечными узлами.

Рисунок 5: Распределение разделителей для каждого узла в регрессионной модели CART с 10 предикторами и 27 конечными узлами.

Рис. 6. Экспериментальные значения Pout по сравнению с прогнозируемым PredPout с использованием модели линейной регрессии CART с 10 предикторами и 27 конечными узлами с 5% доверительным интервалом.

Таблица 3. Для узла 22, который представляет особый интерес, через сечение локальных правил мы находим три переменные PIN, C и PR, ограниченные следующим образом:

Узел 22: P / N> 4,75 кВт,

C <1,45 нФ, 14,5 кГц

Общее качество аппроксимации с помощью дерева регрессии показано на рисунке 6, где показаны экспериментальные значения выходной мощности Pout в сравнении с предсказанными линейной моделью. Можно добавить, что остатки выбранной модели распределены нормально и тяжелых хвостов не обнаружено.

6. Модель выходной мощности CART с использованием предикторов до второй степени

Для построения CART-дерева, включающего полиномы до второй степени, из 10 независимых переменных мы формируем 65 предикторов следующего типа:

XtXj, i> j, i, j = 1,2 ,…, 10, (5)

, где переменные для простоты использования обозначают входные параметры лазера, указанные в разделе 3. Аналогично линейному случаю мы строим двоичное дерево решений с ограничениями: минимум 10 наблюдений на родительский узел и минимум 5 для конечных узлов. . График распределения относительной ошибки для всех полученных деревьев представлен на рисунке 7. Видно, что оптимальное дерево с относительной ошибкой 3,8% находится с 62 конечными узлами.

Для сравнения с линейной моделью мы снова выбрали дерево с 27 конечными узлами.Он удовлетворяет критериям выбора, как и в линейном случае. Точнее, относительная погрешность этой модели составляет 4,1% (см. Рисунок 7). Статистика и правила

Математические проблемы в инженерии Таблица 3: Статистика для линейной модели CART Pout с 27 конечными узлами и 10 предикторами.

Конечный узел Минимальный Pout Максимальный Pout Среднее значение Наблюдения Правила классификации разделения

1 0,4 2,8 159 17 P7N <1,95 DR <30 Ph3 <0.0465 TR <432

2 0,5 6,2 4,29 82 P7N <1,95 DR <30 Ph3 <0,0465 TR> 432

3 12,8 19 15,43 14 P7N <1,95 DR <30 Ph3> 0,0465 TR <482,5 D <43 PMF <16

4 5,8 11,5 9,08 6 P7N <1,95 PNF <17,5 DR <30 Ph3> 0,0465 TR <482,5 D <43 PMF> 16

5 1,6 10,8 6,92 5 P7N <1,95 DR <30 Ph3> 0,0465 PMF <17,5 TR <482,5 D> 43

6 5 10.9 8,33 62 P7N <1,95 DR <30 Ph3> 0,0465 PMF <17,5 TR> 482,5

7 0,25 8,27 3,95 22 P7N <1,95 DR <30 Ph3> 0,0465 PMF> 17,5

8 16,8 32 22,94 35 P7N <1,95 DR> 30

9 36 51,8 46 11 P7N> 1,95 P7M <2,45

10 53 73 63,91 20 C <1,75 P7N> 2,45 P7N <2,85

11 70 90 80,33 6 P7N> 2,85 P7M <3,15 C <1.45 PRF <16,25

12 88 92 89,2 5 P7N> 2,85 P7M <3,15 C <1,45 PRF> 16,25 PRF <18

13 60 90 74,2 5 P7N> 2,85 P7M <3,15 C <1,45 PRF> 18

14 55 70 63,88 8 P7N> 2,85 P7M <3,15 C> 1,45 C <1,75

15 35 50 44,29 7 P7N> 2,45 P7M <3,15 C> 1,75

16 64 96 80,56 9 P7N> 3,15 C <1,75 PRF <14,5

17 90 102 97.83 6 PRF> 14,5 PRF <20,5 P7M> 3,15 P7M <3,75 C <1,15

18 80 94 88,6 5 PRF> 14,5 PRF <20,5 P7M> 3,15 P7M <3,75 C> 1,15 C <1,45

100 6 PRF> 14,5 PRF <20,5 C <1,45 P7M> 3,75 P7M <4,25

20 76 96 87,33 6 PRF> 14,5 PRF <20,5 P7M> 3,15 P7M <4,25 C> 1,45 C <1,75

21 98112107,5 6 PRF> 14,5 PRF <20.5 C <1,45 P7M> 4,25 P7M <4,75

22 94120113,33 6 PRF> 14,5 PRF <20,5 C <1,45 PIN> 4,75

23 85102 97 9 PRF> 14,5 PRF <20,5 P7M> 4,25 C> 1,45 C <1,75

24 58 82 68,5 8 P7M> 3,15 C <1,75 PRF> 20,5

25 45 76 63,38 8 C> 1,75 P7M> 3,15 P7M <4,25

26 57 82 73,83 6 C> 1,75 P7M> 4,25 P7M <4. FC, P £ F • TR и PNF • C.

Подробный вид узлов горячей точки с максимальными значениями Pout представлен на рисунке 8.

Узел с наивысшими значениями — номер 20 (см. Рисунок 8). Достигнуты следующие значения приближения и точности: среднее значение, прогнозируемое для листа, составляет

Pout [20] = 114,86 Вт, (6)

, стандартное отклонение составляет 6,22, а RMS = 4,035 в пределах листа. Модель описывает R2 = 98,710% выборки.Аппроксимация (6) находится в пределах 4% относительной погрешности по отношению к максимуму эксперимента, также допустима стандартная погрешность. Таким образом, показатели данной модели удовлетворительны с погрешностью эксперимента, находящейся в пределах 5-10%. Правила разделения для узла 20 следующие:

Узел 20: D • PIN> 86,

PIN> 3,15, P £ F • C <26,5,

P £ F <19,25,

PIN • P £ F> 76,875.

Таблица 4: Статистика для модели Pout CART с 27 конечными узлами и 65 предикторами.

1 0,4 7 3,87 116 D • P7N <86 DR <30 DR • Ph3 <1,6875

2 12,8 19 15,43 14 D • P7N <86 DR <30 DR • Rh3> 1,6875 D • TR <19214 PNF <16

3 5,8 11,5 9,08 6 D • P7N <86 DR <30 DR • Rh3> 1,6875 D • TR <19214 PNF> 16

4 0,25 10.9 7,89 72 D • P7N <86 DR <30 DR • Rh3> 1,6875 D • TR> 19214

5 16,8 30,9 23,68 32 D • P7N <86 DR> 30 P7N • TR <787,5

6 23 41 31,4 5 D • P7N <86 DR> 30 P7N • TR> 787,5

7 40 51 47,15 8 C <1,75 D • P7N> 86 D • P7N <135 P7N <2 • 35

8 51,8 58 55,4 5 C <1,75 D • P7N> 86 D • P7N <135 P7N> 2,3 P7N <3,15

9 55 72 62.6 5 P7N <3,15 C <1,75 D • P7N> 135 P7N • PRF <47,75 PRF <14,75

10 63 81 71,67 12 P7N <3,15 C <1,75 D • P7N> 135 P7N • PRF <47,75 PRF> 14,75 PRF <20,25

11 88 92 89,14 7 P7M <3,15 D • P7M> 135 P7M • PRF> 47,75 C <1,45 PRF <18

12 64 90 76,4 5 P7M <3,15 D • P7M> 135 P7M • PRF> 47,75 C <1,45 PRF> 18 PRF <20,25

13 60 70 67.6 5 P7M <3,15 D • P7M> 135 PRF <20,25 P7M • PRF> 47,75 C> 1,45 C <1,75

14 53 62 57,67 6 P7M <3,15 C <1,75 D.P7M> 135 PRF> 20,25

15 35 50 44,29 7 D • P7M> 86 P7M <3,15 C> 1,75

16 64 91 78,29 8 D • P7M> 86 P7M> 3,15 PRF • C <26,5 P7M • PRF <56,875

17 90 104 98,23 13 D • P7M> 86 P7M> 3,15 PRF • C <26,5 PRF <19.25 P7M • C <6,85

P7M • PRF> 56,875 P7M • PRF <68,75

18 96112 105,67 6 D • P7M> 86 P7M> 3,15 PRF • C <26,5 PRF <19,25 P7M • C <6,85

P7M • PRF> 68,75 P7M • PRF <76,875

19 80100 фут-фут 5 D • P7M> 86 P7M> 3,15 PRF • C <26,5 PRF <19,25

88,8 P7M • PRF> 56,875 P7M • PRF <76,875 P7M • C> 6,85

20 102 120 114.86 7 D PIN> 86 PIN> 3,15 PRF • C <26,5 PRF <19,25 PIN PRF> 76.

21 68 98 86,67 6 D • P7M> 86 P7M> 3,15 PRF • C <26,5 P7M • PRF> 56,875 PRF> 1

22 45 80 58,5 6 D • P7M> 86 PRF • C> 26,5 P7M> 3,15 P7M <3,75

23 96 102 99,33 6 D • P7M> 86 PRF • C> 26,5 P7M> 3,75 PRF <19 C <1,75

24 60 76 70,67 6 D • P7M> 86 PRF • C> 26.5 P7M> 3,75 PRF <19 C> 1,75 P7M • PRF <71

25 76 90 84,13 8 D • P7M> 86 PRF • C> 26,5 P7M> 3,75 PRF <19 C> 1,75 P7M • PRF> 71

26 70 85 77,6 5 D • P7M> 86 P7M> 3,75 PRF> 19 PRF • C> 26,5 PRF • C <32,8

27 57 77 66,33 6 D • P7M> 86 P7M> 3,75 PRF> 19 PRF • C> 26,5 PRF • C <32,8

Общая диаграмма распределения древовидных разделителей по переменным показана на рисунке 9.

На рисунке 10 сравниваются значения Pout со значениями, предсказанными деревом регрессии в переменной PredP out „quadratic. Можно добавить, что, как и в линейном случае, остатки выбранной модели распределены нормально и тяжелых хвостов не обнаружено.

7. Обсуждение результатов и сравнение моделей

В полученной линейной модели из 10 независимых физических параметров только 6 участвуют в построенном дереве регрессии.Этими определяющими параметрами являются

F / N, C, Fh3, F £ F и FNF. (8)

Как показано на рисунке 5, когда случаи (эксперименты) разделены, образуются три основные ветви третьего уровня, соответствующие в значительной степени трем типам физической классификации медных лазеров — лазеры с малым, средним и большим отверстием [1 ]. Из параметров (8) PIN — самая важная величина. Он является корнем дерева и впоследствии участвует еще в 4 узлах, связанных с классификацией средних и высоких значений мощности лазера Pout.Для более низких значений мощности (вдоль левой конечной ветви на рисунке 5) определяющими параметрами являются PIN, DR, Ph3 и PNE. Для средних значений мощности — PIN и C. Для высокой мощности это PIN, C и PRF соответственно.

Анализ модели дерева второй степени (рисунок 9) показывает, что на третьем уровне есть 4 группы, 3 из которых большие, как в случае на рисунке 3, но вторая группа из них не имеет продолжения и практически не имеет продолжения. базовые группы — 3. В этом случае определяющие параметры помимо (8) также включают D,

Узел 19 P / N-PRF <76.88 STD = 10,243 Ср. = 101,903 W = 31,00 N = 31

PJN-FRF <76,88

PJN-FRF> 76,88

Узел 20 PJN-C <6,85 STD = 7,812 Ср. = 98,125 Вт = 24,00 N = 24

PJN-C <6,85

Узел 21 PJN-FRF <68,75 STD = 5,870 Avg = 100,579 W = 19,00 N = 19

Терминал

Узел 20

STD = 6,220 В среднем = 114.857 Вт = 7,00 N = 7

FJN-C> 6,85

Терминальный узел 19 STD = 7,222 Ср. = 88,800 Вт = 5,00 N = 5

PJN-FRF <68,75 PJN-FRF> 68,75

Терминал Терминал

Узел 17 Узел 18

STD = 4,509 STD = 5,217

Ср. = 98,231 Ср. = 105,667

Вт = 13,00 Вт = 6,00

N = 13 N = 6

Рисунок 8: Специфические характеристики узлов горячей точки с максимальными значениями выходной мощности Pout в модели CART с 65 предикторами и 27 конечными узлами.

Рисунок 9: Разделители для дерева CART с 27 конечными узлами для 65 предикторов.

L и TR. Из них D является более значимым, поскольку он участвует вместе с PIN-кодом в корне дерева, а также в другом узле, но не сам по себе. Принимая во внимание более слабый прогноз, предлагаемый моделью второй степени, можно сделать вывод, что

эти 3 параметра являются вспомогательными и, следовательно, второстепенными по значению с точки зрения классификации выборки.

Изучив прогностические возможности обеих моделей, мы можем сделать вывод, что линейная модель и модель второй степени

Pout (Вт)

Рис. 10. Экспериментальные значения Pout и PredPoutquadratic со значениями, предсказанными с использованием модели CART для 27 терминальных узлов второй степени с 5% доверительным интервалом.

почти эквивалентны. Они достаточно хорошо описывают различные группы классифицированных случаев и предсказывают значения для узлов с максимальной выходной мощностью в пределах относительной ошибки менее 5%.Поскольку модель второй степени аналогична по структуре и лучше предсказывает группу с более высокими значениями выходной мощности, она рекомендуется для инженерных приложений, направленных на увеличение выходной мощности. Однако результаты обеих моделей можно объединить для планирования эксперимента. Еще одно важное сравнение можно провести с моделями, полученными с помощью другого мощного непараметрического метода — MARS. Для тех же данных модели MARS второй степени также совпадают с 98-99% данных, но более точны в предсказании выходной мощности лазера, чем модели CART (см. [12]).Преимущество моделей CART состоит в том, что они предоставляют более точные критерии для классификации отдельных экспериментальных групп, которые имеют особое практическое применение.

8. Физическая интерпретация и применение моделей

Мы также обсудим влияние в рамках моделей основных параметров, которые определяют высокие значения Pout, а именно PIN, C и PRF.

Влияние PIN: когда подводимая электрическая мощность PIN увеличивается, энергия электронов возрастает.Это приводит к более высокой вероятности заселения верхнего лазерного уровня. Генерация лазера Pout увеличивается.

Влияние C: когда C увеличивается, электрическая мощность, подводимая к разряду, увеличивается по формуле E = 0,5U2C, где U — напряжение между электродами. Это приводит к увеличению подводимой электрической мощности PIN в трубке и, как следствие, к генерации лазера.

Влияние PRF: при увеличении частоты питания увеличивается и частота излучения генерации лазера.Количество лазерных импульсов в единицу времени (1 секунда) больше, что способствует увеличению средней мощности генерации лазера.

Обеспечение совместного действия этих основных процессов в заданных условиях (8) находит практическое применение при планировании и проведении новых экспериментов по увеличению выходной мощности CuBr-лазера.

9. Заключение

Для лазера на парах бромида меди были построены модели

регрессии на основе дерева CART, которое классифицирует группы подобных экспериментов.Для классифицированных групп были определены переменные, которые играют основную роль в увеличении выходной мощности лазера, а также интервалы, в которых они должны находиться при проведении будущих исследований и разработке лазерных источников того же типа для улучшения лазерной технологии.

Благодарность

Эта статья опубликована в сотрудничестве с проектом Министерства образования, молодежи и науки Болгарии, BG051PO001 / 3.3-05-0001 «Наука и бизнес» и финансируется Европейским социальным фондом в рамках Оперативной программы «Развитие человеческих ресурсов».

Список литературы

[1] Н. В. Саботинов, «Лазеры на парах металлов», в газовых лазерах, М. Эндо и Р. Ф. Вальтер, ред., Стр. 449-494, CRC Press, Бока-Ратон, Флорида, США, 2006.

[2] П. Г. Фостер, Промышленное применение лазерной технологии на основе бромида меди [Ph.D. диссертация], Университет Аделаиды, Школа химии и физики, Департамент физики и математической физики, Аделаида, Австралия, 2005.

[3] М.Дж. Кушнер и Б. Э. Уорнер, «Лазеры на парах меди с большими отверстиями: кинетика и проблемы масштабирования», Журнал прикладной физики, вып. 54, нет. 6. С. 2970-2982, 1983.

[4] «Численное моделирование низкотемпературной плазмы», в Энциклопедии низкотемпературной плазмы, серия B, M. Ianus, Ed., Vol. 7, Москва, Россия, 2004.

[5] Бойченко А.М., Евтушенко Г.С., Торгаев С.Н. Моделирование CuBr-лазера // Лазерная физика. 18, нет. 12. С. 1522-1525, 2008.

[6] С. Г. Гочева-Илиева, И. П. Илиев, Статистические модели характеристик лазеров на парах металлов, Nova Science Publishers, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США, 2011.

[7] И. П. Илиев, С. Г. Гочева-Илиева, Д. Н. Астаджов, Н. П. Денев, Н. В. Саботинов, «Статистический анализ повышения эффективности CuBr-лазера», Оптика и лазерная техника, т. 40, нет. 4. С. 641-646, 2008.

[8] И.П. Илиев, С.Г. Гочева-Илиева, Д.Н.Астаджов, Н. П. Денев, Н. В. Саботинов, «Статистический подход к планированию экспериментов с лазером на парах бромида меди», Квантовая электроника, т. 38, нет. 5. С. 436-440, 2008.

[9] Илиев И.П., Гочева-Илиева С.Г., Саботинов Н.В. Классификационный анализ параметров CuBr-лазера // Квантовая электроника. 39, нет. 2. С. 143-146, 2009.

[10] Гочева-Илиева С.Г., Илиев И.П. Параметрические и непараметрические эмпирические регрессионные модели: на примере генерации лазера на бромиде меди // Математические проблемы техники.2010 г., идентификатор статьи 697687, 15 стр., 2010 г.

[11] С.Г. Гочева-Илиева, И.П. Илиев, «Нелинейная регрессионная модель генерации лазера на бромиде меди», в материалах 19-й Международной конференции по вычислительной статистике (COMPSTAT ’10), ред. Ю. Лешевалье и Г. Сапорта, стр. 1063-1070, Электронная книга Physica / Springer, Париж, Франция, август 2010 г., http://www-roc.inria.fr/axis/COMPSTAT2010/images/ contents_ebook.pdf.

[12] И.П. Илиев, Д.С. Войникова, С.Гочева-Илиева Г. Моделирование выходной мощности лазеров на бромиде меди методом МАРС // Квантовая электроника. 42, нет. 4. С. 298-303, 2012.

[13] Л. Брейман, Дж. Х. Фридман, Р. А. Олшен и К. Дж. Стоун, Деревья классификации и регрессии, Wadsworth Advanced Books and Software, Белмонт, Калифорния, США, 1984.

[14] Д. Стейнберг и П. Колла, CART: Древовидный анализ непараметрических данных, Salford Systems, Сан-Диего, Калифорния, США, 1995.

[15] CART Классификация и деревья регрессии. Октябрь 2012 г., http://www.salford-systems.com/en/products/cart.

[16] Н. В. Саботинов, П. К. Тельбизов, С. Д. Кальчев, Лазер на парах бромида меди. Патент Болгарии № 28674, 1975 г.

[17] Н. В. Саботинов, Н. К. Вучков, Д. Н. Астаджов, «Газовая лазерная разрядная трубка с парами галогенида меди», Патент США 4635271, 1987.

[18] Д.Н. Астаджов, Н. В. Саботинов, Н. К. Вучков, «Влияние водорода на мощность и эффективность CuBr-лазера», Optics Communications, вып. 56, нет. 4. С. 279-282, 1985.

[19] Д. Н. Астаджов, К. Д. Димитров, К. Э. Литтл, Н. В. Саботинов и Н. К. Вучков, «CuBr-лазер со средней выходной мощностью 1,4 Вт / см3», IEEE Journal of Quantum Electronics, vol. 30, нет. 6. С. 1358-1360, 1994.

[20] В. М. Стойлов, Д. Н. Астаддов, Н. К. Вучков, Н. В. Саботинов, «10 W-CuBr-лазер высокой пространственной интенсивности с добавками водорода», Оптическая и квантовая электроника.32, нет. 11. С. 1209-1217, 2000.

[21] SfP по контракту НАТО, 97 2685,50 Вт Лазер на бромиде меди, 2000 г.

[22] Д. Н. Астаджов, К. Д. Димитров, Д. Р. Джонс и др. «Влияние на рабочие характеристики масштабных отпаянных CuBr-лазеров по активной длине», Optics Communications, vol. 135, нет. 4-6, pp. 289-294, 1997.

[23] К. Д. Димитров, Н. В. Саботинов, «Мощный и высокоэффективный лазер на парах бромида меди», в 9-й Международной школе по квантовой электронике: Лазеры — физика и приложения, т.3052 из Proceedings ofSPIE, pp. 126-130, 1996.

[24] Д. Н. Астаджов, К. Д. Димитров, Д. Р. Джонс и др. «Лазер на бромиде меди со средней выходной мощностью 120 Вт», IEEE Journal of Quantum Electronics, vol. 33, нет. 5. С. 705-709, 1997.

[25] Н. П. Денев, Д. Н. Астаджов, Н. В. Саботинов, «Анализ эффективности лазера на бромиде меди», в материалах 4-го Международного симпозиума по лазерным технологиям и лазерам, стр. 153-156, Пловдив, Болгария, 2006.

[26] А. Дж. Изенман, Современные методы многомерной статистики, регрессия, классификация и обучение многообразию, Спрингер, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США, 2008.

[27] Р. Нисбет, Дж. Элдер и Г. Майнер, Справочник по приложениям статистического анализа и интеллектуального анализа данных, Elsevier / Academic Press, Берлингтон, Массачусетс, США, 2009.

[28] Д. Стейнберг и М. Головня, Руководство пользователя CART6.0, Salford Systems, Сан-Диего, Калифорния, США, 2006.

Авторское право журнала Mathematical Problems in Engineering является собственностью Hindawi Publishing Corporation, и его содержание не может быть скопировано или отправлено по электронной почте на несколько сайтов или размещено в рассылке без письменного разрешения правообладателя.Однако пользователи могут распечатывать, загружать или отправлять по электронной почте статьи для индивидуального использования.

Как правильно пишется имя Снежана или Снежанна?

значение и происхождение, характеристика имени и влияние на судьбу / Mama66.ru

Происхождение, история имени

Значение

Судьба

Характер

Именины

Цвет имени

Цветок имени

Церковное имя, святцы

Перевод имени, на разных языках

Полное имя, сокращенное и ласковое

К каким именам подходит отчество

Совместимость имен

Склонение имени

Известные люди с именем Снежана

Полезное видео про значение имени Снежана

Русские имена на английском языке

Правила транслитерации

Мужские имена:

Женские имена:

«Анестезиологом, как мне кажется, рождаются» — Зооинформ

Как пишется имя снежанна?

Снежана

Геннадий

Анастасия

Толкование имени

Внешний облик

Совместимость имени Снежа, проявление в любви

Мотивация

Характеристика имени Снежа

Читайте также:

Красноярск | КРАСИВОЕ И НЕОБЫЧНОЕ ИМЯ ДЛЯ ДЕВОЧКИ

Ma name is Snezhana n I’m proud of it.: die_laute — LiveJournal

майское обострение

5 вещей и явлений, за которые я не люблю Америку

Пять историй пяти квартир

Как правильно писать имя Снежана или Снежанна?

Компромисс между ликвидностью и прибыльностью: эмпирическое исследование фармацевтического сектора в Республике Северная Македония

Рекомендации

Индуцированное искривлением изгнание пучков актомиозина во время цитокинетического сокращения кольца

Сконструированный флавопротеин как репортер для экспрессии и очистки белков

Abstract

Введение

Материалы и методы

Клонирование и конструирование

Высокопроизводительный тест на экспрессию флуоресцентного белка

Представление данных

Масштабирование экспрессии и очистки

Расщепление и разделение метки His-iLOV

Тестирование функциональности EspG при слиянии с iLOV

Результаты

Дизайн вектора экспрессии pET-iLOV

Экспрессия белков, меченных iLOV

Подтверждающие детали конструкции — расщепление протеазой C3

Подтверждение незначительного влияния тега iLOV на функцию белка

Обсуждение

Вклад авторов

Список литературы

Спасение рекомбинантного вируса Зика из инфекционного клона кДНК и его значение для разработки вакцины in vivo

Пожилые люди связывают узел — не надо! | Новости

Добавить комментарий Отменить ответ